Q: 对照设置与计算？

CCK-8检测需设置三组对照以确保结果准确。实验孔（As）：含培养基细胞及待测物质，待反映测物质处理后的细胞状态；对照孔（Ac）：含培养基和细胞但不加测待物质，代表正常细胞的基础活力；空白孔（Ab）：仅含培养基，既无细胞也无待测物质，用于复苏本身的背景吸光值。计算公式：细胞活力 = [(As - Ab) / (Ac - Ab)] × 100%。

Q: 完整使用流程？

① 细胞接种：在 96 孔板中接种细胞悬液（100 µL/孔）。预培养（如 24 h）。建议密度：贴壁细胞 2,000–10,000 个/孔；悬浮细胞 5,000–20,000 个/孔；② 添加药物（针对毒性实验）：加入不同浓度待测药物，孵育 6–48 h；③ 显色反应：每孔加 10 µL CCK-8 溶液——注：若孔内原有培养基体积不是 100 µL，请按 10% 的比例添加 CCK-8。避免加入时产生气泡，气泡会严重干扰读数；37℃ 培养箱孵育 0.5–4 h；④ 吸光度测定：酶标仪测定 450 nm 处的吸光度。若无 450 nm 滤光片，可使用 430–490 之间的滤光片。

Q: 与 MTT / MTS / XTT 的关键区别？

CCK-8（WST-8）与MTT、MTS、XTT同属细胞活力检测试剂，但在多项关键特性上存在差异。MTT的反应产物为纯化甲臜沉淀，需用DMSO或SDS溶解后才能读取吸光值，操作繁琐，且对细胞有毒性，检测后细胞无法继续培养存在，其实也最低相对。 CCK-8则综合表现最优化：其反应产物为溶解液橙黄色甲脒，可直接读取OD450；CCK8灵敏度在四者中最高，且对细胞无毒。 CCK-8 最大优势：无需细胞裂解，灵敏度高，适合时间点动态监测。

Q: 本试剂盒的核心特点？

Cell Counting Kit-8（CCK-8）采用高灵敏度的四唑盐 WST-8，在电子耦合试剂存在下，被细胞线粒体脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲脒（Formazan）。高灵敏度：灵敏度显著高于 MTT、XTT 或 MTS。安全性：无放射性，对细胞无毒。简便性：无需预配，无需有机溶剂溶解沉淀，直接在培养基中显色。

Question 1

试剂如何保存？

Accepted Answer

4℃ 避光保存，有效期 12 个月；-20℃ 避光保存，有效期 24 个月。4℃ 短期使用方便、-20℃ 长期保存。

Question 2

细胞数与 OD 值的关系？

Accepted Answer

建议预实验绘制细胞数-OD 标准曲线：① 96 孔板接种 0、500、1,000、2,000、5,000、10,000、20,000 细胞/孔；② 加 CCK-8 反应 1–2 h；③ 读 OD450；④ 拟合曲线（通常线性范围 1,000–20,000 细胞/孔）。这样可以将后续 OD 值反推为实际细胞数。

Question 3

药物干扰怎么处理？

Accepted Answer

有些药物会直接还原 CCK-8 产生假阳性：① 抗氧化剂：维生素 C、N-乙酰半胱氨酸（NAC）、谷胱甘肽（GSH）；② 还原剂：DTT、β-巯基乙醇、TCEP；③ 重金属离子（Fe²⁺、Cu²⁺）。解决：① 加 CCK-8 前 PBS 洗 2 次去除药物；② 设置无细胞 + 药物对照孔（仅药物 + 培养基 + CCK-8）减去基础值；③ 改用 Annexin V / 台盼蓝等其他活力检测方法。

Question 4

可用于哪些应用场景？

Accepted Answer

① 药物 IC50 测定（细胞毒性药物筛选，金标准方法）；② 细胞增殖动力学（多时间点监测）；③ 抗肿瘤药物筛选；④ 抑制剂活性评估；⑤ 天然产物毒性筛查；⑥ 细胞培养条件优化（培养基、血清等）；⑦ 联合用药协同/拮抗分析；⑧ 多数细胞系兼容（HeLa、HEK293、MCF-7、A549 等）。

