ES-8148 RIPA裂解液（高强度）

【保存条件】

4℃保存，有效期12个月

【概述】

RIPA 裂解液 (Radio Immuno Precipitation Assay Buffer) 是一种经典的细胞组织快速裂解液。本品为高强度配方，含有多种离子型与非离子型去污剂（包括 1% Triton X-100、1%脱氧胆酸钠及0.05% SDS）。

核心优势：采用进口原料，具有极强的裂解能力，能有效提取胞浆、胞核及膜蛋白。

适用场景：主要用于Western Blot和ELISA。由于含有强力变性剂，不建议用于需要维持蛋白天然构象的实验（如某些敏感的 Co-IP 或蛋白激酶活性检测）。

样本兼容：广泛适用于动植物细胞及各类软硬组织。

【使用建议】

1. 准备工作：
融解：若发现沉淀，请置于室温或37°C快速融解，一旦融解必须立即置于冰上备用。 
抑制剂添加：临用前，根据实验需求加入PMSF或蛋白酶抑制剂（如ES-8135）或磷酸酶抑制剂（如ES-8136）。

2. 样品前处理：

①　贴壁细胞：弃去培养液，PBS洗涤1-2次。按6孔板每孔加入150–250 μL含抑制剂裂解液（参考下表）。充分吹打混匀，冰上裂解5分钟，期间上下颠倒混匀2-3次。

②　悬浮细胞：1,000×g离心5分钟收集细胞，弃上清后用PBS 洗涤1-2次，再次离心沉淀。按比例加入含抑制剂裂解液（建议每100万细胞使用150–250 μL），充分吹打混匀，冰上裂解5分钟，期间上下颠倒混匀2-3次。

③　组织样品：将组织剪碎，按照每20mg组织加入200–400 μL含抑制剂裂解液的比例加入。使用玻璃匀浆器或组织破碎仪彻底破碎，冰上静置裂解15分钟，期间上下颠倒混匀3-5次。

3. 后处理

①　离心：将裂解后的样品4℃、10,000-13,000×g条件下离心3-5分钟

②　收集蛋白：取上清。推荐使用BCA法 (EK-5001) 测定蛋白浓度。所得蛋白样品即可进行后续SDS-PAGE、Western Blot等操作。

【附表：不同培养器皿的裂解液参考用量】

为了达到最佳的裂解效果（通常蛋白浓度在2-4 mg/mL），细胞长满（100%汇合度）时建议参考下表进行加液：

【注意事项】

1. “胶状物”处理：高强度 RIPA 易释放基因组 DNA，离心后可能出现透明胶状团。
常规蛋白：直接取周围清亮上清即可。
结合蛋白：若需检测与染色质紧密结合的蛋白（如组蛋白），需进行短暂超声破碎以打碎DNA团块。

2. 温控要求：为防止蛋白降解，所有操作务必在冰上或4℃进行。

3. 兼容性说明：本品含有 SDS，测定蛋白浓度时推荐使用 BCA 法 (EK-5001)；Bradford 法会受去污剂干扰，不建议使用。

4. 安全防护：含有化学去污剂，请佩戴实验服及一次性手套操作。