ES-8330 柠檬酸—柠檬酸钠粉剂(10mmol/L,pH 6.0)

【保存条件】

室温保存，有效期24个月

【概述】

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液是免疫组化（IHC）中应用最广泛的经典抗原修复液，也称枸橼酸钠抗原修复液。

温和修复：相比高pH的Tris-EDTA，pH6.0的柠檬酸环境更为温和，能有效降低组织脱片的概率，尤其适用于皮肤、胎盘等易脱落样本。

表位暴露：通过热处理打破甲醛固定形成的蛋白交联（亚甲基桥），彻底暴露被遮蔽的抗原位点，显著提升染色信号。

适用广：适用于石蜡切片、冰冻切片以及多聚甲醛固定的细胞爬片。

【使用建议】

1. 工作液配制
取一包粉剂倒入洁净烧杯，加入约950ml蒸馏水或去离子水。搅拌至完全溶解（若有少量潮解不影响使用）。
pH校准：正常溶解后pH约为6.0。若有特殊需求，可用微量HCl或NAOH调节。最后补充蒸馏水定容至1000ml。

2. 抗原修复流程（三种常用方法）

①　压力锅法(推荐用于难修复抗原)：
压力锅内加入足量1×修复液并煮沸。放入切片，盖好并扣阀。
喷气后开始计时4分钟。
关键：待压力自然下降后开盖，室温冷却。

②　微波法(最为常用)：
将切片浸入盛有修复液的容器中，高火煮沸。转中低火维持沸腾状态10-20分钟。
注意严禁干涸。

③　水浴/蒸煮法(最为温和)：将切片浸入预热至95-100°C的修复液中，维持10-20分钟。

3. 冷却与洗涤

自然冷却：修复结束后，切片必须留在热液中随液自然冷却至室温（约20-30分钟）。此步骤对抗原表位的复原及防止脱片至关重要。

洗涤：用PBS或TBS洗涤3次，每次5分钟，随后进入封闭步骤。

【注意事项】

1. 液量充足：修复液必须完全淹没切片（液面建议高于切片2-3cm），防止加热过程中液体蒸发导致组织干涸坏死。

2. 摸索条件：最佳修复时间与组织厚度、固定时长及目标抗原有关，建议初次实验时设置梯度时间摸索。

3. 冰冻切片：虽可不修复，但若信号微弱，可尝试95°C热修复5分钟，通常会有显著改善。

4. 设备兼容：确保使用耐热、耐高压的塑料或玻璃染色架。

5. 安全防护：柠檬酸具有轻微酸性，操作时请穿实验服并佩戴手套。