产品描述
【保存条件】
-20℃避光保存，有效期12个月
【概述】
Hoechst 33258 是一种可穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞毒性较低。它特异性地结合双链 DNA 的 AT 富集区域，产生明亮的蓝色荧光。本品为进口原料配制，成像与稳定效果更佳。
核心应用：细胞凋亡检测（凋亡细胞核呈致密浓染或碎块状）、普通细胞核染色、DNA 定量检测。
光谱特性：最大激发波长为352 nm，最大发射波长为461 nm（结合DNA后）。
适用范围：兼容固定后的细胞/组织，也兼容活细胞/活组织。
【使用方法】
使用前请将本品置于室温避光解冻，并充分摇匀。
1. 固定细胞或组织样本（终点检测）
① 准备：使用固定液（如ES-8100 4％组织/细胞固定液）固定样品后，用PBS洗涤1-2次去除残留固定剂。若需进行免疫荧光（IF），请先完成IF染色，最后进行Hoechst染色。
② 染色：
贴壁细胞/切片：吸除 PBS，直接加入适量染色液完全覆盖样品。
悬浮细胞：离心收集细胞沉淀（约300×g），弃上清。加入3–5倍沉淀体积的染色液，轻轻吹打重悬细胞。
③ 孵育：室温放置3-5分钟。
④ 洗涤：离心（约300×g）收集细胞并弃去染液，用PBS洗涤2-3次，每次3-5分钟。
⑤ 观察：直接镜检或使用 ES-8312 抗荧光淬灭封片剂封片后观察。
2. 活细胞或培养组织（动态/活性检测）
① 加样方式：
方案 A（直接加入法）：推荐用于凋亡检测。不弃去旧培养基，直接按1:1比例加入染色液（如1mL培养液加1mL染液）。此法可最大程度保留漂浮的凋亡细胞，减少换液应激。
方案 B（换液覆盖法）：推荐用于高分辨率拍照。弃去培养基，用PBS轻轻洗涤一次，加入足量染色液覆盖细胞。
② 孵育：在细胞培养箱（37°C）或室温下孵育20–30分钟。
③ 洗涤：弃染色液，用PBS洗涤2-3次。
④ 检测：荧光显微镜下观察。凋亡细胞可见核浓缩、碎裂及强烈的蓝色荧光。
【选型参考：Hoechst 33342与33258 如何选择？】
活细胞染色：首选 Hoechst 33342。其独特的亲脂性结构确保了极高的膜渗透速率，是动态观察和活体成像的最佳选择。
固定样本：两者均可。若追求极致性价比，固定样本推荐使用 Hoechst 33258。
流式检测：涉及SP细胞分选或精确的细胞周期分析时，推荐使用 Hoechst 33342。
【注意事项】
1. 淬灭预防：荧光染料均存在猝灭风险，操作过程中应严格避光，建议染色后当天完成检测。
2. 如果您做的是活细胞动力学研究：推荐使用ES-8256 VisiColor Hoechst 33342活细胞染色液（即用型）。其更强的亲脂性确保了更短的孵育时间和更均匀的活细胞核染色。
3. 背景优化：培养基中的酚红和血清蛋白可能产生轻微背景干扰。若背景过深，建议洗涤后更换为PBS或无酚红培养基进行观察。
4. 安全防护：操作时请务必穿着实验服并佩戴一次性手套。仅供科研研究，严禁用于临床医疗、食品或动物治疗。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 10ml、10ml×10瓶
应用领域
本产品适用于ES-8252、细胞染色、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
-20℃避光保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
-20℃ 避光保存，有效期 12 个月。
注意事项？
提示：淬灭预防：荧光染料均存在淬灭风险，操作过程中应严格避光，建议染色后当天完成检测。如果您做的是活细胞动力学研究：推荐使用 ES-8256 VisiColor Hoechst 33342 活细胞染色液——其更强的亲脂性确保了更短的孵育时间和更均匀的活细胞核染色。
