产品描述
【保存条件】
-20℃避光保存，有效期1年。
【概述】
Hoechst 33342 是一种高度亲脂性的蓝色荧光染料。与Hoechst 33258相比，它具有更强的细胞膜穿透能力。
核心优势：活细胞染色的首选。能极快地穿透完整细胞膜，对活细胞毒性极低，适合长时间动态观察。
应用：活细胞显微成像、流式细胞术（细胞周期分析、SP细胞分选）、凋亡检测。
光谱：最大激发波长350nm，最大发射波长461nm（结合DNA后）。
【使用方法】
使用前请将本品置于室温避光自然解冻，并充分摇匀。
1. 活细胞或培养组织（首选应用）
由于Hoechst 33342渗透力极强，孵育时间可较Hoechst 33258适当缩短。
① 加样方式：
方案 A（直接法）：在现有培养基中按1:1比例加入染色液。此法对细胞干扰最小，适合观察活细胞自然状态。
方案 B（换液法）：弃培养基，PBS洗涤一次，加入足量染色液覆盖细胞。此法荧光信号最纯净。
② 孵育：在细胞培养箱（37°C）或室温下孵育10–20分钟。
③ 洗涤：弃去染色液，用PBS洗涤1-2次。
④ 检测：荧光显微镜下观察或流式细胞仪检测。
2. 固定细胞或组织样本
⑤ 准备：使用固定液（如ES-8100 4％组织/细胞固定液）固定样品后，用PBS洗涤1-2次。
⑥ 染色：
贴壁细胞/切片：吸除 PBS，加入适量染色液覆盖样品。
悬浮细胞：离心收集细胞沉淀（约300×g），弃上清。加入3-5倍沉淀体积的染色液重悬。
⑦ 孵育：室温避光放置3-5分钟。
⑧ 洗涤：吸除（或离心弃去）染液，用 PBS 洗涤1-2次。
⑨ 观察：直接镜检或使用ES-8312 抗荧光淬灭封片剂封片后观察。
【选型参考：Hoechst 33342与33258 如何选择？】
活细胞染色：首选 Hoechst 33342。其独特的亲脂性结构确保了极高的膜渗透速率，是动态观察和活体成像的最佳选择。
固定样本：两者均可。若追求极致性价比，固定样本推荐使用 Hoechst 33258。
流式检测：涉及SP细胞分选或精确的细胞周期分析时，推荐使用 Hoechst 33342。
【注意事项】
1. 避光防淬灭：荧光染料操作需严格避光。建议配合使用 ES-8312 抗荧光淬灭封片剂。
2. 背景干扰：培养基中的酚红可能吸收紫外激发光。如背景过深，请洗涤后更换为无酚红培养基或PBS。
3. 浓度控制：若用于极敏感细胞出现过染，可用PBS进一步稀释使用。
4. 安全防护：操作请佩戴手套。仅供科研使用，严禁临床应用。
【参考文献】
1. Targeting a therapeutic LIF transgene to muscle via the immune system ameliorates muscular dystrophy. Steven S Welc et al. Nature communications, 10(1), 2788-2788 (2019)
2. The transforming activity of Wnt effectors correlates with their ability to induce the accumulation of mammary progenitor cells. Liu BY, et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 101, 4158-4163 (2004)
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 10ml、10ml×10瓶
应用领域
本产品适用于ES-8256、细胞染色、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
-20℃避光保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
-20℃ 避光保存，有效期 1 年。避光防淬灭：荧光染料操作需严格避光。建议配合使用 ES-8312 抗荧光淬灭封片剂。
DAPI 与 Hoechst 系列染料如何选择？
