产品描述
【保存条件】
-20ºC保存，有效期1年
【概述】
NP-40 裂解液是一种非变性、性质温和的去污剂基裂解液，主要利用 1% 的 NP-40 破坏细胞膜。
核心优势：与 RIPA 等强力裂解液相比，NP-40 不破坏蛋白质的三级结构和分子间相互作用。
适用场景：极适合用于需要维持蛋白活性的实验，如免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP)、酶活性分析及 ELISA 等。同时也兼容常规的SDS-PAGE和Western Blot。
样本兼容：广泛适用于动植物细胞/组织。配合溶菌酶或破壁酶后，亦可用于细菌和真菌样本。
【操作方法】
1. 准备工作
融解：裂解液可在室温或37°C快速融解，一旦融解必须立即置于冰上备用。
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如ES-8136）。
2. 培养细胞处理
1) 贴壁细胞：
① 吸除培养液，用冰冷 PBS 洗涤一次。按 6 孔板每孔加入 150–250 μL 裂解液（参考下表）。
② 移液器吹打数次，确保裂解液覆盖所有细胞，冰上孵育 2–10 分钟（植物细胞宜延长至 5–15 分钟）。
2) 悬浮细胞/微生物：
① 收集：离心收集细胞，弹击管底以分散细胞。
动物悬浮细胞：1,000–15,00×g离心5 分钟。细菌/酵母：4,000–6,000×g离心5分钟。弃上清，轻轻弹击管底使沉淀松动。
细菌/酵母建议先用溶菌酶或破壁酶（Lyticase）消化处理，以获得更高回收率。
② 清洗与裂解：用冰冷PBS洗涤一次，再次离心沉淀，弃尽残液，按比例加入含抑制剂的NP-40裂解液，冰上裂解5-10分钟。
3) 收集：10,000–14,000×g，4°C离心3–5分钟，取上清蛋白，推荐使用 BCA 法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。
3. 组织样品处理
① 预处理：将组织剪切成细小碎片。
② 比例：按照每 20 mg 组织加入 150–250 μL 裂解液的比例加入（含抑制剂）。
③ 破碎：使用玻璃匀浆器或组织研磨仪彻底粉碎（或采用液氮研磨法）。若组织极其微小，也可直接加入裂解液后强烈涡旋。冰上孵育10–15分钟。
④ 离心：10,000–14,000×g，4°C离心3–5分钟，取上清蛋白，推荐使用 BCA 法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。
【附表：不同培养器皿的裂解液参考用量】
为了达到最佳的裂解效果（通常蛋白浓度在2-4 mg/mL），细胞长满（100%汇合度）时建议参考下表进行加液：
培养器皿类型 | 培养面积（cm2） | 细胞数量(个) | 裂解液建议用量（μL） |
6 孔板 (每孔) | 9.5 | 1×106 | 150-250 |
3.5cm培养皿 | 8 | 1×106 | 150-250 |
6cm培养皿 | 21 | 2.5×106 | 500 |
10cm培养皿 | 55 | 7×106 | 1000 |
T25 培养瓶 | 25 | 3×106 | 500-600 |
【注意事项】
1. 全程冰上：蛋白降解酶在常温下活性剧增，所有裂解步骤必须在冰上或4℃进行。
2. 基因组DNA干扰：若裂解后粘度过大，提示基因组DNA释放。可适当延长离心时间或进行短暂的超声破碎处理（Ice bath, 20% power, 3–5 seconds）。
3. 蛋白浓度：动物细胞：100 万细胞约得2-4 mg/mL蛋白。组织样本：20 mg鼠肝约得15–25 mg/mL蛋白。
4. 安全防护：仅限于科研使用。操作时请佩戴实验服及一次性手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml、500ml
应用领域
本产品适用于ES-8140、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
-20ºC保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
