产品描述
【保存条件】
4℃避光保存，有效期12个月
【概述】
本产品采用独特的增强型底物系统，专为检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体/抗原设计，是目前灵敏度极高的商业化ECL检测试剂。
飞克级灵敏度：可检测硝酸纤维素（NC）或PVDF膜上低至fg（10-15 g） 级别的目标蛋白。
极高信噪比：即使在痕量蛋白检测中也能保持极净的背景。
长效发光：信号输出极其稳定，荧光可持续使胶片感光达12小时以上。
抗体节省：允许极高的抗体稀释倍数，显著降低实验成本。一抗建议：0.2-1.0 μg/ mL(1:1,000 - 1:5,000 稀释)。二抗建议：10-50 ng/mL (1:20,000-1:100,000 稀释)
【操作方法】
1. 准备：完成常规SDS-PAGE、转膜、封闭及抗体孵育。确保最后一次洗膜彻底。
2. 配制工作液：按A液:B液=1:1的比例新鲜混合（如500μL A + 500μL B）。
注意：混合后建议立即使用。室温放置数小时后灵敏度会略有下降。
3. 孵育显影：
用镊子取出膜，在滤纸上沥干洗液（勿使膜干透）。将膜完全浸入工作液中（建议用量：0.125 mL/cm² 膜面积）。
室温避光孵育1-2分钟。
注：孵育时间过长不会增加灵敏度，反而可能导致背景升高。
4. 曝光检测：
取出膜，沥干多余发光液（勿洗）。用保鲜膜包裹平整，
去除气泡。置于暗盒内，
使用X光胶片压片或直接进入冷 CCD 成像系统扫描。
时间参考：根据信号强弱，曝光数秒至数分钟不等。
【注意事项】
1. 稀释倍数（关键）： 由于本品极其灵敏，严禁使用高浓度抗体。一抗起始浓度推荐 1:1,000 -1:4,000。抗体过浓会导致“白圈”（烧膜现象）或背景过深。
2. 叠氮钠抑制：NaN3会强烈抑制 HRP 活性。在二抗稀释液及洗液中严禁添加NaN3。
3. 避光操作：虽然可在日光灯下短时间操作，但强光会降低底物活性。建议混合及孵育过程尽量避光。
4. 均匀性：发光液用量不足会导致膜表面反应不均，出现斑块状显色。为节约试剂，建议根据蛋白条带位置剪小膜面积，而非减少单位面积的发光液用量。
5. 保鲜膜质量：劣质保鲜膜可能产生自发荧光或屏蔽信号，请使用高质量实验室专用封口膜或保鲜膜。
6. 安全防护：仅用于科研，严禁用于临床诊断。操作时请穿实验服并佩戴手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50ml+50ml、250ml+250ml
应用领域
本产品适用于EK-5008、显色成像、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃避光保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
4℃ 避光保存，有效期 12 个月。A 液和 B 液单独 4℃ 保存稳定 12 个月；混合后建议立即使用，1 h 内仍有效但灵敏度会下降。
可用于哪些应用场景？
适用：① 极低丰度蛋白检测（fg 级别灵敏度，难以检测的稀有抗原）；② 磷酸化蛋白 WB（信号弱时本品的高灵敏度优势明显）；③ 临床稀少样品（节省抗体）；④ 多曝光时间序列（12 h 长效发光支持多次曝光对比）；⑤ 冷 CCD 成像系统（低噪声 + 长曝光累积信号）。配套使用：与 SuperBlot 全线产品（ES-8700/8701/8710/8712 等）形成SuperBlot + SuperStar完整 WB 解决方案。
发光均匀性的关键？
均匀性：发光液用量不足会导致膜表面反应不均，出现斑块状显色。为节约试剂，建议根据蛋白条带位置剪小膜面积，而非减少单位面积的发光液用量。——保证 0.125 mL/cm² 膜面积用量；如试剂不够，剪小膜面积而非减少单位面积用量。
使用时需要避光吗？
避光操作：虽然可在日光灯下短时间操作，但强光会降低底物活性。建议混合及孵育过程尽量避光。——A/B 液单独都很稳定，混合后强光（特别是紫外）会使底物快速失活。建议：① 在弱光环境配制；② 混合后立即使用；③ 孵育时盖盖或用暗盒。
为什么使用本产品时背景反而高？
最常见原因：抗体过浓。说明书核心警告：抗体过浓会导致白圈（烧膜现象）或背景过深。白圈现象：底物被瞬间耗尽，强信号区周围形成白色光晕。解决：① 一抗稀释 1:1,000 提高到 1:4,000；② 二抗稀释 1:5,000 提高到 1:20,000；③ 增加洗涤次数和时间；④ 使用本品配套的低背景封闭液（如 ES-8710/8715）。
为什么严禁加叠氮钠（NaN₃）？
叠氮钠抑制：NaN₃ 会强烈抑制 HRP 活性。在二抗稀释液及洗液中严禁添加 NaN₃。——许多商业抗体或稀释液含 NaN₃ 作为防腐剂，但 NaN₃ 与 HRP 反应使其失活，导致 ECL 显色完全失败。如二抗或洗液原含 NaN₃，必须更换或彻底洗净，建议选择不含叠氮钠的抗体稀释液如ES-8792 SuperBlot增强型通用抗体稀释液或ES-1-Step 免封闭WB抗体稀释液。
使用方法？
① 准备：完成常规 SDS-PAGE、转膜、封闭及抗体孵育，确保最后一次洗膜彻底；② 配制工作液：A 液：B 液 = 1:1 新鲜混合（如 500 µL A + 500 µL B）。注意：混合后建议立即使用，室温放置数小时后灵敏度会略有下降；③ 孵育显影：膜在滤纸上沥干洗液（勿使膜干透），完全浸入工作液（建议用量：0.125 mL/cm² 膜面积），室温避光孵育 1–2 min；注：孵育时间过长不会增加灵敏度，反而可能导致背景升高；④ 曝光检测：取出膜，沥干多余发光液（勿洗），保鲜膜包裹平整，置于暗盒内，X 光胶片压片或冷 CCD 成像系统扫描，曝光数秒至数分钟。
抗体稀释的关键参数？
一抗建议：0.2–1.0 µg/mL（1:1,000–1:5,000 稀释）；二抗建议：10–50 ng/mL（1:20,000–1:100,000 稀释）。稀释倍数（关键）：由于本品极其灵敏，严禁使用高浓度抗体。一抗起始浓度推荐 1:1,000–1:4,000。抗体过浓会导致白圈（烧膜现象）或背景过深。
本产品的核心特点？
本产品采用独特的增强型底物系统，专为检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体/抗原设计，是目前灵敏度极高的商业化 ECL 检测试剂。飞克级灵敏度：可检测硝酸纤维素（NC）或 PVDF 膜上低至 fg（10⁻¹⁵ g）级别的目标蛋白。极高信噪比：即使在痕量蛋白检测中也能保持极净的背景。长效发光：信号输出极其稳定，荧光可持续使胶片感光达 12 小时以上。抗体节省：允许极高的抗体稀释倍数，显著降低实验成本。
