产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
RIPA 裂解液 (Radio Immuno Precipitation Assay Buffer) 是一种经典的细胞组织快速裂解液。本品为高强度配方，含有多种离子型与非离子型去污剂（包括 1% Triton X-100、1%脱氧胆酸钠及0.05% SDS）。
核心优势：采用进口原料，具有极强的裂解能力，能有效提取胞浆、胞核及膜蛋白。
适用场景：主要用于Western Blot和ELISA。由于含有强力变性剂，不建议用于需要维持蛋白天然构象的实验（如某些敏感的 Co-IP 或蛋白激酶活性检测）。
样本兼容：广泛适用于动植物细胞及各类软硬组织。
【使用建议】
1. 准备工作：
融解：若发现沉淀，请置于室温或37°C快速融解，一旦融解必须立即置于冰上备用。
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入PMSF或蛋白酶抑制剂（如ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如ES-8136）。
2. 样品前处理：
① 贴壁细胞：弃去培养液，PBS洗涤1-2次。按6孔板每孔加入150–250 μL含抑制剂裂解液（参考下表）。充分吹打混匀，冰上裂解5分钟，期间上下颠倒混匀2-3次。
② 悬浮细胞：1,000×g离心5分钟收集细胞，弃上清后用PBS 洗涤1-2次，再次离心沉淀。按比例加入含抑制剂裂解液（建议每100万细胞使用150–250 μL），充分吹打混匀，冰上裂解5分钟，期间上下颠倒混匀2-3次。
③ 组织样品：将组织剪碎，按照每20mg组织加入200–400 μL含抑制剂裂解液的比例加入。使用玻璃匀浆器或组织破碎仪彻底破碎，冰上静置裂解15分钟，期间上下颠倒混匀3-5次。
3. 后处理
① 离心：将裂解后的样品4℃、10,000-13,000×g条件下离心3-5分钟
② 收集蛋白：取上清。推荐使用BCA法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。所得蛋白样品即可进行后续SDS-PAGE、Western Blot等操作。
【附表：不同培养器皿的裂解液参考用量】
为了达到最佳的裂解效果（通常蛋白浓度在2-4 mg/mL），细胞长满（100%汇合度）时建议参考下表进行加液：
培养器皿类型 | 培养面积（cm2） | 细胞数量(个) | 裂解液建议用量（μL） |
6 孔板 (每孔) | 9.5 | 1×106 | 150-250 |
3.5cm培养皿 | 8 | 1×106 | 150-250 |
6cm培养皿 | 21 | 2.5×106 | 400-500 |
10cm培养皿 | 55 | 7×106 | 1000 |
T25 培养瓶 | 25 | 3×106 | 500 |
【注意事项】
1. “胶状物”处理：高强度 RIPA 易释放基因组 DNA，离心后可能出现透明胶状团。
常规蛋白：直接取周围清亮上清即可。
结合蛋白：若需检测与染色质紧密结合的蛋白（如组蛋白），需进行短暂超声破碎以打碎DNA团块。
2. 温控要求：为防止蛋白降解，所有操作务必在冰上或4℃进行。
3. 兼容性说明：本品含有 SDS，测定蛋白浓度时推荐使用 BCA 法 (EK-5001)；Bradford 法会受去污剂干扰，不建议使用。
4. 安全防护：含有化学去污剂，请佩戴实验服及一次性手套操作。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml、100×5瓶
应用领域
本产品适用于ES-8148、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
4℃ 保存，有效期 12 个月。融解：若发现沉淀，请置于室温或 37℃ 快速融解，一旦融解必须立即置于冰上备用。温控要求：为防止蛋白降解，所有操作务必在冰上或 4℃ 进行。提取后蛋白：短期 4℃；长期 -80℃ 分装保存避免反复冻融。
可用于哪些下游应用？
Western Blot 和 ELISA。扩展应用：① ChIP（结合超声）；② SDS-PAGE；③ 染色质相关蛋白研究（如组蛋白、染色质重塑复合物）；④ 总蛋白定量分析。不适合：Co-IP（蛋白互作已破坏）、酶活检测（多数酶失活）、Native-PAGE。
与温和裂解液的选择？
ES-8148 RIPA 高强度：含 SDS、脱氧胆酸钠等离子型去污剂，破坏蛋白互作但裂解最彻底，适合 WB / ChIP；ES-8140 NP-40：仅 1% NP-40，温和保留互作，适合 Co-IP；ES-8142 IP/WB 专用：温和、保留互作；ES-8146 Triton X-100：温和；ES-8151 SDS：最强力变性。选择：要求蛋白互作 → ES-8140/8142；常规 WB → ES-8149 中强；染色质蛋白 → ES-8148 高强度 + 超声。
为什么不能用 Bradford 法测浓度？
兼容性说明：本品含有 SDS，测定蛋白浓度时推荐使用 BCA 法（EK-5001）或EK-5004（去垢剂兼容型）。
器皿对照参考？
对照表：① 6 孔板/3.5 cm 培养皿（1×10⁶ 细胞）：150–250 µL；② 6 cm 培养皿（2.5×10⁶）：400–500 µL；③ 10 cm 培养皿（7×10⁶）：1000 µL；④ T25 培养瓶（3×10⁶）：500 µL。目标：为了达到最佳的裂解效果（通常蛋白浓度在 2–4 mg/mL）。
胶状物如何处理？
'胶状物'处理：高强度 RIPA 易释放基因组 DNA，离心后可能出现透明胶状团。① 常规蛋白：直接取周围清亮上清即可；② 结合蛋白：若需检测与染色质紧密结合的蛋白（如组蛋白），需进行短暂超声破碎以打碎 DNA 团块。
贴壁、悬浮、组织流程？
① 贴壁细胞：弃培养液 + PBS 洗 1–2 次 → 6 孔板每孔 150–250 µL 含抑制剂裂解液 → 充分吹打混匀 → 冰上裂解 5 min（期间上下颠倒混匀 2–3 次）；② 悬浮细胞：1,000×g 离心 5 min 收集 + PBS 洗 1–2 次 + 再次离心 → 每 100 万细胞 150–250 µL 裂解液 → 充分吹打混匀 → 冰上裂解 5 min（期间颠倒 2–3 次）；③ 组织：剪碎 → 每 20 mg 组织 + 200–400 µL 含抑制剂裂解液 → 玻璃匀浆器或组织破碎仪彻底破碎 → 冰上静置裂解 15 min（期间颠倒 3–5 次）；④ 后处理：4℃ 10,000–13,000×g 离心 3–5 min 取上清，BCA 法（EK-5001）测浓度。
抑制剂如何添加？
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入 PMSF 或蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如 ES-8136）。研究磷酸化蛋白必加 ES-8136 或一站式 ES-8137。
适用样品与不适用场景？
适用场景：主要用于 Western Blot 和 ELISA。由于含有强力变性剂，不建议用于需要维持蛋白天然构象的实验（如某些敏感的 Co-IP 或蛋白激酶活性检测）。样本兼容：广泛适用于动植物细胞及各类软硬组织。
本裂解液的核心特点与三档区别？
RIPA 裂解液（Radio Immuno Precipitation Assay Buffer）是一种经典的细胞组织快速裂解液。本品为高强度配方，含有多种离子型与非离子型去污剂——1% Triton X-100、1% 脱氧胆酸钠及 0.05% SDS。核心优势：采用进口原料，具有极强的裂解能力，能有效提取胞浆、胞核及膜蛋白。选择：常规 WB 用 ES-8148/ES-8149；温和检测用 ES-8150。
