【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每50μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(6倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每50μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(6倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 溴酚蓝作为指示剂，用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(五倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【概述】 本品是通用型磷酸酶抑制剂，可用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(包括ß-Glycerophosphate Imidazole，Sodium fluoride，Sodium molybdate，Sodium orthovanadate，Sodium tartrate dihydrate等)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶等(acid, alkaline, Ser/Thr and Tyr phosphatases)。 【使用方法（仅供参考）】 1. 本磷酸酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl磷酸酶抑制剂混合物)（1ml 磷酸酶抑制剂可以配套100ml裂解液使用），混匀后即可使用。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 可配合蛋白酶抑制剂复合物（ES-8135）使用。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【概述】 本品是通用型磷酸酶抑制剂，可用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(包括ß-Glycerophosphate Imidazole，Sodium fluoride，Sodium molybdate，Sodium orthovanadate，Sodium tartrate dihydrate等)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶等(acid, alkaline, Ser/Thr and Tyr phosphatases)。 【使用方法（仅供参考）】 1. 本磷酸酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl磷酸酶抑制剂混合物)（1ml 磷酸酶抑制剂可以配套100ml裂解液使用），混匀后即可使用。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 可配合蛋白酶抑制剂复合物（ES-8135）使用。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 10×裂解缓冲液LBH稀释：用无菌去离子水稀释10倍，如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）。 哺乳动物细胞核蛋白提取： 1. 细胞收集（106–107个）：对于贴壁细胞（70-90%汇合单层培养）：从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次（注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落），吸去PBS，使用胰酶消化或刮刀（使用新鲜PBS）将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用（若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除）。 对于悬浮细胞：将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液，用PBS洗涤细胞1-2次，将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）并在冰上孵育15分钟，让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL（每100μL混合物加入6μL），剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中，上清液为是细胞质部分，沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白： 1. 准备1×裂解缓冲液LBH（如前所述，使用前加入相应蛋白酶抑制剂） 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次，丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH（裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂）中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎，细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管，该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 10×裂解缓冲液LBH稀释：用无菌去离子水稀释10倍，如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）。 哺乳动物细胞核蛋白提取： 1. 细胞收集（106–107个）： 对于贴壁细胞（70-90%汇合单层培养）：从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次（注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落），吸去PBS，使用胰酶消化或刮刀（使用新鲜PBS）将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用（若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除）。 对于悬浮细胞：将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液，用PBS洗涤细胞1-2次，将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）并在冰上孵育15分钟，让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL（每100μL混合物加入6μL），剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中，上清液为是细胞质部分，沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白： 1. 准备1×裂解缓冲液LBH（如前所述，使用前加入相应蛋白酶抑制剂） 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次，丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH（裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂）中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎，细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管，该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

产品组成 FastPure Gel Extraction Kit 产品编号 EK-1104-50T EK-1104-100T 纯化次数 50次 100次 Buffer QG 30ml 60ml Buffer PB 30ml 60ml Buffer PW 12ml 24ml Buffer EB 10ml 20ml Gel Spin Columns 50 100 2ml Collection Tubes 50 100 使用手册 1 1 产品介绍 本试剂盒采用可高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收70bp-10kbp大小的DNA片段，也可以用于各种PCR体系中DNA回收，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。 存储条件 该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。Buffer QG/PB可能产生沉淀，若有沉淀使用前可在55℃水浴中预热10 min以溶解。需要额外准备的材料 □ 无水乙醇（96%-100%）□ 无菌1.5ml离心管开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 □ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。□ 如下一步实验要求较高，核酸电泳时则应尽量使用TAE电泳缓冲液。□ 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。□ 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30µl 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7之间。□ 回收<70bp或>10kbp的DNA片段时，应加大Buffer QG的体积，延长吸附和洗脱时间。□ 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。开始前试剂准备 □ 按瓶子标签所示，加入4倍体积的无水乙醇稀释Buffer PW，于室温密封保存。□ 确认Buffer QG溶液显示为黄色。DNA浓度及纯度检测 l 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。l DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。l OD260/OD280比值应为1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。