产品描述
【保存条件】
室温保存,有效期24个月
【概述】
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液是免疫组化(IHC)中应用最广泛的经典抗原修复液,也称枸橼酸钠抗原修复液。
温和修复:相比高pH的Tris-EDTA,pH6.0的柠檬酸环境更为温和,能有效降低组织脱片的概率,尤其适用于皮肤、胎盘等易脱落样本。
表位暴露:通过热处理打破甲醛固定形成的蛋白交联(亚甲基桥),彻底暴露被遮蔽的抗原位点,显著提升染色信号。
适用广:适用于石蜡切片、冰冻切片以及多聚甲醛固定的细胞爬片。
【使用建议】
1. 工作液配制
取一包粉剂倒入洁净烧杯,加入约950ml蒸馏水或去离子水。搅拌至完全溶解(若有少量潮解不影响使用)。
pH校准:正常溶解后pH约为6.0。若有特殊需求,可用微量HCl或NAOH调节。最后补充蒸馏水定容至1000ml。
2. 抗原修复流程(三种常用方法)
① 压力锅法(推荐用于难修复抗原):
压力锅内加入足量1×修复液并煮沸。放入切片,盖好并扣阀。
喷气后开始计时4分钟。
关键:待压力自然下降后开盖,室温冷却。
② 微波法(最为常用):
将切片浸入盛有修复液的容器中,高火煮沸。转中低火维持沸腾状态10-20分钟。
注意严禁干涸。
③ 水浴/蒸煮法(最为温和):将切片浸入预热至95-100°C的修复液中,维持10-20分钟。
3. 冷却与洗涤
自然冷却:修复结束后,切片必须留在热液中随液自然冷却至室温(约20-30分钟)。此步骤对抗原表位的复原及防止脱片至关重要。
洗涤:用PBS或TBS洗涤3次,每次5分钟,随后进入封闭步骤。
【注意事项】
1. 液量充足:修复液必须完全淹没切片(液面建议高于切片2-3cm),防止加热过程中液体蒸发导致组织干涸坏死。
2. 摸索条件:最佳修复时间与组织厚度、固定时长及目标抗原有关,建议初次实验时设置梯度时间摸索。
3. 冰冻切片:虽可不修复,但若信号微弱,可尝试95°C热修复5分钟,通常会有显著改善。
4. 设备兼容:确保使用耐热、耐高压的塑料或玻璃染色架。
5. 安全防护:柠檬酸具有轻微酸性,操作时请穿实验服并佩戴手套。
产品规格
- 货期
- 1-2天
- 规格
- 10p、100p
应用领域
本产品适用于ES-8330、组化抗原修复、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC(广州亿涛生物科技有限公司)提供高品质生物科研试剂,服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温保存
常见问题 (FAQ)
可以用于哪些下游应用?
应用:① IHC 抗原修复(最主要);② IF 切片抗原修复;③ 多重 IHC(mIHC);④ 数字病理 AI 训练样品;⑤ 部分 ISH(原位杂交)前处理。
常见失败原因?
① 修复不彻底 — 温度 / 时间不足、pH 选错(依抗体);② 切片脱片 — 修复时间过长、温度过高(>120℃)、玻片处理不当;③ 背景高 — 修复液污染 / pH 漂移;④ IHC 信号弱 — 修复后未充分洗涤;切片在冷却前移动。
本品如何稀释(如为 1××)?
如果是 1× 即用工作液 — 直接使用。如果是浓缩储液(N××)— 用蒸馏水按 1:N 稀释为 1× 工作液后使用。
低 pH(如 pH 6.0)vs. 高 pH(如 pH 9.0)选择?
低 pH 柠檬酸缓冲液(pH 6.0)— 温和,适合大多数胞质抗原,组织形态保留好;高 pH Tris-EDTA(pH 9.0)— 强力,适合核蛋白、磷酸化蛋白等难修复抗原,但可能略影响形态。新抗体推荐两种 pH 都试。
抗原修复时间过长 / 过短?
时间过长 — 切片脱片,组织形态破坏;时间过短 — 抗原暴露不完全,IHC 信号弱。新抗体首次实验建议做时间梯度(10、20、30 分钟)确定最佳条件。
加热方式选择?
微波 — 快速便捷(10–15 分钟),但温度控制差,多张切片可能不均;高压锅 — 温度均匀(121℃ 10 分钟),适合批量切片;水浴锅 — 温度可控(95℃ 30 分钟)但耗时较长;电饭锅 — 简易替代(95–100℃ 30 分钟)。
本品(Citrate pH 6.0)的特点?
Citrate pH 6.0 适用于:大多数胞质抗原与表面抗原,温和条件保留组织形态
标准操作流程?
典型流程:① 切片脱蜡水化;② 加入抗原修复液浸没切片;③ 微波 / 高压锅加热到 95–100℃ 持续 10–30 分钟;④ 自然冷却到室温(关键 — 让抗原构象稳定);⑤ PBS 洗涤;⑥ 后续 IHC 步骤。
抗原修复液的工作原理?
抗原修复(Antigen Retrieval)用于福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)切片的 IHC 抗原暴露。机制 — 福尔马林固定时与赖氨酸 ε-氨基与精氨酸胍基形成共价亚甲基桥(methylene bridge),导致蛋白-蛋白与蛋白-核酸交联,masked 抗原;高温 + 缓冲液逆转交联,恢复抗原的 IHC 可识别构象。本品为 Citrate pH 6.0 抗原修复液。