三款染料的核心区别在于透膜性和适用样本：DAPI（本品）不易透过活细胞膜，主要用于固定样本，是免疫荧光实验的标准核染染料；Hoechst 33258 透膜性居中，固定样本和活细胞均可使用，性价比较好；Hoechst 33342 亲脂性强、透膜能力最强，是活细胞染色的首选，也常用于流式细胞术 SP 细胞分选。选择：① 凋亡形态学性价比 → Hoechst 33258（本品）；② IF 标准核染 → DAPI；③ 活细胞动态观察 → Hoechst 33342。
浓度优化？
提示：浓度控制：若用于极敏感细胞出现过染，可用 PBS 进一步稀释使用。——本品是即用型，但对某些极敏感细胞（如原代神经元、特定干细胞）可能过染：① 稀释 1:2 至 1:5 使用；② 缩短孵育时间（5 min 起步）；③ 实验前做浓度梯度优化。
背景优化？
提示：背景干扰：培养基中的酚红可能吸收紫外激发光。如背景过深，请洗涤后更换为无酚红培养基或 PBS。——荧光显微镜紫外激发时，酚红会吸收激发光形成红色背景，干扰 Hoechst 蓝色信号。解决：① 染色前换为无酚红培养基（HBSS / ES-8036/8038）；② 染色后 PBS 替换；③ 选择能有效避开酚红光谱的滤光片组。
可用于哪些应用场景？
活细胞显微成像、流式细胞术（细胞周期分析、SP 细胞分选）、凋亡检测。扩展应用：① 活细胞动力学（如染色质动态、有丝分裂动态）；② 共聚焦活细胞核标记；③ 多色流式中的核标记（与表面标志物联用）；④ 类器官 / 球体活细胞核染（穿透性强）；⑤ 小型动物在体成像（活体核标记）。
SP 细胞分选的应用？
SP（Side Population）细胞分选是干细胞研究的关键技术，依赖 Hoechst 33342 的高细胞膜通透性：① 活细胞被 Hoechst 33342 染色；② 干细胞高表达 ABCG2 转运体可主动外排 Hoechst 33342，染色弱；③ 流式细胞术通过 Hoechst 蓝色 + 红色双通道（450 nm + 670 nm）发射检测；④ 染色弱的细胞群（SP 群）即为富集的干细胞。只有 Hoechst 33342（本品）能做 SP 分选——33258 透膜慢无法快速达到平衡。
固定样本染色流程？
① 准备：固定液固定样品后，PBS 洗涤 1–2 次；② 染色：贴壁细胞/切片加染色液覆盖；悬浮细胞加 3–5 倍沉淀体积的染色液重悬；③ 孵育：室温避光放置 3–5 min（比活细胞短）；④ 洗涤：吸除（或离心弃去）染液，用 PBS 洗涤 1–2 次；⑤ 直接镜检或使用 ES-8312 抗荧光淬灭封片剂封片后观察。
活细胞染色流程（首选应用）？
由于 Hoechst 33342 渗透力极强，孵育时间可较 Hoechst 33258 适当缩短。加样方式：① 方案 A（直接法）：在现有培养基中按 1:1 比例加入染色液。此法对细胞干扰最小，适合观察活细胞自然状态；② 方案 B（换液法）：弃培养基，PBS 洗涤一次，加入足量染色液覆盖细胞。此法荧光信号最纯净；孵育：在细胞培养箱（37℃）或室温下孵育 10–20 min；洗涤：弃去染色液，用 PBS 洗涤 1–2 次；检测：荧光显微镜下观察或流式细胞仪检测。
与 ES-8252（Hoechst 33258）的关键区别？
选型参考：① 活细胞染色：首选 Hoechst 33342（本品）——亲脂性结构确保了极高的膜渗透速率，是动态观察和活体成像的最佳选择；② 流式检测：涉及 SP 细胞分选或精确的细胞周期分析时，推荐使用 Hoechst 33342（本品）；③ 固定样本：两者均可，追求极致性价比可选 Hoechst 33258。
本产品的核心特点？
Hoechst 33342 是一种高度亲脂性的蓝色荧光染料。与 Hoechst 33258 相比，它具有更强的细胞膜穿透能力。核心优势：活细胞染色的首选。能极快地穿透完整细胞膜，对活细胞毒性极低，适合长时间动态观察。应用：活细胞显微成像、流式细胞术（细胞周期分析、SP 细胞分选）、凋亡检测。光谱：最大激发波长 350 nm，最大发射波长 461 nm（结合 DNA 后）。
