ES-8107 VisiColor结晶紫染色液（0.4%）

【保存条件】

室温避光储存，有效期12个月

【概述】

结晶紫（Crystal Violet）是一种碱性染料，能与细胞核内的DNA及细胞质中的蛋白质结合。 在微生物学中：作为革兰氏染色的初染剂，用于区分革兰氏阳性菌（紫色）与阴性菌（红色）。在细胞生物学中：用于贴壁细胞的染色，是克隆形成实验、Transwell 迁移/侵袭实验中细胞定量的金标准。

【使用方法II-细胞生物学实验】

1. 细胞克隆形成实验 (Colony Formation)
固定：弃培养基，PBS 洗涤2 次。使用固定液（如ES-8100 4％组织/细胞固定液）固定细胞15分钟。
染色：加入适量结晶紫（推荐使用PBS稀释至0.1%），染色10-30分钟。
观察：流水缓慢洗去余液，室温干燥后肉眼计数紫色克隆点。

2. Transwell 迁移/侵袭实验
固定：将Transwell 小室加入固定液（如ES-8100 4％组织/细胞固定液）中固定15分钟。 
染色：将小室浸入结晶紫染色液中，常温染色15-20分钟。
处理：擦除小室上层未迁移的细胞，蒸馏水漂洗3次。 
定量：镜下计数或使用10%醋酸洗脱染色液，于570nm处测定吸光度。

【使用方法II-细胞革兰氏染色（经典流程）】

1. 涂片与固定：在载玻片上涂布薄层菌液，室温自然干燥（或微火烘干）。 在酒精灯火焰外侧快速通过3-5次进行热固定，待冷却后染色。

2. 初染（Primary Stain）：滴加结晶紫染色液覆盖标本，染色1-2分钟，清水轻缓冲洗。

3. 媒染（Mordant）：滴加 Gram 碘液覆盖标本，室温放置1-2分钟，水洗。

4. 脱色（Decolorization）：关键步骤。滴加脱色液（如95%乙醇），轻轻摇动10-30s，至流下的液体不显紫色为止，立即水洗终止。注意：脱色不足会导致假阳性，脱色过度会导致假阴性。

5. 复染（Counterstain）：滴加沙黄（番红）染色液，染色30-60s，水洗，吸干。

6. 结果判定：革兰氏阳性菌呈蓝色至紫色；革兰氏阴性菌呈红色。

【技术指南：关于洗涤液的选择】

染色前：必须使用PBS。用于洗去培养基或固定液，维持细胞原有形态，防止pH值剧烈变化影响染色效果。

染色后：推荐使用蒸馏水或缓慢流动的自来水。结晶紫极易溶于水，水洗能迅速清除背景余液，且避免了PBS干透后留下盐结晶干扰拍照或吸光度检测。

【注意事项】

1. 菌龄要求：细菌鉴定建议使用对数生长期鲜活细菌。培养时间过长（>24h）可能导致阳性菌呈现阴性染色结果。

2. 浓度建议：本品为0.4%标准液。革兰氏染色建议直接使用；细胞克隆实验为获得更干净的背景，建议用PBS稀释4倍（至 0.1%）使用。

3. 沉淀说明：4°C存放如出现少量沉淀，可于37°C水浴片刻溶解，不影响使用效果。

4. 安全防护：操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。仅供科研使用，严禁用于临床医疗、食品或动物治疗。