【保存条件】
-20℃避光保存,有效期12个月
【概述】
DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐)是一种高灵敏度的蓝色荧光染料,能特异性地结合双链DNA 中的A-T碱基。产品特性:
即用型:本品使用进口ROCHE原料,为DAPI-PBS工作液(10μg/mL),经过滤去除杂质,无需稀释,可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。
穿透性强:适用于固定细胞/组织染色。(若需活细胞染色,建议选购 ES-8256 VisiColor Hoechst 33342)。
多重染色兼容:最大吸收波长为358 nm,最大发射波长为461 nm(蓝色)。其发射光谱与GFP(绿色)或Texas Red(红色)重叠极少,是多重荧光染色的理想对照。
【使用方法】
1. 样本预处理:细胞或组织需先经固定(如用ES-8100 4%组织/细胞固定液),后充分洗涤去除固定剂。
重要提示:若需进行免疫荧光(IF)染色,请务必在完成所有抗体孵育与洗涤后,再进行DAPI染色。
2. 染色操作:
贴壁细胞/组织切片:加入适量DAPI染色液,确保完全覆盖样品。
悬浮细胞:按照待染样品体积的3倍量加入染色液,轻轻混匀。
3. 孵育:室温避光孵育5–10分钟。
4. 洗涤:吸除染色液,使用PBS洗涤2–3次,每次3–5分钟,以降低背景荧光。
5. 观察:直接在荧光显微镜下观察,或使用抗荧光淬灭封片液封片后观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
【注意事项】
1. 防淬灭:荧光染料均存在光淬灭。建议染色后尽快完成检测;长期保存使用抗荧光淬灭封片液(ES-8313)。
2. 安全防护:DAPI被普遍认为具有潜在的诱变性/致癌性。操作时请务必佩戴一次性手套。