产品描述
【保存条件】
-20℃保存，有效期12个月
【概述】
蛋白酶 K (Proteinase K) 是一种切割活性极强的枯草杆菌蛋白酶类，因其能降解角蛋白 (Keratin) 而得名。本品具有极广的生化适应性，在 pH 4.0–12.5（最适 pH 7.5–8.0）范围内均保持高效切割活性，且在SDS、尿素等变性剂存在下活性进一步增强；尽管其理论最适反应温度为65°C，但为规避高温诱发的快速自降解，实验中通常推荐在50-55°C 条件下进行，以兼顾酶促效率与体系稳定性。
应用广泛：常用于基因组DNA/RNA抽提中原位灭活核酸酶、酶切反应后的蛋白消化去除，以及组织样品的消化。
即用型：已配制为10 mg/mL 稳定液，可直接加入反应体系。
【使用建议】
1. 兼容性：常规浓度的 EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍等对酶活力影响极小。
2. 工作浓度：常用工作浓度范围为0.05-1 mg/mL。
示例：在100 μL消化体系中，加入1-5 μL蛋白酶K溶液（终浓度约0.1-0.5 mg/mL）。具体浓度请根据样品类型（如组织、细胞或血液）及缓冲液条件进行优化。
【注意事项】
1. 分装保存：蛋白酶 K 虽然性质稳定，但仍应尽量减少反复冻融。建议收到产品后根据单次用量进行小量分装。
2. 失活条件：若需终止反应，可通过加热至95-100°C维持10分钟使其彻底失活（注意：此操作会引起DNA变性，若需热失活且保护DNA双链，可尝试80°C处理15分钟）。
3. 安全防护：请务必穿着实验服并佩戴一次性手套，避免皮肤直接接触或吸入气溶胶。本品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或人体治疗。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 1ml、1ml×5管
应用领域
本产品适用于ES-8218、核酸提取相关酶、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
蛋白酶 K 虽然性质稳定，但仍应尽量减少反复冻融
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
4℃ 6个月或 -20℃ 12 个月；含甘油防冻。避免反复冻融、长期室温。
DNA / RNA 提取中的具体用法？
DNA 提取（动物组织）— 在裂解液（含 SDS 1% + Tris-HCl + EDTA）中加入终浓度 100–200 μg/mL 蛋白酶 K，56℃ 振荡过夜直至无可见组织；RNA 提取（FFPE）— 加入终浓度 200 μg/mL，56℃ 30–60 分钟（避免过长降解 RNA）。
常见使用错误？
① 储液反复冻融（活性下降，建议分装小管）；② 储存温度过高（活性快速下降）；③ 降解后未失活（残留蛋白酶 K 可能影响下游酶反应）；④ 工作浓度过低（消化不彻底）。
如何失活？
热失活 — 95℃ 10 分钟可失活蛋白酶 K（部分残留活性可能影响敏感酶反应）；化学失活 — PMSF（1 mM 终浓度）共价结合丝氨酸活性位点，永久失活。后续若做酶反应（连接酶、聚合酶等），建议先失活蛋白酶 K。
活性检测方法？
底物 — 偶氮酪蛋白（azocasein）。流程 — 蛋白酶 K + 偶氮酪蛋白 → 37℃ 1 小时 → TCA 沉淀 → 上清 OD440 反映活性。商品化产品标示活性 U/mg。
与商品化对比？
本品与 Sigma P2308 / Thermo EO0491 / Promega V302A 等商品化蛋白酶 K 等效，性价比有优势。
典型应用？
应用：① DNA / RNA 提取（最常见，灭活核酸酶 + 消化蛋白）；② PCR 模板准备（消化样品蛋白）；③ FFPE 样品脱蛋白；④ 细胞 / 组织裂解；⑤ 染色质免疫沉淀（ChIP）后样品消化。
典型工作浓度与温度？
标准工作浓度 50–200 μg/mL（部分应用 50–500 μg/mL）；温度 50–65℃；时间 30 分钟–过夜（依样品类型）。SDS（0.5–1%）+ 56℃ 是经典激活条件。
本品规格？
10 mg/mL 储液（活性约 30 U/mg），含 50% 甘油（防冻），分装储存便于使用。
蛋白酶 K 是什么？
蛋白酶 K（Proteinase K，PK）是从真菌 Engyodontium album 分离的非特异性丝氨酸蛋白酶，对天然 / 变性蛋白都有强水解活性，在 SDS（0.5–1%）+ 50–60℃ 条件下活性最佳。
