产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
本品是一款专为细胞电穿孔（Electroporation）设计的通用型高效缓冲液。
高兼容性：适用于质粒 DNA、siRNA、mRNA 及蛋白质的转染；与 Lonza、Bio-Rad、BTX 等主流电转仪器完全兼容。
双重保护：独特的渗透压平衡配方，在电击脉冲下形成稳定微孔的同时，能显著降低细胞应激，提高转染效率及术后细胞存活率。
适用广泛：适用于常规细胞系、原代细胞及各种难转染的悬浮细胞。
【使用方法】
1. 细胞准备
① 收集处于对数生长期的细胞。对于贴壁细胞，使用胰酶消化后收至离心管。
② 300 × g (约 1000-1200 rpm) 离心5分钟，弃上清。
③ 使用无血清培养基或PBS洗涤细胞1次，再次离心弃上清。
2. 电转复合物
① 重悬细胞：使用HP电转缓冲液重悬细胞。（参考比例：每1×106个细胞推荐使用100 μL缓冲液。）
② 加入转染物：向100 μL细胞悬液中加入2-10 μg质粒DNA（或适量 siRNA/蛋白）。轻轻吹匀。注意：质粒总体积不宜超过缓冲液体积的10%。
3. 电击操作
① 将混合液转移至0.2 cm标准电转杯中，确保液体沉降至杯底且无气泡。
② 参考参数设置：电容：1000 μF；电压：150 - 500 V（建议以20 V为梯度进行电压优化，如 150V, 170V, 190V...）
具体参数请参照不同仪器的说明书及特定细胞类型的推荐协议。
4. 细胞恢复：
① 电击结束后，立即取出电转杯。
② 使用一次性吸管小心地将细胞转移至37°C预热的完全培养基中。
③ 置于37°C、CO2培养箱内培养。通常在24-48小时后检测转染效果。
【注意事项】
1. 即时处理：细胞在电转缓冲液中停留时间不宜过长，完成混匀后应尽快电击并转入培养基，以维持细胞活性。
2. 气泡预警：在电击杯中操作时必须严禁气泡产生，否则会引起放电（打火），导致细胞大面积死亡及实验失败。
3. 冰浴说明：某些敏感细胞在电转前需进行冷冰处理。若协议要求，请在电转前后将电转杯置于冰上，但电击前必须擦干电转杯外壁的水分，防止打火。
4. DNA 纯度：建议使用高纯度、无内毒素的质粒，溶解在无菌水或TE缓冲液中。
5. 无菌操作：本品经过滤除菌。操作全过程请在超净工作台内进行，避免污染。
6. 安全防护：仅限科研使用。操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 10ml、100ml
应用领域
本产品适用于ES-8788、细胞转染、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
4℃ 保存，有效期 12 个月。无菌操作：本品经过滤除菌。操作全过程请在超净工作台内进行，避免污染。
常见失败原因排查？
排查思路：① 气泡——细胞大面积死亡 + 听到放电声；② 电压不当——效率低（电压过低）或细胞死亡过多（电压过高）；③ 细胞密度过低（推荐 1×10⁶/100 µL，过稀效率低）；④ DNA 浓度过高（>10% 体积比降低电导率）；⑤ DNA 含内毒素 / 盐（电导率变化）；⑥ 电转后未立即转入培养基（缓冲液中长时间停留毒性大）；⑦ 细胞代数过高 / 状态差。
可用于哪些应用场景？
适用：① CAR-T 细胞制备（T 细胞 CRISPR/Cas9 + sgRNA RNP 电转，比慢病毒更安全）；② CRISPR 基因编辑（Cas9 RNP 直接电转，避免外源序列整合）；③ iPSC 重编程（OSKM mRNA 电转避免病毒整合）；④ 悬浮细胞研究（K562、Jurkat、原代 T/B 细胞）；⑤ 植物原生质体转化；⑥ siRNA / mRNA 短期表达；⑦ 难转染细胞系研究（部分肿瘤细胞、神经元等）。
即时处理与冰浴说明？
