【保存条件】
4℃避光储存,有效期12个月
【概述】
本产品为16%多聚甲醛 (PFA) 的磷酸盐 (PBS) 缓冲溶液。作为一种高纯度、不含甲醇的固定剂储备液,广泛应用于 IHC、IF、FACS及电子显微镜(EM)样本的制备。
高纯度保障:相比普通甲醛,PFA 储备液能更精确地保护组织微细结构及核酸完整性,防止抗原弥散。
应用优势:适用于皮肤、肌肉、内脏及各类培养细胞。主要通过蛋白质共价交联终止酶促反应,防止组织自溶。
灵活稀释:高浓度设计,可根据实验需求精确稀释为 4%、2% 或其他工作浓度。
【概述】
1. 工作液配制 (以配制 4% PFA 为例)
1份16% PFA储备液+3份0.01M PBS缓冲液。 (如取100 ml 16%PFA接入300 ml PBS 中。)
2. 样本固定参考表 (使用稀释后的 4% 工作液)
样本类型 | 建议用量 | 建议时间 | 操作要点 |
培养细胞 | 覆盖样品即可 (六孔板约1 mL/孔) | 室温10-30分钟 | 去除培养液用PBS清洗2-3次后加入固定液 |
组织切片 | 覆盖切片表面 (约200-500 μL) | 室温10-30分钟 | 或使用染色缸浸泡固定;厚切片(>10 μm)需延长至1小时 |
组织块 | 10 : 1至20 : 1 (体积比) | 4℃或室温 2-24小时 | 用量必须至少为组织体积的10倍以上,确保渗透充分 |
【注意事项】
1. 储存细节:16% PFA在4°C存放过久易产生沉淀或氧化。建议收到后进行小量分装并于-20°C冻存,使用前解冻。若解冻后有微量沉淀,可37°C水浴温育溶解。
2. 严控固定时间:组织块固定通常不宜超过24小时。过度固定会导致组织硬化变脆,且严重的蛋白交联会掩盖抗原决定簇,导致免疫组化假阴性。
3. 抗原修复:经PFA固定的样本在进行IHC检测时,通常需要进行抗原热修复或酶修复以暴露被掩盖的抗原位点。
4. 安全防护:多聚甲醛具有高度刺激性、挥发性与毒性。操作必须在通风橱内进行,佩戴口罩、手套并穿实验服。