DAPI 与 Hoechst 系列染料如何选择？
三款染料的核心区别在于透膜性和适用样本：DAPI（本品）不易透过活细胞膜，主要用于固定样本，是免疫荧光实验的标准核染染料；Hoechst 33258 透膜性居中，固定样本和活细胞均可使用，性价比较好；Hoechst 33342 亲脂性强、透膜能力最强，是活细胞染色的首选，也常用于流式细胞术 SP 细胞分选。选择：① 凋亡形态学性价比 → Hoechst 33258（本品）；② IF 标准核染 → DAPI；③ 活细胞动态观察 → Hoechst 33342。
可用于哪些应用场景？
适用：① 凋亡检测（核形态学，性价比高）；② DNA 定量检测（细胞周期分析）；③ AT 富集区结合应用；④ 固定样本核染（与 IF 联合）；⑤ 染色质构象研究；⑥ 多重染色配色（蓝色与 GFP 绿、TRITC 橙红互补）。
背景优化？
提示：背景优化：培养基中的酚红和血清蛋白可能产生轻微背景干扰。若背景过深，建议洗涤后更换为 PBS 或无酚红培养基进行观察。——使用无酚红培养基（HBSS、ES-8036/8038 D-Hank's）可显著降低背景。
染色判读？
凋亡细胞可见核浓缩、碎裂及强烈的蓝色荧光。——Hoechst 染色对凋亡形态学评估特别灵敏：① 正常核：均匀分布的蓝色荧光；② 凋亡早期：染色质边集化（核边缘浓染）；③ 凋亡晚期：染色质浓缩成致密核或碎裂成凋亡小体（多个亮蓝小点）。
活细胞染色的两种方法？
活细胞或培养组织（动态/活性检测）：加样方式：方案 A（直接加入法）：推荐用于凋亡检测。不弃去旧培养基，直接按 1:1 比例加入染色液（如 1 mL 培养液加 1 mL 染液）。此法可最大程度保留漂浮的凋亡细胞，减少换液应激；方案 B（换液覆盖法）：推荐用于高分辨率拍照。弃去培养基，用 PBS 轻轻洗涤一次，加入足量染色液覆盖细胞。孵育：在细胞培养箱（37℃）或室温下孵育 20–30 min；洗涤 + 镜检。
固定样本染色流程？
① 准备：使用固定液（如 ES-8100 4% PFA）固定样品后，用 PBS 洗涤 1–2 次去除残留固定剂。若需进行 IF，请先完成 IF 染色，最后进行 Hoechst 染色；② 染色：贴壁细胞/切片：吸除 PBS，直接加入适量染色液完全覆盖样品；悬浮细胞：离心收集细胞沉淀（约 300×g），弃上清。加入 3–5 倍沉淀体积的染色液，轻轻吹打重悬细胞；③ 孵育：室温放置 3–5 min；④ 洗涤：离心（约 300×g）收集细胞并弃去染液，用 PBS 洗涤 2–3 次，每次 3–5 min；⑤ 观察：直接镜检或使用 ES-8312 抗荧光淬灭封片剂封片后观察。
与 ES-8256（Hoechst 33342）的关键区别？
选型参考：① 活细胞染色：首选 Hoechst 33342——亲脂性结构确保了极高的膜渗透速率，是动态观察和活体成像的最佳选择；② 固定样本：两者均可。若追求极致性价比，固定样本推荐使用 Hoechst 33258（本品）；③ 流式检测：涉及 SP 细胞分选或精确的细胞周期分析时，推荐使用 Hoechst 33342。
本产品的核心特点？
Hoechst 33258 是一种可穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞毒性较低。它特异性地结合双链 DNA 的 AT 富集区域，产生明亮的蓝色荧光。本品为进口原料配制，成像与稳定效果更佳。核心应用：细胞凋亡检测（凋亡细胞核呈致密浓染或碎块状）、普通细胞核染色、DNA 定量检测。光谱特性：最大激发波长 352 nm，最大发射波长 461 nm（结合 DNA 后）。适用范围：兼容固定后的细胞/组织，也兼容活细胞/活组织。
