Question 1

试剂如何保存？

Accepted Answer

-20℃ 避光保存，有效期 24 个月。

Question 2

低效率排查？

Accepted Answer

排查思路：① 细胞密度：转染时 70–90% 汇合度（过密会限制 DNA 复合物接触）；② 抗生素：必须无双抗培养基（含双抗效率下降 30–50%）；③ 质粒质量：用去内毒素试剂盒提取；④ DNA 总体积：质粒总体积不宜超过 20 µL；⑤ 细胞代数：HEK-293T 建议 ≤30 代；⑥ DNA:试剂比例：1:3 是起始，可优化 1:2 至 1:4；⑦ 复合物孵育时间：10–15 min 不可缩短。

Question 3

可用于哪些应用场景？

Accepted Answer

适用：① 常规瞬时转染（基因过表达、shRNA 敲降、CRISPR Cas9 编辑）；② 慢病毒包装（pMD2.G + psPAX2 + 转移质粒三质粒系统）；③ 腺病毒包装（pAdEasy 系统）；④ AAV 包装（pAAV + Rep/Cap + Helper 三质粒）；⑤ 逆转录病毒包装；⑥ 稳定细胞系建立（先瞬时筛选高表达克隆）。

Question 4

质粒纯度的关键？

Accepted Answer

病毒包装对质粒质量要求极高（与 EK-5403 说明书要求一致）：必须使用无内毒素提取试剂盒（如 EK-1005 FastPure 彩色去内毒素质粒小提）提取的质粒；普通 miniprep 含较高内毒素会显著降低转染效率，特别影响 HEK293T 等敏感细胞。建议：A260/A280 ≥1.8、A260/A230 ≥2.0、超螺旋 (CCC) 比例 >85%。

Question 5

抗生素与培养基的禁忌？

Accepted Answer

转染前 1–2 小时建议更换为不含抗生素的完全培养基——青链霉素双抗会显著降低转染效率并增加细胞死亡。Opti-MEM 用于 DNA-试剂复合物形成（无血清环境降低血清成分干扰）；如无 Opti-MEM 可用无血清无双抗的 DMEM 或 1640 替代。

Question 6

悬浮细胞转染流程？

Accepted Answer

① 制备 500 µL 'DNA-试剂-Opti-MEM' 复合物（同贴壁流程步骤 2–4）；② 细胞重悬：收集 1×10⁶ 个细胞，用上述 500 µL 复合物重新悬浮，室温静置 15–20 min；③ 铺板培养：6 孔板加入 1.5 mL 完全培养液，转入细胞混合物，混匀培养；④ 后续处理：4–6 h 后离心换液；⑤ 24–48 h 检测。

Question 7

贴壁细胞转染流程（6 孔板为例）？

Accepted Answer

① 换液预处理：转染前 1–2 小时，弃旧液，更换为 2 mL 新鲜的不含抗生素的完全培养基；② 制备 DNA 混合物：取 2–4 µg 质粒 DNA（多种质粒先混匀）；③ 加入转染试剂：按 DNA(µg) : 试剂(µL) = 1 : 3 的比例，加入 6 µL GO3000 转染试剂，轻微混匀，室温孵育 3–5 min；④ 形成复合物：加 500 µL Opti-MEM 充分混匀，静置 10–15 min 形成稳定的 DNA-转染试剂复合物；⑤ 添加与培养：均匀滴加到 6 孔板内，37℃ CO₂ 培养箱；⑥ 换液：转染 4–6 h 后更换为 2 mL 新鲜完全培养基；⑦ 检测：通常转染 24–48 h 后检测基因表达。

Question 8

典型转染效率（说明书附表）？

Accepted Answer

本品提供了多种常见细胞系的典型转染效率数据。其中，HEK293/293-T（人源肾细胞）的转染效率最高，接近90–95%；CHO-K1（仓鼠卵巢细胞）和U251（人源神经细胞）次之，效率参考为80–90%；HeLa（人源外星人）、COS7（猴SV40转染肾细胞）和HepG2（人源）移位细胞）的转染效率相近，均在70–80%之间；NIH/3T3（细胞流动成纤维细胞）、星形瘤干细胞、Patu8988（胰腺）及U2OS（骨肉瘤细胞）的转染效率相对较低，约为60–70%。总体而言，不同细胞系之间的转染效率存在一定的差异，实验前可参考上述数据选择合适的细胞系或优化转染条件。

Question 9

本产品的核心特点？

Accepted Answer

本品是一款专门针对真核哺乳动物细胞开发的高性能转染试剂。其采用独特的化学配方，具有细胞毒性低、转染效率高（高达 90% 以上）以及重复性好等优点。适用范围：i常见工具细胞瞬时转染、慢病毒/腺病毒/AAV/逆转录病毒包装。兼容性：适用于 HEK293、CHO、HeLa、HepG2、NIH/3T3 等多数常见细胞系。

细胞种类	中文名称	转染效率
HEK293	人胚肾细胞	90%-95%
293-T	人胚肾细胞	90%-95%
CHO-K1	仓鼠卵巢细胞	80%-90%
U251	人源神经胶质瘤细胞	80%-90%
Hela	人源宫颈癌细胞	70%-80%
COS7	猴SV40转化肾细胞	70%-80%
HepG2	人源肝癌细胞	70%-80%
NIH/3T3	小鼠胚胎成纤维细胞	60%-70%
胶质瘤干细胞	人源胶质瘤干细胞	60%-70%
Patu8988	人源胰腺癌细胞	60%-70%
U2OS	人源骨肉瘤细胞	60%-70%

EK-5401 GO3000 HiTrans高效转染试剂

文献引用