Question 1

试剂如何保存？

Accepted Answer

5× 储液：-20℃ 12 个月（避免反复冻融）；4℃ 短期保存 1 周内使用。

Question 2

与 SDS 上样缓冲液的转换？

Accepted Answer

需要后续 SDS-PAGE 分析时 — 切胶条 → SDS 平衡液（含 SDS + DTT）室温 30 分钟 → 加到 SDS-PAGE 第二维上样孔。

Question 3

可以用于哪些下游应用？

Accepted Answer

应用：① 凝胶切片提取蛋白复合物；② 二维 native + SDS-PAGE 分析亚基；③ 凝胶内酶活检测；④ Western blot（用温和转膜条件保留构象）。

Question 4

常见失败原因？

Accepted Answer

① 加热样品（变性，丢失天然构象）；② 添加还原剂（破坏二硫键）；③ 电泳产热（必须 4℃）；④ 上样量过大（条带重叠）。

Question 5

Blue Native PAGE 怎么用？

Accepted Answer

Blue Native PAGE — 用 Coomassie G-250（蓝色 + 阴离子）替代 SDS，提供阴性电荷而不变性蛋白；本品（无 SDS 版）适合 Blue Native 应用。

Question 6

电泳条件？

Accepted Answer

Native PAGE 推荐 — 100 V 恒压 1–2 小时（4℃ 操作避免热变性）。胶浓度根据目标蛋白大小选择 — 7%–10% 通用，4%–20% 梯度胶适合大蛋白复合物。

Question 7

与 SDS-PAGE 的差异？

Accepted Answer

Native PAGE — 蛋白保留天然构象，按大小 + 电荷 + 形状综合迁移；SDS-PAGE — 蛋白完全变性，仅按分子量分离。Native 用于研究蛋白复合物；SDS 用于纯度与分子量分析。

Question 8

Native PAGE 适合哪些研究？

Accepted Answer

应用：① 蛋白复合物完整性研究；② 酶活原位检测（in-gel activity）；③ 蛋白互作研究（Co-IP 验证）；④ 抗原-抗体复合物分析；⑤ 蛋白聚集 / 寡聚化研究。

Question 9

使用方法？

Accepted Answer

蛋白样品 + 5× 上样缓冲液 1:5 比例混合（不加热）→ 直接上样到 native PAGE 凝胶。室温电泳（避免热变性）。

Question 10

非变性（Native）上样缓冲液的特点？

Accepted Answer

5× 非变性蛋白上样缓冲液（不含 SDS、不含 DTT/BME 还原剂）。用于 native PAGE — 保留蛋白天然构象、亚基组装与酶活性。配方：50% 甘油 + 0.05% 溴酚蓝 + Tris-HCl pH 6.8。

ES-8158 5×非变性蛋白上样缓冲液（非还原无SDS）