EK-5008 SuperStar 超敏ECL化学发光试剂盒

【保存条件】

4℃避光保存，有效期12个月

【概述】

本产品采用独特的增强型底物系统，专为检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体/抗原设计，是目前灵敏度极高的商业化ECL检测试剂。

飞克级灵敏度：可检测硝酸纤维素（NC）或PVDF膜上低至fg（10^-15 g） 级别的目标蛋白。

极高信噪比：即使在痕量蛋白检测中也能保持极净的背景。

长效发光：信号输出极其稳定，荧光可持续使胶片感光达12小时以上。

抗体节省：允许极高的抗体稀释倍数，显著降低实验成本。一抗建议：0.2-1.0 μg/ mL(1:1,000 - 1:5,000 稀释)。二抗建议：10-50 ng/mL (1:20,000-1:100,000 稀释)

【操作方法】

1. 准备：完成常规SDS-PAGE、转膜、封闭及抗体孵育。确保最后一次洗膜彻底。

2. 配制工作液：按A液:B液=1:1的比例新鲜混合（如500μL A + 500μL B）。
注意：混合后建议立即使用。室温放置数小时后灵敏度会略有下降。

3. 孵育显影：
用镊子取出膜，在滤纸上沥干洗液（勿使膜干透）。将膜完全浸入工作液中（建议用量：0.125 mL/cm² 膜面积）。
室温避光孵育1-2分钟。
注：孵育时间过长不会增加灵敏度，反而可能导致背景升高。

4. 曝光检测：
取出膜，沥干多余发光液（勿洗）。用保鲜膜包裹平整，
去除气泡。置于暗盒内，
使用X光胶片压片或直接进入冷 CCD 成像系统扫描。
时间参考：根据信号强弱，曝光数秒至数分钟不等。

【注意事项】

1. 稀释倍数（关键）： 由于本品极其灵敏，严禁使用高浓度抗体。一抗起始浓度推荐 1:1,000 -1:4,000。抗体过浓会导致“白圈”（烧膜现象）或背景过深。

2. 叠氮钠抑制：NaN₃会强烈抑制 HRP 活性。在二抗稀释液及洗液中严禁添加NaN₃。

3. 避光操作：虽然可在日光灯下短时间操作，但强光会降低底物活性。建议混合及孵育过程尽量避光。

4. 均匀性：发光液用量不足会导致膜表面反应不均，出现斑块状显色。为节约试剂，建议根据蛋白条带位置剪小膜面积，而非减少单位面积的发光液用量。

5. 保鲜膜质量：劣质保鲜膜可能产生自发荧光或屏蔽信号，请使用高质量实验室专用封口膜或保鲜膜。

6. 安全防护：仅用于科研，严禁用于临床诊断。操作时请穿实验服并佩戴手套。