【保存条件】
-20℃保存,有效期24个月
【概述】
本产品是细胞培养中常用的消化试剂,适用于贴壁细胞的传代及原代组织的解离。
双重消化动力:胰酶(Trypsin)通过水解细胞间的蛋白质使细胞解离;EDTA作为螯合剂,通过结合钙、镁离子来破坏细胞间的粘附桥,两者协同作用显著提高了消化效率。
即用型:经过滤除菌,可直接用于各类细胞系或组织的消化。
【使用方法】
贴壁细胞消化(以T25培养瓶为例):
1. 预洗:吸除旧培养基。加入无菌PBS或D-Hank's(不含钙镁)洗涤细胞1-2 次,彻底去除残留的血清(血清中的蛋白酶抑制剂会显著降低胰酶活性)。
2. 加入消化液:加入约1 mL胰酶消化液,使之完全覆盖瓶底细胞层。
3. 孵育:室温或37°C孵育。不同细胞消化时间差异较大,通常为30秒至3分钟。
4. 镜检:显微镜下观察细胞明显收缩、变圆,且细胞间隙增大。
5. 终止:立即加入含有血清的完全培养基(体积通常为胰酶的2-3倍),利用血清中的抑制剂终止消化。
6. 收集:轻轻吹打瓶壁细胞使之脱落。若需去除胰酶残留,可将细胞悬液300-500 g离心3-5分钟,弃上清后用新鲜培养基重悬。
II. 组织块解离:
将剪碎的组织块置于消化液中,根据组织类型(如胚胎组织较易解离,纤维组织较难)调整消化时间,直至组织结构松散。
【注意事项】
1. 温度提示:胰酶在室温下活性会逐渐下降。建议分装使用,避免整瓶反复冻融或长时间放置在室温/水浴锅中。
2. 终止必要性:必须使用含血清培养基或专门的胰酶抑制剂终止反应,否则过度的蛋白水解会损伤细胞表面受体。
3. 安全防护:本品仅供科研使用。操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。