产品描述
【保存条件】
4ºC保存，有效期12个月
【概述】
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品的专用缓冲液。其温和的去污剂配方能有效释放胞浆蛋白与胞核蛋白，同时最大限度地保留蛋白质的天然构象及蛋白质与蛋白质之间的相互作用。
适用范围：常规 SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP) 及 ELISA。
样本兼容：动植物细胞/组织；配合溶菌酶或破壁酶后可用于细菌和真菌。
【操作方法】
1. 准备工作：
温度控制：所有裂解步骤均需在冰上或4ºC进行。
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如ES-8136）。
2. 贴壁细胞裂解
① 清洗：弃去培养基，用冰冷的 PBS 洗涤细胞一次，尽量吸干残留液体。
② 加液：按照 6 孔板每孔加入200-400μL裂解液的比例加入（含抑制剂）。
③ 孵育：置于冰上孵育5-10分钟。期间可轻晃培养板或用移液器吹打，使裂解液充分接触细胞。
④ 离心：使用刮棒收集或直接吸取裂解液至离心管中。在 4ºC下以13,000×g离心5-10分钟。
⑤ 收集：转移上清液至新管，推荐使用 BCA 法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。
3. 悬浮细胞裂解
① 收集：1,000×g离心5分钟收集细胞，弃上清。
② 清洗：用冰冷PBS洗涤一次，再次离心沉淀。
③ 加液：每1×106-5×106细胞加入约200-500μL裂解液；或按细胞湿重体积的10:1 (v/w) 比例加入。
④ 孵育与离心：冰上孵育5-10分钟（期间弹击管底混匀），随后4ºC下以13,000×g离心5-10分钟，取上清蛋白，推荐使用 BCA 法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。
4. 组织样品裂解
① 剪切与加液：将组织剪成碎片。按每20 mg组织加入200-400μL裂解液（含抑制剂）的比例混合。
② 破碎与孵育：使用匀浆器或研磨仪将组织彻底打碎。冰上静置裂解15-20分钟，期间翻转混匀数次。
③ 离心取样：4ºC下以13,000×g离心5-10分钟，取清亮上清即可。
注：组织样本含有较多结缔组织和脂肪，离心时间可比细胞样本适当延长。若表面有厚脂肪层，请用移液枪穿过脂肪层吸取下方上清，转移至新离心管中。
【附表：不同培养器皿的裂解液参考用量】
为了达到最佳的裂解效果（通常蛋白浓度在2-4 mg/mL），细胞长满（100%汇合度）时建议参考下表进行加液：
培养器皿类型 | 培养面积（cm2） | 细胞数量(个) | 裂解液建议用量（μL） |
6 孔板 (每孔) | 9.5 | 1×106 | 200-400 |
3.5cm培养皿 | 8 | 1×106 | 200-400 |
6cm培养皿 | 21 | 2.5×106 | 500 |
10cm培养皿 | 55 | 7×106 | 1000 |
T25 培养瓶 | 25 | 3×106 | 500-600 |
【注意事项】
1. 蛋白降解防治：细胞裂解后会释放大量蛋白酶，请务必保持低温操作并足量添加抑制剂。
2. 基因组污染：若裂解物粘度极高，可适当延长离心时间或进行短暂的超声破碎处理（Ice bath, 20% power, 3–5 seconds）。
3. IP实验建议：针对弱相互作用的 Co-IP，建议使用本产品进行温和裂解。如需增强裂解强度，可适当增加氯化钠 (NaCl) 浓度。
4. 安全性：本品含有去污剂，可能对皮肤有轻微刺激。操作时请穿实验服并戴一次性手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml、500ml
应用领域
本产品适用于ES-8142、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4ºC保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
4℃ 保存，有效期 12 个月（与 ES-8140 -20℃ 保存不同，ES-8142 直接 4℃ 存储更方便）。提取后蛋白：短期 4℃（1 天内做 Co-IP / WB 最佳）；长期 -80℃ 分装保存避免反复冻融。安全性：本品含有去污剂，可能对皮肤有轻微刺激。操作时穿实验服并戴一次性手套。
可用于哪些下游应用？
SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）及 ELISA。扩展应用：① Pull-down；② 蛋白复合物纯化；③ 报告基因辅助分析；④ 抗原-抗体相互作用研究；⑤ 信号通路 IP-MS 鉴定相互作用蛋白。蛋白浓度测定：推荐 BCA 法（EK-5001）；如需 Bradford，建议用去垢剂兼容版（EK-5004）。
Co-IP 实验有何特殊建议？
IP 实验建议：针对弱相互作用的 Co-IP，建议使用本产品进行温和裂解。如需增强裂解强度，可适当增加氯化钠（NaCl）浓度。——增加 NaCl 浓度（如 200 mM 增至 300 mM）可破坏弱蛋白互作但保留强互作，灵活调节裂解强度。
基因组 DNA 干扰怎么办？
基因组污染：若裂解物粘度极高，可适当延长离心时间或进行短暂的超声破碎处理（Ice bath, 20% power, 3–5 seconds）。
组织样本含脂肪层怎么办？
组织样本含有较多结缔组织和脂肪，离心时间可比细胞样本适当延长。若表面有厚脂肪层，请用移液枪穿过脂肪层吸取下方上清，转移至新离心管中。——脂肪层会包裹蛋白与裂解液，影响下游测量。
器皿对照参考？
对照表：① 6 孔板/3.5 cm 培养皿（1×10⁶ 细胞）：200–400 µL；② 6 cm 培养皿（2.5×10⁶）：500 µL；③ 10 cm 培养皿（7×10⁶）：1000 µL；④ T25 培养瓶（3×10⁶）：500–600 µL。注意：本品 6 孔板用量 200–400 µL，比 ES-8140（150–250 µL）略多。
悬浮细胞与组织流程？
① 悬浮细胞：1,000×g 离心 5 min 收集 + 冰冷 PBS 洗涤一次 + 再次离心；按 每 1×10⁶–5×10⁶ 细胞 + 200–500 µL 裂解液，或按细胞湿重体积的 10:1 (v/w) 比例加入；冰上孵育 5–10 min（弹击管底混匀）+ 4℃ 13,000×g 离心 5–10 min；② 组织：每 20 mg 组织 + 200–400 µL 裂解液（含抑制剂）；匀浆器或研磨仪彻底打碎 + 冰上静置裂解 15–20 min（期间翻转混匀数次）+ 4℃ 13,000×g 离心 5–10 min。
完整流程参数（贴壁细胞）？
① 清洗：弃培养基，冰冷 PBS 洗涤细胞一次，尽量吸干残留液体；② 加液：按 6 孔板每孔 200–400 µL 裂解液（含抑制剂）；③ 孵育：冰上孵育 5–10 min（期间可轻晃培养板或用移液器吹打）；④ 离心：刮棒收集或直接吸取，4℃ 13,000×g 离心 5–10 min；⑤ 转移上清液至新管，推荐使用 BCA 法（EK-5001）测定蛋白浓度。
抑制剂如何添加？
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如 ES-8136）。温度控制：所有裂解步骤均需在冰上或 4℃进行。
本裂解液的核心特点？
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品的专用缓冲液。其温和的去污剂配方能有效释放胞浆蛋白与胞核蛋白，同时最大限度地保留蛋白质的天然构象及蛋白质与蛋白质之间的相互作用。适用范围：常规 SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）及 ELISA。样本兼容：动植物细胞/组织；配合溶菌酶或破壁酶后可用于细菌和真菌。