操作步骤： 一、琼脂糖回收DNA 1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离DNA片段。当DNA片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的DNA凝胶。 为避免DNA片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。2. 放入1.5ml离心管中并称取凝胶块的重量，加入3倍体积的Buffer QG（如凝胶称重结果为100mg，则其体积约等于100µl，应加入300µl Buffer QG）。 对于>2%的琼脂糖凝胶，添加6倍体积的Buffer QG。3. 50℃水浴10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。 注意：若回收<300bp的DNA片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA能力较强。4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的Buffer QG）。 如果混合物的颜色为橙色或紫色，则加入10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合，混合物的颜色会变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer QG含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。5. 将吸附柱套在2ml收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 6. 向吸附柱中加入500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。7. 重复操作步骤7一次。 8. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml 离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。 注意：Buffer PW中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。9. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。 注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可重复操作步骤10一次。二、从PCR反应液或者酶切反应中回收DNA 1. 将5倍体积的Buffer PB添加到1倍体积的PCR样品中，然后混匀。 例如，将500µl Buffer PB添加到100µl PCR样品（不包括油的体积），无需去除石蜡油或矿物油。2. 溶液完全溶解后，检查颜色是否为黄色。 如果混合物的颜色为红色，则加入10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合，混合物的颜色会变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer PB含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为红色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。3. 将吸附柱套在2ml收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 4. 向吸附柱中加入500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。5. 重复操作步骤4一次。 6. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。 7. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。

产品组成 FastPure Gel Extraction Kit 产品编号 EK-1104-50T EK-1104-100T 纯化次数 50次 100次 Buffer QG 30ml 60ml Buffer PB 30ml 60ml Buffer PW 12ml 24ml Buffer EB 10ml 20ml Gel Spin Columns 50 100 2ml Collection Tubes 50 100 使用手册 1 1 产品介绍 本试剂盒采用可高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收70bp-10kbp大小的DNA片段，也可以用于各种PCR体系中DNA回收，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。 存储条件 该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。Buffer QG/PB可能产生沉淀，若有沉淀使用前可在55℃水浴中预热10 min以溶解。 需要额外准备的材料 □ 无水乙醇（96%-100%） □ 无菌1.5ml离心管 开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 □ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。 □ 如下一步实验要求较高，核酸电泳时则应尽量使用TAE电泳缓冲液。 □ 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。 □ 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30µl 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7之间。 □ 回收<70bp或>10kbp的DNA片段时，应加大Buffer QG的体积，延长吸附和洗脱时间。 □ 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。 □ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。 开始前试剂准备 □ 按瓶子标签所示，加入4倍体积的无水乙醇稀释Buffer PW，于室温密封保存。 □ 确认Buffer QG溶液显示为黄色。DNA浓度及纯度检测 l 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 l DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。 l OD260/OD280比值应为1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 操作步骤： 一、琼脂糖回收DNA 1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离DNA片段。当DNA片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的DNA凝胶。 为避免DNA片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。 2. 放入1.5ml离心管中并称取凝胶块的重量，加入3倍体积的Buffer QG（如凝胶称重结果为100mg，则其体积约等于100µl，应加入300µl Buffer QG）。 对于>2%的琼脂糖凝胶，添加6倍体积的Buffer QG。 3. 50℃水浴10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。 注意：若回收<300bp的DNA片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA能力较强。 4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的Buffer QG）。 如果混合物的颜色为橙色或紫色，则加入10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合，混合物的颜色会变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer QG含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。 5. 将吸附柱套在2ml收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 6. 向吸附柱中加入500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。 7. 重复操作步骤7一次。 8. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml 离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。 注意：Buffer PW中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。 9. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。 注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可重复操作步骤10一次。 二、从PCR反应液或者酶切反应中回收DNA 1. 将5倍体积的Buffer PB添加到1倍体积的PCR样品中，然后混匀。 例如，将500µl Buffer PB添加到100µl PCR样品（不包括油的体积），无需去除石蜡油或矿物油。 2. 溶液完全溶解后，检查颜色是否为黄色。 如果混合物的颜色为红色，则加入10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合，混合物的颜色会变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer PB含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为红色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。 3. 将吸附柱套在2ml收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 4. 向吸附柱中加入500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。 5. 重复操作步骤4一次。 6. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。 7. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。