产品描述
【保存条件】
-20℃保存，有效期12个月
【概述】
本产品为2倍浓缩的蛋白电泳专用上样缓冲液，含有高纯度SDS和强还原剂 DTT，旨在彻底消除蛋白质间的结构与电荷差异，保护蛋白质免受热降解，并维持电泳过程中的 pH 环境稳定。
变性机制：
1. SDS (十二烷基硫酸钠)：破坏蛋白二级、三级结构，使其带上高密度负电荷，消除电荷差异。
2. DTT (二硫苏糖醇)：有效还原并断开蛋白质分子内及分子间的二硫键，实现亚单位的彻底分离。
双色追踪系统：
1. 蓝色 (溴酚蓝, Bromophenol Blue)：常规电泳指示前沿，用于追踪样品运行位置。
2. 粉红色 (派洛宁 Y, Pyronin Y)：具有更快的迁移特性，特别适用于监测 Western Blot 转膜过程中蛋白质向膜（NC/PVDF）的转移情况。
【使用方法】
1. 溶解：室温或37°C水浴解冻并充分混匀。
2. 混合：将样品与2×缓冲液按1:1 的比例混合（例如：10 μL蛋白样品加入10 μL缓冲液）。若样品浓度过高，可用ddH2O预稀释。
3. 变性：混合后，95-100°C 加热 5–10 分钟。
4. 离心：冷却至室温，以 10,000–14,000 rpm 离心 2–5 分钟，取上清液即可进行电泳。
【指示剂迁移参考】
凝胶浓度 (%) | 溴酚蓝 (蓝色) 近似位置 | 派洛宁 Y (粉红色) 相对位置 |
8% | ~30 kDa | 迁移最快，位于前端 |
12% | ~20 kDa | 位于溴酚蓝下方 |
15% | ~10 kDa | 派洛宁Y迁移可能慢于溴酚蓝 |
注：在经典Tris-Glycine电泳体系（SDS-PAGE）中，两种染料的迁移位置随凝胶浓度的变化规律如上
【注意事项】
1. 溶解预警：-20°C下SDS可能会析出。使用前请务必确认溶液完全清亮。若有沉淀，可通过37°C水浴促溶并摇匀。
2. 颜色变化：受DTT及温度影响，冻存状态下溶液可能呈现深棕色，复温溶解后会恢复正常，不影响实验结果。
3. 上样量控制：加样量过多可能导致条带拖尾或跑样不齐；加样不足则可能导致信号微弱。
4. 示踪染料偏差：由于不同厂家生产的预制胶或配制缓冲液的离子强度差异，染料的绝对迁移位置可能存在±5 kDa的波动。
5. 操作规范：必须在通风处操作，穿实验服并戴一次性手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 10ml
应用领域
本产品适用于ES-8152、上样及电泳、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
-20℃保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
2× 上样缓冲液：-20℃ 12个月（避免反复冻融）；4℃ 短期保存 1 周内使用。室温短期可用但长期 DTT 缓慢氧化失活。
可以用于哪些下游应用？
应用：① SDS-PAGE 上样（最主要）；② WB 样品制备；③ Coomassie / 银染前样品准备；④ 部分蛋白互作研究（变性 IP）；⑤ 蛋白纯度检查。
加热温度的选择？
标准 95–100℃ 5 分钟 — 大多数蛋白；65℃ 10 分钟 — 膜蛋白（避免聚集）；37℃ 30 分钟 — 部分疏水蛋白；不加热 — 极不稳定蛋白（如某些 IF 抗原）。
常见使用错误？
① 加热后未冷却就上样（破坏胶孔）；② 加热温度过高（>100℃ 部分蛋白聚集）；③ 加热时间过长（>10 分钟，敏感蛋白变性）；④ 反复冻融（DTT 氧化失活）；⑤ 比例错误（上样不准）。
不还原（非变性）样品如何处理？
如需保留二硫键 / 蛋白复合物 — 使用非还原版本（不含 DTT）。如配套 ES-8158 类 5× 非变性蛋白上样缓冲液（不含 SDS + DTT），适合 native PAGE 与 Blue-Native 应用。
2× vs. 其他浓度选择？
2× — 适合常规上样比例。2× 适合大体积样品（1:1 混合）；4× / 6× 适合中等浓度样品；6× / 10× 适合极浓样品（节省加样孔体积）。本品 2× 是常用选择。
DTT vs. β-巯基乙醇（BME）？
DTT — 无臭、还原能力稍强、稳定；BME — 有刺激性气味、还原能力相当、价格略低。本品（DTT 版）操作更人性化，无需通风柜。
使用方法？
典型用法：① 蛋白样品 + 2× 上样缓冲液按 1:2 比例混合；② 95–100℃ 加热 5 分钟变性；③ 离心后上样到 SDS-PAGE 凝胶。
各组分作用？
组分作用：① Tris-HCl pH 6.8 — 维持电泳浓缩胶的 pH；② SDS — 蛋白变性 + 均一负电荷；③ DTT/BME — 还原蛋白二硫键；④ 溴酚蓝 — 染料前沿指示电泳进度；⑤ 甘油 — 增加密度让样品下沉到加样孔。
Laemmli 上样缓冲液的标准配方？
Laemmli 类 SDS-PAGE 上样缓冲液标准配方（2× 浓度）：100 mM Tris-HCl pH 6.8 + 200 mM 还原剂（DTT）+ 4% SDS + 0.2% 溴酚蓝 + 20% 甘油。本品为 2× 浓度。
