Question 1

常见问题排查？

Accepted Answer

RT-PCR 处理后仍失败：检查本品是否冷却到室温后才加酶、稀释比例是否为 1:24、加热时间是否足够（延至 20 分钟）；如仍失败可加 RNasin 等蛋白类 RNase 抑制剂双重保护。处理 Tris 缓冲液后变浑浊：检查本品浓度是否过高或 pH 是否超出 7.0–8.5 范围。处理后 RNA 仍降解：考虑容器或枪头本身污染，配合表面去污剂（如 EX-0411 核酸酶清除剂）处理实验台面。

Question 2

与 Thermo RNAsecure 的对比？

Accepted Answer

两者为同类产品，规格（25×）、使用方法（60°C / 10 min）、适用场景完全一致，下游酶反应兼容性相同。本品性价比更优，适合用量较大的实验室日常使用。

Question 3

与下游酶反应的兼容性？

Accepted Answer

经处理并冷却后的溶液可直接用于 T7/T3/SP6 体外转录、MmLV/AMV 逆转录及 PCR（Taq 酶）等反应，无抑制作用。典型 RT-qPCR 流程：本品处理缓冲液 → 60°C 10 分钟 → 冷却至室温 → 加逆转录酶 → 逆转录 → 加 qPCR 试剂 → 扩增。 PubMed Central

Question 4

可处理哪些缓冲液？有何限制？

Accepted Answer

可处理：Tris（pH 7.0–9.0）、MOPS、HEPES、超纯水、PBS、NaCl 溶液、TAE / TBE 电泳缓冲液、EDTA 缓冲液。不适用：已含活性酶的反应体系（45°C 以上化学活性会使酶失活）；强还原剂体系（DTT、β-巯基乙醇可能竞争反应）；pH  9 的极端酸碱体系。

Question 5

保存条件？

Accepted Answer

-20°C 保存，有效期 12 个月。建议减少开瓶次数，操作时佩戴手套和实验服。

Question 6

适用哪些应用场景？

Accepted Answer

① 配制 RNase-free 缓冲液（Tris、MOPS、HEPES 等 DEPC 无法处理的体系）；② 保护提取后 RNA 的长期保存稳定性；③ 替代 DEPC 处理超纯水；④ 体外转录（T7/T3/SP6）前缓冲液处理；⑤ RT-PCR / RT-qPCR 体系配制；⑥ RNase 污染应急处理。

Question 7

加酶顺序为何关键？

Accepted Answer

本品在 45°C 以上具有强化学活性，可能导致不耐热酶失活，因此酶促反应须在 45°C 以下进行。正确顺序：先加本品处理缓冲液 → 60°C 加热 → 冷却至室温 → 再加逆转录酶、T7/SP6 RNA 聚合酶等不耐热酶。Taq 等耐热酶不受影响，可同步加入。

Question 8

使用方法？

Accepted Answer

① 按 1:24 加入本品至终浓度 1×（示例：10 mL 待处理液 + 400 μL 本品），充分混匀；② 60°C 孵育 10–20 分钟（标准 10 分钟）；③ 冷却至室温；④ 冷却后再加入不耐热酶（逆转录酶等）；⑤ 处理后溶液可在室温、4°C 或 -20°C 长期储存；⑥ 若发生二次污染，重新 60°C 加热 10–20 分钟即可再次灭活。

Question 9

与 DEPC 的核心区别？

Accepted Answer

DEPC 操作耗时、存在安全隐患，且只能灭活处理时已存在的 RNase；含伯胺的缓冲液（如 Tris、MOPS、HEPES）完全无法用 DEPC 处理；此外 DEPC 处理后必须高压灭菌才能使用，残留 DEPC 会抑制下游酶反应。本品无上述限制：无毒安全、可处理 Tris 等含氨基缓冲液、60°C 孵育即可完成灭活、无需高压灭菌、可重复加热处理二次污染。

Question 10

本产品的核心特点？

Accepted Answer

RNA Chill 是一种高效、安全、无毒的非酶类 RNase 灭活试剂，可完全替代有毒的 DEPC。与 DEPC 不同，本品可用于几乎任何溶液，无需高压蒸汽灭菌后处理；且初次处理后若发生二次污染，重新加热即可再次激活灭活效果。本品以 25× 浓缩液供应，与 Thermo Fisher RNAsecure（AM7005/AM7006）为同类产品，配方等效，性价比更优。

ES-8520 RNA Chill RNase灭活试剂(25×)