-20℃ 保存，有效期12个月。融解：可在室温或 37℃ 快速融解，一旦融解必须立即置于冰上备用。提取后蛋白短期 4℃（1 天内做酶活/Co-IP）；长期 -80℃ 分装保存避免反复冻融。
与 RIPA / 其他温和裂解液的选择？
ES-8140（本品）：温和（仅 1% NP-40），最适合 Co-IP / 酶活检测；ES-8142（IP/WB 专用）：略温和但配方略有不同；ES-8146（Triton X-100）：温和（1% Triton X-100）；ES-8148/8149/8150 RIPA 三档：含离子型去垢剂，破坏蛋白互作但裂解强；ES-8151 SDS：最强力，仅适合 SDS-PAGE / WB / ChIP。选择：保留蛋白互作 → ES-8140；总蛋白 WB → RIPA / EK-6200；含 SDS WB → ES-8151。
可用于哪些下游应用？
免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、酶活性分析、ELISA，同时也兼容 SDS-PAGE 和 Western Blot。扩展应用：① Pull-down 实验（GST / His pulldown）；② 蛋白复合物纯化；③ 信号通路活性研究；④ 报告基因辅助分析；⑤ 蛋白激酶活性测定。
基因组 DNA 干扰怎么办？
基因组 DNA 干扰：若裂解后粘度过大，提示基因组 DNA 释放。可适当延长离心时间或进行短暂的超声破碎处理（Ice bath, 20% power, 3–5 seconds）。超声需冰浴防止温度上升变性蛋白。
典型蛋白浓度？
动物细胞：100 万细胞约得 2–4 mg/mL 蛋白。组织样本：20 mg 鼠肝约得 15–25 mg/mL 蛋白。——肝脏蛋白浓度高，下游 BCA 测量前需稀释 5–10 倍。
组织样品流程？
① 预处理：将组织剪切成细小碎片；② 比例：每 20 mg 组织 + 150–250 µL 裂解液（含抑制剂）；③ 破碎：使用玻璃匀浆器或组织研磨仪彻底粉碎（或采用液氮研磨法）。若组织极其微小，也可直接加入裂解液后强烈涡旋；④ 冰上孵育 10–15 min；⑤ 离心：10,000–14,000×g，4℃ 离心 3–5 min，取上清。
悬浮细胞与微生物如何处理？
① 悬浮细胞：1,000–1,500×g 离心 5 min 收集 + 弹击管底分散；② 细菌/酵母：4,000–6,000×g 离心 5 min + 建议先用溶菌酶或破壁酶（Lyticase）消化处理，以获得更高回收率；③ 清洗：用冰冷 PBS 洗涤一次，再次离心沉淀，弃尽残液，按比例加入含抑制剂的 NP-40 裂解液，冰上裂解 5–10 min；④ 离心：10,000–14,000×g，4℃ 离心 3–5 min，取上清。
贴壁与悬浮细胞用量？
对照表参考：① 6 孔板/3.5 cm 培养皿（1×10⁶ 细胞）：150–250 µL；② 6 cm 培养皿（2.5×10⁶）：500 µL；③ 10 cm 培养皿（7×10⁶）：1000 µL；④ T25 培养瓶（3×10⁶）：500–600 µL。贴壁细胞 PBS 洗一次后直接加裂解液 + 移液器吹打 + 冰上孵育 2–10 min（植物细胞宜延长至 5–15 min）。
抑制剂如何添加？
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如 ES-8136）。研究磷酸化蛋白必加 ES-8136 或直接用 ES-8137 一站式版本。严禁：含抑制剂的工作液长期存放。
本裂解液的核心特点？
NP-40 裂解液是一种非变性、性质温和的去污剂基裂解液，主要利用 1% 的 NP-40 破坏细胞膜。核心优势：与 RIPA 等强力裂解液相比，NP-40 不破坏蛋白质的三级结构和分子间相互作用。适用场景：极适合用于需要维持蛋白活性的实验，如免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、酶活性分析及 ELISA。同时也兼容常规的 SDS-PAGE 和 Western Blot。样本兼容：广泛适用于动植物细胞/组织。配合溶菌酶或破壁酶后，亦可用于细菌和真菌样本。