Question 5

什么时候选择不同孵育时间？

Accepted Answer

孵育时间 0.5–4 h：根据细胞种类与密度调整：① 快增殖癌细胞（HeLa、HEK293T）：0.5–1 h（OD 上升快）；② 常规肿瘤细胞：1–2 h；③ 正常二倍体细胞（成纤维细胞、上皮细胞）：2–4 h；④ 悬浮细胞、原代细胞、代谢慢的细胞：3–4 h。实操建议：每隔 30 min 读一次 OD，找到 OD 值在 1.0–2.0 范围的最佳时间点。

Question 6

常见问题排查？

Accepted Answer

① 药物干扰检测：若待测药物具有氧化还原性（如 Vc、DTT），会在无细胞情况下直接还原 CCK-8。对策：在加入 CCK-8 前，吸除含药培养基，用 PBS 洗涤两次，换入新鲜培养基；② OD 值过高（>2.5）：说明细胞生长过密或孵育时间过长。对策：减少接种密度，或缩短 CCK-8 加入后的孵育时间（如减至 0.5 h）；③ OD 值过低（<0.5）：说明细胞活性低或接种量太少。对策：增加接种密度，或延长 CCK-8 加入后的孵育时间（如增至 4 h）；④ 悬浮细胞注意事项：悬浮细胞由于代谢较慢，建议增加接种量，且加入 CCK-8 后孵育时间通常需要延长。

Question 7

对照设置与计算？

Accepted Answer

CCK-8检测需设置三组对照以确保结果准确。实验孔（As）：含培养基细胞及待测物质，待反映测物质处理后的细胞状态；对照孔（Ac）：含培养基和细胞但不加测待物质，代表正常细胞的基础活力；空白孔（Ab）：仅含培养基，既无细胞也无待测物质，用于复苏本身的背景吸光值。计算公式：细胞活力 = [(As - Ab) / (Ac - Ab)] × 100%。

Question 8

完整使用流程？

Accepted Answer

① 细胞接种：在 96 孔板中接种细胞悬液（100 µL/孔）。预培养（如 24 h）。建议密度：贴壁细胞 2,000–10,000 个/孔；悬浮细胞 5,000–20,000 个/孔；② 添加药物（针对毒性实验）：加入不同浓度待测药物，孵育 6–48 h；③ 显色反应：每孔加 10 µL CCK-8 溶液——注：若孔内原有培养基体积不是 100 µL，请按 10% 的比例添加 CCK-8。避免加入时产生气泡，气泡会严重干扰读数；37℃ 培养箱孵育 0.5–4 h；④ 吸光度测定：酶标仪测定 450 nm 处的吸光度。若无 450 nm 滤光片，可使用 430–490 之间的滤光片。

Question 9

与 MTT / MTS / XTT 的关键区别？

Accepted Answer

CCK-8（WST-8）与MTT、MTS、XTT同属细胞活力检测试剂，但在多项关键特性上存在差异。MTT的反应产物为纯化甲臜沉淀，需用DMSO或SDS溶解后才能读取吸光值，操作繁琐，且对细胞有毒性，检测后细胞无法继续培养存在，其实也最低相对。 CCK-8则综合表现最优化：其反应产物为溶解液橙黄色甲脒，可直接读取OD450；CCK8灵敏度在四者中最高，且对细胞无毒。

CCK-8 最大优势：无需细胞裂解，灵敏度高，适合时间点动态监测。

Question 10

本试剂盒的核心特点？

Accepted Answer

Cell Counting Kit-8（CCK-8）采用高灵敏度的四唑盐 WST-8，在电子耦合试剂存在下，被细胞线粒体脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲脒（Formazan）。高灵敏度：灵敏度显著高于 MTT、XTT 或 MTS。安全性：无放射性，对细胞无毒。简便性：无需预配，无需有机溶剂溶解沉淀，直接在培养基中显色。

EK-5103 CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)

文献引用

组别	培养基	细胞	待测物质
实验孔 (As)	有	有	有
对照孔 (Ac)	有	有	无
空白孔 (Ab)	有	无	无