ES-8252 VisiColor Hoechst 33258染色液（即用型）

【保存条件】

-20℃避光保存，有效期12个月

【概述】

Hoechst 33258 是一种可穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞毒性较低。它特异性地结合双链 DNA 的 AT 富集区域，产生明亮的蓝色荧光。本品为进口原料配制，成像与稳定效果更佳。

核心应用：细胞凋亡检测（凋亡细胞核呈致密浓染或碎块状）、普通细胞核染色、DNA 定量检测。

光谱特性：最大激发波长为352 nm，最大发射波长为461 nm（结合DNA后）。

适用范围：兼容固定后的细胞/组织，也兼容活细胞/活组织。

【使用方法】

使用前请将本品置于室温避光解冻，并充分摇匀。

1. 固定细胞或组织样本（终点检测）

①　准备：使用固定液（如ES-8100 4％组织/细胞固定液）固定样品后，用PBS洗涤1-2次去除残留固定剂。若需进行免疫荧光（IF），请先完成IF染色，最后进行Hoechst染色。

②　染色：
贴壁细胞/切片：吸除 PBS，直接加入适量染色液完全覆盖样品。
悬浮细胞：离心收集细胞沉淀（约300×g），弃上清。加入3–5倍沉淀体积的染色液，轻轻吹打重悬细胞。

③　孵育：室温放置3-5分钟。

④　洗涤：离心（约300×g）收集细胞并弃去染液，用PBS洗涤2-3次，每次3-5分钟。

⑤　观察：直接镜检或使用 ES-8312 抗荧光淬灭封片剂封片后观察。

2. 活细胞或培养组织（动态/活性检测）

①　加样方式：
方案 A（直接加入法）：推荐用于凋亡检测。不弃去旧培养基，直接按1:1比例加入染色液（如1mL培养液加1mL染液）。此法可最大程度保留漂浮的凋亡细胞，减少换液应激。
方案 B（换液覆盖法）：推荐用于高分辨率拍照。弃去培养基，用PBS轻轻洗涤一次，加入足量染色液覆盖细胞。

②　孵育：在细胞培养箱（37°C）或室温下孵育20–30分钟。

③　洗涤：弃染色液，用PBS洗涤2-3次。

④　检测：荧光显微镜下观察。凋亡细胞可见核浓缩、碎裂及强烈的蓝色荧光。

【选型参考：Hoechst 33342与33258 如何选择？】
活细胞染色：首选 Hoechst 33342。其独特的亲脂性结构确保了极高的膜渗透速率，是动态观察和活体成像的最佳选择。

固定样本：两者均可。若追求极致性价比，固定样本推荐使用 Hoechst 33258。

流式检测：涉及SP细胞分选或精确的细胞周期分析时，推荐使用 Hoechst 33342。

【注意事项】

1. 淬灭预防：荧光染料均存在猝灭风险，操作过程中应严格避光，建议染色后当天完成检测。

2. 如果您做的是活细胞动力学研究：推荐使用ES-8256 VisiColor Hoechst 33342活细胞染色液（即用型）。其更强的亲脂性确保了更短的孵育时间和更均匀的活细胞核染色。

3. 背景优化：培养基中的酚红和血清蛋白可能产生轻微背景干扰。若背景过深，建议洗涤后更换为PBS或无酚红培养基进行观察。

4. 安全防护：操作时请务必穿着实验服并佩戴一次性手套。仅供科研研究，严禁用于临床医疗、食品或动物治疗。