EK-5201 细胞培养基上清外泌体提取试剂

【保存条件】

4ºC保存，有效期12个月

【概述】

外泌体（Exosomes）是直径约30-120nm的脂质双分子层纳米级囊泡。传统的分离方法（如超速离心）耗时长、对设备要求高且回收率不稳定。

本产品采用先进的聚合物沉淀技术，通过束缚水分子降低外泌体的溶解度，仅需常规低速离心即可从培养基上清中高效富集完整的总外泌体。

高效回收：最大限度提高完整外泌体的回收率，适用于各类下游分析。

简便快捷：无需昂贵的超速离心机，显著缩短实验耗时。

灵活性强：实验体系可随样品量（从1mL到100mL）同比例线性缩放。

【操作方法】

1. 样品前期处理（去碎片）

①　收集细胞培养基（建议使用 无外泌体血清 培养细胞，避免血清背景干扰）。

②　2000×g离心30min以去除细胞及大体积细胞碎屑。

③　小心将上清液转移至新管中。若上清液较多或较粘稠，建议增加一次10,000×g离心30min以彻底去除微囊泡。

2. 外泌体分离步骤

①　加样：取所需体积的上清液，按2:1的比例加入本试剂（即0.5倍体积）。
示例：10mL上清液加入5mL提取试剂。

②　混匀：充分旋涡震荡或上下颠倒吹打，确保液体混合均匀。

③　孵育：置于2-8ºC过夜孵育（至少12小时）。

④　收集：孵育结束后，于4ºC条件下，10,000×g离心1小时。

⑤　弃液：小心吸走并丢弃上清。外泌体位于管底沉淀中。
注：沉淀通常呈透明或白色半透明状，肉眼可能不可见，吸样时请务必避开管底。

3. 重悬与保存

①　根据初始体积，加入适量PBS或使用EK-5200 ExoStore外泌体保存溶液重悬沉淀。

②　保存：提取出的外泌体建议立即使用。若需保存，4ºC可存放一周，长期保存请置于-80ºC（避免反复冻融），或使用EK-5200 ExoStore外泌体保存溶液可以更长时间维持外泌体活性。

【注意事项】

1. 血清干扰：普通胎牛血清（FBS）含有大量内源性外泌体。若下游实验为外泌体功能研究或RNA分析，强烈建议使用专用的无外泌体血清培养细胞。

2. 吸样技巧：离心后弃上清需极其小心。建议保留约10-20μL残余液以防触碰不可见的外泌体沉淀。

3. 样品时效：建议新鲜收集培养基后立即开始提取。长时间冷藏或冷冻保存上清液会显著降低外泌体的产量和质量。

4. 下游兼容：本品分离的外泌体可直接用于 Western Blot (WB)、纳米粒子跟踪分析 (NTA)、电镜观察 (TEM) 以及RNA/蛋白质提取。