ES-8140 NP-40细胞裂解液

【保存条件】

-20ºC保存，有效期1年

【概述】

NP-40 裂解液是一种非变性、性质温和的去污剂基裂解液，主要利用 1% 的 NP-40 破坏细胞膜。

核心优势：与 RIPA 等强力裂解液相比，NP-40 不破坏蛋白质的三级结构和分子间相互作用。

适用场景：极适合用于需要维持蛋白活性的实验，如免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP)、酶活性分析及 ELISA 等。同时也兼容常规的SDS-PAGE和Western Blot。

样本兼容：广泛适用于动植物细胞/组织。配合溶菌酶或破壁酶后，亦可用于细菌和真菌样本。

【操作方法】

1. 准备工作
融解：裂解液可在室温或37°C快速融解，一旦融解必须立即置于冰上备用。
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如ES-8136）。

2. 培养细胞处理

1) 贴壁细胞：

①　吸除培养液，用冰冷 PBS 洗涤一次。按 6 孔板每孔加入 150–250 μL 裂解液（参考下表）。

②　移液器吹打数次，确保裂解液覆盖所有细胞，冰上孵育 2–10 分钟（植物细胞宜延长至 5–15 分钟）。

2) 悬浮细胞/微生物：

①　收集：离心收集细胞，弹击管底以分散细胞。

动物悬浮细胞：1,000–15,00×g离心5 分钟。细菌/酵母：4,000–6,000×g离心5分钟。弃上清，轻轻弹击管底使沉淀松动。

细菌/酵母建议先用溶菌酶或破壁酶（Lyticase）消化处理，以获得更高回收率。

②　清洗与裂解：用冰冷PBS洗涤一次，再次离心沉淀，弃尽残液，按比例加入含抑制剂的NP-40裂解液，冰上裂解5-10分钟。

3) 收集：10,000–14,000×g，4°C离心3–5分钟，取上清蛋白，推荐使用 BCA 法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。

3. 组织样品处理

①　预处理：将组织剪切成细小碎片。

②　比例：按照每 20 mg 组织加入 150–250 μL 裂解液的比例加入（含抑制剂）。

③　破碎：使用玻璃匀浆器或组织研磨仪彻底粉碎（或采用液氮研磨法）。若组织极其微小，也可直接加入裂解液后强烈涡旋。冰上孵育10–15分钟。

④　离心：10,000–14,000×g，4°C离心3–5分钟，取上清蛋白，推荐使用 BCA 法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。

【附表：不同培养器皿的裂解液参考用量】

为了达到最佳的裂解效果（通常蛋白浓度在2-4 mg/mL），细胞长满（100%汇合度）时建议参考下表进行加液：

【注意事项】

1. 全程冰上：蛋白降解酶在常温下活性剧增，所有裂解步骤必须在冰上或4℃进行。

2. 基因组DNA干扰：若裂解后粘度过大，提示基因组DNA释放。可适当延长离心时间或进行短暂的超声破碎处理（Ice bath, 20% power, 3–5 seconds）。

3. 蛋白浓度：动物细胞：100 万细胞约得2-4 mg/mL蛋白。组织样本：20 mg鼠肝约得15–25 mg/mL蛋白。

4. 安全防护：仅限于科研使用。操作时请佩戴实验服及一次性手套。