产品描述
【保存条件】
4ºC保存，有效期12个月
【概述】
外泌体（Exosomes）是直径约30-120nm的脂质双分子层纳米级囊泡。传统的分离方法（如超速离心）耗时长、对设备要求高且回收率不稳定。
本产品采用先进的聚合物沉淀技术，通过束缚水分子降低外泌体的溶解度，仅需常规低速离心即可从培养基上清中高效富集完整的总外泌体。
高效回收：最大限度提高完整外泌体的回收率，适用于各类下游分析。
简便快捷：无需昂贵的超速离心机，显著缩短实验耗时。
灵活性强：实验体系可随样品量（从1mL到100mL）同比例线性缩放。
【操作方法】
1. 样品前期处理（去碎片）
① 收集细胞培养基（建议使用 无外泌体血清 培养细胞，避免血清背景干扰）。
② 2000×g离心30min以去除细胞及大体积细胞碎屑。
③ 小心将上清液转移至新管中。若上清液较多或较粘稠，建议增加一次10,000×g离心30min以彻底去除微囊泡。
2. 外泌体分离步骤
① 加样：取所需体积的上清液，按2:1的比例加入本试剂（即0.5倍体积）。
示例：10mL上清液加入5mL提取试剂。
② 混匀：充分旋涡震荡或上下颠倒吹打，确保液体混合均匀。
③ 孵育：置于2-8ºC过夜孵育（至少12小时）。
④ 收集：孵育结束后，于4ºC条件下，10,000×g离心1小时。
⑤ 弃液：小心吸走并丢弃上清。外泌体位于管底沉淀中。
注：沉淀通常呈透明或白色半透明状，肉眼可能不可见，吸样时请务必避开管底。
3. 重悬与保存
① 根据初始体积，加入适量PBS或使用EK-5200 ExoStore外泌体保存溶液重悬沉淀。
开始实验时所使用的上清液体积 | 重悬所需缓冲液体积 |
1mL | 25-100μL |
10mL | 100μL-1mL |
② 保存：提取出的外泌体建议立即使用。若需保存，4ºC可存放一周，长期保存请置于-80ºC（避免反复冻融），或使用EK-5200 ExoStore外泌体保存溶液可以更长时间维持外泌体活性。
【注意事项】
1. 血清干扰：普通胎牛血清（FBS）含有大量内源性外泌体。若下游实验为外泌体功能研究或RNA分析，强烈建议使用专用的无外泌体血清培养细胞。
2. 吸样技巧：离心后弃上清需极其小心。建议保留约10-20μL残余液以防触碰不可见的外泌体沉淀。
3. 样品时效：建议新鲜收集培养基后立即开始提取。长时间冷藏或冷冻保存上清液会显著降低外泌体的产量和质量。
4. 下游兼容：本品分离的外泌体可直接用于 Western Blot (WB)、纳米粒子跟踪分析 (NTA)、电镜观察 (TEM) 以及RNA/蛋白质提取。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50ml、100ml
应用领域
本产品适用于EK-5201、外泌体分离、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
提取出的外泌体建议立即使用
常见问题 (FAQ)
提取的外泌体如何保存？
提取的外泌体：建议立即使用；4℃ 可存放 1 周；长期保存请置于 -80℃（避免反复冻融），或使用 EK-5200 ExoStore 外泌体保存溶液可以更长时间维持外泌体活性。
与 EK-5202 / EK-5203 的样品差异？
适用不同的样本类型，不同体液的外泌体分离效率不同，需用对应配方。
与超速离心法的对比？
超速离心：① 需要昂贵的 100,000+ ×g 超离机（>50 万元）；② 单次仅能处理少量样品；③ 操作复杂耗时（4–8 h）；④ 对外泌体有剪切应力。本品：① 仅需常规低速离心机（10,000×g）；② 多管并行处理；③ 14 h（含过夜孵育）但实际操作仅 30 min；④ 温和聚合物沉淀。纯度对比：本品分离的外泌体含部分蛋白污染（聚合物沉淀的特性），适合 WB / NTA / RNA 提取。
可用于哪些下游应用？
Western Blot（WB）、纳米粒子跟踪分析（NTA）、电镜观察（TEM）以及 RNA/蛋白质提取。扩展应用：① 外泌体 miRNA 谱测序；② 外泌体疾病标志物（CD9/CD63/CD81/Alix/TSG101）；③ 细胞间通讯研究（外泌体摄取实验）；④ 外泌体药物递送研究；⑤ Exosome biomarker discovery。
样品时效？
样品时效：建议新鲜收集培养基后立即开始提取。长时间冷藏或冷冻保存上清液会显著降低外泌体的产量和质量。——细胞外泌体在培养基中放置时间越长越易聚集或被血清蛋白酶降解。建议：① 新鲜收集 + 立即处理；② 必须保存时 -80℃（不能 -20℃，冰晶损伤外泌体）。
吸样的关键技巧？
吸样技巧：离心后弃上清需极其小心。建议保留约 10–20 µL 残余液以防触碰不可见的外泌体沉淀。——外泌体沉淀通常是透明/半透明的几乎不可见沉淀，吸上清时距底层留 1 mm 液面，宁可少吸不要扰动。
为什么需要无外泌体血清？
血清干扰：普通胎牛血清（FBS）含有大量内源性外泌体。若下游实验为外泌体功能研究或 RNA 分析，强烈建议使用专用的无外泌体血清培养细胞。——FBS 中的牛源外泌体会污染细胞分泌的外泌体，导致：① 外泌体计数偏高（背景）；② miRNA 谱混入牛源 miRNA；③ 蛋白 WB 出现非特异条带。解决：① 使用无外泌体血清；② 在收集前先用无血清培养基培养 24–48 小时（如细胞耐受）。
起始量与典型流程？
① 样品前期处理（去碎片）：收集细胞培养基（建议使用无外泌体血清培养细胞，避免血清背景干扰）→ 2,000×g 离心 30 min 去除细胞及大碎片 → 转移上清；如上清液较多或较粘稠，建议增加一次 10,000×g 离心 30 min 彻底去除微囊泡；② 外泌体分离：取上清液，按 2:1 比例加入本试剂（即 0.5 倍体积）；示例：10 mL 上清液 + 5 mL 提取试剂；③ 混匀：充分涡旋震荡或上下颠倒吹打；④ 孵育：2–8℃ 过夜孵育（至少 12 小时）；⑤ 收集：4℃ 10,000×g 离心 1 小时；⑥ 弃液：小心吸走上清，外泌体在管底沉淀（通常呈透明或白色半透明状，肉眼可能不可见）。
本产品的核心特点？
外泌体是直径约 30–120 nm 的脂质双分子层纳米级囊泡。传统的分离方法（如超速离心）耗时长、对设备要求高且回收率不稳定。本产品采用先进的聚合物沉淀技术，通过束缚水分子降低外泌体的溶解度，仅需常规低速离心即可从培养基上清中高效富集完整的总外泌体。高效回收：最大限度提高完整外泌体的回收率。简便快捷：无需昂贵的超速离心机，显著缩短实验耗时。灵活性强：实验体系可随样品量（从 1 mL 到 100 mL）同比例线性缩放。
