ES-8788 HP高效电转染缓冲液

【保存条件】

4℃保存，有效期12个月

【概述】

本品是一款专为细胞电穿孔（Electroporation）设计的通用型高效缓冲液。

高兼容性：适用于质粒 DNA、siRNA、mRNA 及蛋白质的转染；与 Lonza、Bio-Rad、BTX 等主流电转仪器完全兼容。

双重保护：独特的渗透压平衡配方，在电击脉冲下形成稳定微孔的同时，能显著降低细胞应激，提高转染效率及术后细胞存活率。

适用广泛：适用于常规细胞系、原代细胞及各种难转染的悬浮细胞。

【使用方法】

1. 细胞准备

①　收集处于对数生长期的细胞。对于贴壁细胞，使用胰酶消化后收至离心管。

②　300 × g (约 1000-1200 rpm) 离心5分钟，弃上清。

③　使用无血清培养基或PBS洗涤细胞1次，再次离心弃上清。

2. 电转复合物

①　重悬细胞：使用HP电转缓冲液重悬细胞。（参考比例：每1×10⁶个细胞推荐使用100 μL缓冲液。）

②　加入转染物：向100 μL细胞悬液中加入2-10 μg质粒DNA（或适量 siRNA/蛋白）。轻轻吹匀。注意：质粒总体积不宜超过缓冲液体积的10%。

3. 电击操作

①　将混合液转移至0.2 cm标准电转杯中，确保液体沉降至杯底且无气泡。

②　参考参数设置：电容：1000 μF；电压：150 - 500 V（建议以20 V为梯度进行电压优化，如 150V, 170V, 190V...）
具体参数请参照不同仪器的说明书及特定细胞类型的推荐协议。

4. 细胞恢复：

①　电击结束后，立即取出电转杯。

②　使用一次性吸管小心地将细胞转移至37°C预热的完全培养基中。

③　置于37°C、CO₂培养箱内培养。通常在24-48小时后检测转染效果。

【注意事项】

1. 即时处理：细胞在电转缓冲液中停留时间不宜过长，完成混匀后应尽快电击并转入培养基，以维持细胞活性。

2. 气泡预警：在电击杯中操作时必须严禁气泡产生，否则会引起放电（打火），导致细胞大面积死亡及实验失败。

3. 冰浴说明：某些敏感细胞在电转前需进行冷冰处理。若协议要求，请在电转前后将电转杯置于冰上，但电击前必须擦干电转杯外壁的水分，防止打火。

4. DNA 纯度：建议使用高纯度、无内毒素的质粒，溶解在无菌水或TE缓冲液中。

5. 无菌操作：本品经过滤除菌。操作全过程请在超净工作台内进行，避免污染。

6. 安全防护：仅限科研使用。操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。