产品描述
【保存条件】
-20ºC避光保存，有效期24个月
【概述】
本品是一款专门针对真核哺乳动物细胞开发的高性能转染试剂。其采用独特的化学配方，具有细胞毒性低、转染效率高（高达 90% 以上）以及重复性好等优点。
适用范围：细胞瞬时转染、慢病毒/腺病毒/AAV/逆转录病毒包装。
兼容性：适用于 HEK293、CHO、HeLa、HepG2、NIH/3T3 等多数常见细胞系。
【操作方法】
I. 贴壁细胞转染流程
1. 换液预处理：转染前1-2小时，弃去旧液，更换为2 mL新鲜的不含抗生素的完全培养基。
2. 制备DNA混合物：取2-4 μg质粒DNA，若有多种质粒请先混匀。
3. 加入转染试剂：按DNA(μg) : 试剂(μL) = 1 : 3 的比例，加入6 μL GO3000转染试剂。轻微混匀，室温孵育3-5分钟。
4. 形成复合物：向上述混合物中加入500 μL Opti-MEM，充分混匀后静置10-15分钟，形成稳定的 DNA-转染试剂复合物。
5. 添加与培养：均匀滴加到6孔板内。置于 37°C、CO2培养箱中。
6. 换液：转染4-6小时后，更换为2 mL新鲜完全培养基。
7. 检测：通常在转染24-48小时后检测基因表达。
II. 悬浮细胞转染流程
1. 制备复合物：按照上述步骤2-4制备 500 μL 的“DNA-试剂-OptiMEM”复合物。
2. 细胞重悬：收集1×106个细胞，用上述500 μL复合物重新悬浮细胞，室温静置15-20分钟。
3. 铺板培养：在6孔板中加入1.5 mL完全培养液，随后转入细胞混合物，混匀培养。
4. 后续处理：4-6小时后离心换液。
5. 检测：通常在转染24-48小时后检测基因表达。
【各种类细胞转染效率（仅供参考）】
细胞种类 | 中文名称 | 转染效率 |
HEK293 | 人胚肾细胞 | 90%-95% |
293-T | 人胚肾细胞 | 90%-95% |
CHO-K1 | 仓鼠卵巢细胞 | 80%-90% |
U251 | 人源神经胶质瘤细胞 | 80%-90% |
Hela | 人源宫颈癌细胞 | 70%-80% |
COS7 | 猴SV40转化肾细胞 | 70%-80% |
HepG2 | 人源肝癌细胞 | 70%-80% |
NIH/3T3 | 小鼠胚胎成纤维细胞 | 60%-70% |
胶质瘤干细胞 | 人源胶质瘤干细胞 | 60%-70% |
Patu8988 | 人源胰腺癌细胞 | 60%-70% |
U2OS | 人源骨肉瘤细胞 | 60%-70% |
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 1ml
应用领域
本产品适用于EK-5401、细胞转染、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
-20ºC避光保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
-20℃ 避光保存，有效期 24 个月。
低效率排查？
排查思路：① 细胞密度：转染时 70–90% 汇合度（过密会限制 DNA 复合物接触）；② 抗生素：必须无双抗培养基（含双抗效率下降 30–50%）；③ 质粒质量：用去内毒素试剂盒提取；④ DNA 总体积：质粒总体积不宜超过 20 µL；⑤ 细胞代数：HEK-293T 建议 ≤30 代；⑥ DNA:试剂比例：1:3 是起始，可优化 1:2 至 1:4；⑦ 复合物孵育时间：10–15 min 不可缩短。
可用于哪些应用场景？
适用：① 常规瞬时转染（基因过表达、shRNA 敲降、CRISPR Cas9 编辑）；② 慢病毒包装（pMD2.G + psPAX2 + 转移质粒三质粒系统）；③ 腺病毒包装（pAdEasy 系统）；④ AAV 包装（pAAV + Rep/Cap + Helper 三质粒）；⑤ 逆转录病毒包装；⑥ 稳定细胞系建立（先瞬时筛选高表达克隆）。
质粒纯度的关键？
病毒包装对质粒质量要求极高（与 EK-5403 说明书要求一致）：必须使用无内毒素提取试剂盒（如 EK-1005 FastPure 彩色去内毒素质粒小提）提取的质粒；普通 miniprep 含较高内毒素会显著降低转染效率，特别影响 HEK293T 等敏感细胞。建议：A260/A280 ≥1.8、A260/A230 ≥2.0、超螺旋 (CCC) 比例 >85%。
抗生素与培养基的禁忌？
转染前 1–2 小时建议更换为不含抗生素的完全培养基——青链霉素双抗会显著降低转染效率并增加细胞死亡。Opti-MEM 用于 DNA-试剂复合物形成（无血清环境降低血清成分干扰）；如无 Opti-MEM 可用无血清无双抗的 DMEM 或 1640 替代。
悬浮细胞转染流程？
① 制备 500 µL 'DNA-试剂-Opti-MEM' 复合物（同贴壁流程步骤 2–4）；② 细胞重悬：收集 1×10⁶ 个细胞，用上述 500 µL 复合物重新悬浮，室温静置 15–20 min；③ 铺板培养：6 孔板加入 1.5 mL 完全培养液，转入细胞混合物，混匀培养；④ 后续处理：4–6 h 后离心换液；⑤ 24–48 h 检测。
贴壁细胞转染流程（6 孔板为例）？
① 换液预处理：转染前 1–2 小时，弃旧液，更换为 2 mL 新鲜的不含抗生素的完全培养基；② 制备 DNA 混合物：取 2–4 µg 质粒 DNA（多种质粒先混匀）；③ 加入转染试剂：按 DNA(µg) : 试剂(µL) = 1 : 3 的比例，加入 6 µL GO3000 转染试剂，轻微混匀，室温孵育 3–5 min；④ 形成复合物：加 500 µL Opti-MEM 充分混匀，静置 10–15 min 形成稳定的 DNA-转染试剂复合物；⑤ 添加与培养：均匀滴加到 6 孔板内，37℃ CO₂ 培养箱；⑥ 换液：转染 4–6 h 后更换为 2 mL 新鲜完全培养基；⑦ 检测：通常转染 24–48 h 后检测基因表达。
典型转染效率（说明书附表）？
本品提供了多种常见细胞系的典型转染效率数据。其中，HEK293/293-T（人源肾细胞）的转染效率最高，接近90–95%；CHO-K1（仓鼠卵巢细胞）和U251（人源神经细胞）次之，效率参考为80–90%；HeLa（人源外星人）、COS7（猴SV40转染肾细胞）和HepG2（人源）移位细胞）的转染效率相近，均在70–80%之间；NIH/3T3（细胞流动成纤维细胞）、星形瘤干细胞、Patu8988（胰腺）及U2OS（骨肉瘤细胞）的转染效率相对较低，约为60–70%。总体而言，不同细胞系之间的转染效率存在一定的差异，实验前可参考上述数据选择合适的细胞系或优化转染条件。
本产品的核心特点？
本品是一款专门针对真核哺乳动物细胞开发的高性能转染试剂。其采用独特的化学配方，具有细胞毒性低、转染效率高（高达 90% 以上）以及重复性好等优点。适用范围：i常见工具细胞瞬时转染、慢病毒/腺病毒/AAV/逆转录病毒包装。兼容性：适用于 HEK293、CHO、HeLa、HepG2、NIH/3T3 等多数常见细胞系。
