产品描述
【保存条件】
室温避光保存，有效期12个月
【概述】
BCA 法是实验室最常用的蛋白定量方法之一。其原理是在碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂结合形成紫色的络合物，在562 nm处有强吸收峰。
高灵敏度：检出限低至25 μg/mL。
高兼容性：可兼容 5% 浓度的 SDS、Triton X-100、Tween 20/80。
干扰因素：BCA技术对螯合剂（EDTA > 10mM）和还原剂（DTT > 1mM、β-ME > 0.01%）敏感。若还原剂超标，建议改用EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。
【使用方法】
1. 准备BCA工作液 (Working Reagent)
配制：按50:1的比例混合A液与B液（例如：5 mL A 液 + 100 μL B 液）。
观察：若A液有结晶析出，请37℃水浴溶解后使用。混匀后的工作液应为苹果绿色，室温24小时内稳定。
2. 蛋白标准曲线的建立 (微孔板法)
建议使用与待测样品相同的缓冲液（如PBS、0.9% NaCl）稀释标准品。
编号 | 稀释液体积 | 蛋白标准液体积 | 最终浓度 |
A | 70μL | 5mg/mL BSA 30μL | 1.5mg/mL |
B | 30μL | 从A管取60μL | 1mg/mL |
C | 20μL | 从B管取60μL | 0.75mg/mL |
D | 30μL | 从C管取60μL | 0.5mg/mL |
E | 60μL | 从D管取60μL | 0.25mg/mL |
F | 60μL | 从E管取60μL | 0.125mg/mL |
G | 60μL | 0μL | 0mg/mL |
3. 蛋白浓度的检测
① 加样：向 96 孔板中加入5 μL 标准品或待测样品。(若样品体积不足 5 μL，请用稀释液补足)
② 显色：每孔加入 195 μL BCA 工作液，轻晃混匀。
③ 孵育：37℃放置30分钟（标准法）。
注：低浓度蛋白可60℃孵育 30min；普通定性可室温孵育 2h。
④ 测定：冷却至室温，使用酶标仪测定562 nm（或540-595 nm之间）的吸光度。
4. 
数据计算
① 绘图：以标准品浓度为横坐标 (X)，吸光度OD$值为纵坐标 (Y)，绘制标准曲线。
② 计算：根据样品的OD值（多孔则为平均OD）在曲线上计算对应浓度（若样品有稀释则留意最后乘以稀释倍数）。
例：公式Y = 0.4995X + 0.4151，若测得样品OD=0.6，则浓度X = (0.6 - 0.4151) / 0.4995 = 0.37 mg/mL。
【注意事项】
1. 显色时间控制：BCA反应不是“终点反应”，颜色会随时间加深。
优化：标准品和样品必须同时加液、同时孵育、同时读数，以确保数据的可比性。
2. 耗材选择：请使用底部透明的平底96孔板（如普通细胞培养板）。若背景值异常升高，请检查稀释液本身是否含有强还原剂（如高浓度 DTT）。
3. 波长建议：建议使用最优562nm，若无此滤光片，可选择540-590nm范围。
4. 安全防护：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 200T、500T、1000T
应用领域
本产品适用于EK-5001、蛋白定量、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温避光保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
室温避光保存，有效期 12 个月。包装：A 液 + B 液 + 5 mg/mL BSA 标准品。
常见问题排查？
① 显色时间控制：BCA 反应不是终点反应，颜色会随时间加深。优化：标准品和样品必须同时加液、同时孵育、同时读数，以确保数据的可比性；② 耗材选择：请使用底部透明的平底 96 孔板。若背景值异常升高，请检查稀释液本身是否含有强还原剂（如高浓度 DTT）；③ 波长建议：最优 562 nm，若无此滤光片，可选择 540–590 nm 范围。
可用于哪些应用场景？
适用：① WB 上样前蛋白定量；② 细胞裂解液浓度测定（RIPA / NP-40 等）；③ 组织匀浆蛋白定量；④ 蛋白纯化产物浓度测定；⑤ 酶学实验前蛋白定量；⑥ 质谱样品前定量；⑦ 配套 EK-6005/6010/6100/6105 等蛋白提取试剂盒后定量。
数据计算？
绘图：以标准品浓度为横坐标 (X)，吸光度 OD 值为纵坐标 (Y)，绘制标准曲线。计算：根据样品 OD 值在曲线上计算对应浓度（若样品有稀释则乘以稀释倍数）。例：公式 Y = 0.4995X + 0.4151，测得样品 OD = 0.6，则浓度 X = (0.6 - 0.4151) / 0.4995 = 0.37 mg/mL。
完整测定流程？
说明书规范：① 加样：96 孔板加 5 µL 标准品或样品（不足 5 µL 用稀释液补足）；② 显色：每孔 + 195 µL BCA 工作液，轻晃混匀；③ 孵育：37℃ 30 min（标准法）——低浓度蛋白可 60℃ 30 min；普通定性可室温 2 h；④ 测定：冷却至室温，酶标仪 562 nm（或 540–595 nm）测吸光度。
BCA 工作液配制？
说明书规范：配制：按 50:1 的比例混合 A 液与 B 液（例如：5 mL A 液 + 100 µL B 液）。观察：若 A 液有结晶析出，请 37℃ 水浴溶解后使用。混匀后的工作液应为苹果绿色，室温 24 h 内稳定。
去垢剂与还原剂兼容性？
说明书强调：干扰因素：BCA 技术对螯合剂（EDTA > 10 mM）和还原剂（DTT > 1 mM、β-ME > 0.01%）敏感。若还原剂超标，建议改用 EK-5004 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。——BCA 适合：含去垢剂的样品（如 RIPA 裂解液、SDS 样品）；BCA 不适合：含 DTT/β-ME 等还原剂的样品（推荐改用 EK-5004）。
本试剂盒的核心特点？
BCA 法是实验室最常用的蛋白定量方法之一。其原理是在碱性条件下，蛋白将 Cu²⁺ 还原为 Cu⁺，Cu⁺ 与 BCA 试剂结合形成紫色的络合物，在 562 nm 处有强吸收峰。高灵敏度：检出限低至 25 µg/mL。高兼容性：可兼容 5% 浓度的 SDS、Triton X-100、Tween 20/80。
