VisiColor Hoechst 33342活细胞染色液（即用型）

【保存条件】

-20℃避光保存，有效期1年。

【概述】

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为 350nm，最大发射波长为461nm。

本Hoechst 33342染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

【使用方法】

该产品使用时应室温解冻并充分摇匀。

1. 对于固定的细胞或组织：

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c. 吸除Hoechst 33342染色液，用PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或培养的组织：

a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于6孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。细胞发生凋亡时，在荧光显微镜下观察会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

【注意事项】

1. 本品为进口原料配制，成像与稳定效果更佳。

2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3. 为减缓荧光淬灭可以使用ES-8312抗荧光淬灭封片剂。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【参考文献】

1. Targeting a therapeutic LIF transgene to muscle via the immune system ameliorates muscular dystrophy. Steven S Welc et al. Nature communications, 10(1), 2788-2788 (2019)

2.  The transforming activity of Wnt effectors correlates with their ability to induce the accumulation of mammary progenitor cells. Liu BY, et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 101, 4158-4163 (2004)