即时处理：细胞在电转缓冲液中停留时间不宜过长，完成混匀后应尽快电击并转入培养基，以维持细胞活性。冰浴说明：某些敏感细胞在电转前需进行冷冰处理。若协议要求，请在电转前后将电转杯置于冰上，但电击前必须擦干电转杯外壁的水分，防止打火。——某些细胞（如造血干细胞、iPSC）冰浴可减少应激；普通细胞室温即可。电转杯外壁干燥很关键——湿外壁会在高压下放电短路。
DNA 纯度的关键？
特别提示：DNA 纯度：建议使用高纯度、无内毒素的质粒，溶解在无菌水或 TE 缓冲液中。——电转染对 DNA 质量要求高（盐离子干扰电转效率）：① 必用去内毒素试剂盒（EK-1005）；② A260/A280 ≥1.8、A260/A230 ≥2.0；③ 超螺旋 (CCC) 比例 >85%；④ 质粒总体积不宜超过缓冲液体积的 10%——超量会改变电转电导率影响效果。
气泡为何严禁？
重要注意：气泡预警：在电击杯中操作时必须严禁气泡产生，否则会引起放电（打火），导致细胞大面积死亡及实验失败。——气泡在高电压下会形成空气-液体放电通道，引起电弧打火（vis 闪光），瞬间高温（>1,000℃）使细胞死亡。正确操作：① 缓慢加样（避免吸打产生气泡）；② 加样后轻弹电转杯让液体下沉至杯底；③ 用枪头排除任何可见气泡；④ 装入电转仪前确认无气泡。
电压如何优化？
提示：建议以 20 V 为梯度进行电压优化。不同细胞类型的起始电压参考：① 常用细胞系（HEK293、CHO）：250–350 V；② T 细胞（人原代）：300–400 V；③ B 细胞：350–450 V；④ 造血干细胞 CD34+：250–350 V；⑤ iPSC / ESC：150–250 V（脆弱细胞需低电压）；⑥ 植物原生质体：100–200 V。优化方法：固定电容 1,000 µF，从推荐电压 ±50 V 范围做 5 点梯度（如 200/220/240/260/280 V），48 h 后用 GFP/流式评估效率与细胞存活率（target：效率 ≥70% + 存活 ≥50%）。
完整流程参数？
① 细胞准备：收集对数生长期细胞，贴壁细胞胰酶消化 + 离心；300×g（约 1,000–1,200 rpm）离心 5 min 弃上清；无血清培养基或 PBS 洗涤 1 次 + 再次离心；② 电转复合物：用 HP 电转缓冲液重悬细胞——每 1×10⁶ 个细胞推荐使用 100 µL 缓冲液；100 µL 细胞悬液 + 2–10 µg 质粒 DNA（或适量 siRNA / 蛋白），轻轻吹匀（质粒总体积不宜超过缓冲液体积的 10%）；③ 电击操作：将混合液转移至 0.2 cm 标准电转杯，确保液体沉降至杯底且无气泡；参考参数：电容 1,000 µF；电压 150–500 V（建议以 20 V 为梯度进行电压优化，如 150V, 170V, 190V...）；④ 细胞恢复：电击结束后立即取出电转杯，用一次性吸管小心地将细胞转移至 37℃ 预热的完全培养基；37℃ CO₂ 培养箱，24–48 h 后检测转染效果。
与脂质体转染的根本区别？
电转染（Electroporation，本品适用）：① 物理方法（电脉冲使细胞膜暂时形成微孔让 DNA 进入）；② 不依赖细胞表面受体——可转染脂质体不能转染的难转染细胞（T 细胞、原代细胞、悬浮细胞、植物原生质体）；③ 效率 70–95%（视细胞类型）；④ 设备成本高（电转仪 +电转杯）。脂质体：① 依赖细胞内吞；② 仅适合常用贴壁细胞系；③ 设备简单。选择：① 难转染细胞 → 电转 + 本品；② 常规 HEK293/HeLa → 化学转染（EK-5401/5402/5403）。
本产品的核心特点？
本品是一款专为细胞电穿孔（Electroporation）设计的通用型高效缓冲液。高兼容性：适用于质粒 DNA、siRNA、mRNA 及蛋白质的转染；与 Lonza、Bio-Rad、BTX 等主流电转仪器完全兼容。双重保护：独特的渗透压平衡配方，在电击脉冲下形成稳定微孔的同时，能显著降低细胞应激，提高转染效率及术后细胞存活率。适用广泛：适用于常规细胞系、原代细胞及各种难转染的悬浮细胞。
