Q: 注意事项与保存？

温度敏感性：裂解过程建议在冰上进行，以最大限度减少裂解液对有核细胞（尤其是淋巴细胞）活性的影响。时间控制：孵育时间不宜超过 15 分钟。长时间暴露在氯化铵环境下会导致白细胞活性下降及非特异性死亡。RNA 提取提醒：若后续用于总 RNA 提取，建议在最后一次离心后立即加入 RNAex ZOL（EK-5301）等裂解液，或确保全程使用 DEPC 水配制的缓冲液。血样要求：必须使用抗凝血（EDTA 或枸橼酸钠）。凝固的血块会导致白细胞被包裹在内，极大降低回收率。

Q: 组织样本（脾脏/淋巴结）处理流程？

方案 B：制备悬液：组织经机械研磨或酶（胰酶/胶原酶）消化分散成单细胞悬液。离心弃液：500×g 离心 5 分钟，弃去上清。裂解：加入 2–5 倍细胞沉淀体积的红细胞裂解液，轻弹管底重悬，冰上孵育 2–5 分钟。洗涤：加入 5 倍体积的 PBS 终止裂解，离心收集细胞。——组织样本孵育时间显著短于全血（2–5 min vs 8–15 min），因为细胞稀薄、暴露面积大。

Q: 抗凝全血/骨髓样本处理流程？

方案 A：比例混合：向 1 倍体积的新鲜抗凝全血中加入 3 倍体积的红细胞裂解液（如 1 mL 血加入 3 mL 裂解液）。轻轻颠倒混匀。冰上孵育：置于冰上静置 8–15 分钟。期间建议轻轻颠倒混匀 2–3 次。注：当混合液由浑浊红色变为清亮、半透明红色时，表示红细胞已充分裂解。离心收集：4℃，450×g 离心 10 分钟。弃液：小心吸除上清液（含血红蛋白及碎片），保留白色或浅红色的白细胞沉淀。二次洗涤（可选）：若红细胞残留较多，可向沉淀中再次加入 2 倍体积的裂解液重复以上步骤。重悬：使用 PBS 或细胞培养基重悬，进行后续实验。

Q: 本产品的核心特点？

ACK 红细胞裂解液（Ammonium-Chloride-Potassium）主要用于从人或动物的抗凝全血、骨髓、脾脏及其他组织单细胞悬液中去除红细胞。本品为无菌溶液。原理：利用红细胞与有核细胞（如淋巴细胞、颗粒细胞等）对渗透压耐受性的差异。氯化铵能使无核红细胞发生选择性渗透压裂解，而对有核白细胞几乎无损伤。应用：适用于流式细胞术、原代细胞培养、细胞融合、核酸或蛋白提取等后续实验。

Question 1

保存与安全？

Accepted Answer

室温保存，有效期 12 个月——氯化铵稳定，无需冷藏。长期建议：4℃ 避光更稳。报废信号：① 溶液变浑浊或长菌（虽为无菌品但开瓶后仍可能污染）；② 颜色变化；③ pH 漂移（应在 7.0–7.4）。

Question 2

替代方案与下游兼容？

Accepted Answer

ACK 替代品：① ES-8232（10×ACK 浓缩版）——大批量更经济；② ES-8233/8234（RBC 优化型）——对淋巴细胞更温和；③ 密度梯度（Ficoll-Paque）——直接分离 PBMC 不裂解；④ CD45 磁珠正向富集——纯度最高但成本高。下游兼容：① PCR/qPCR：完全兼容；② Western blot：兼容；③ RNA 提取：建议立即加 RNAex/Trizol 防 RNase；④ 后续培养：完全兼容（ES-8231 为无菌产品）；⑤ 基因组 DNA 提取：本品白细胞可直接进 EK 系列血液 DNA 试剂盒。

Question 3

常见错误与故障排查？

Accepted Answer

错误 1：裂解不完全（沉淀仍偏红）——原因：①血液量过大；②裂解液量不足；③孵育时间过短；④温度过低。对策：增加裂解液到 5–10×、孵育 12–15 min、室温稍微回暖。错误 2：白细胞回收率低——原因：①裂解时间过长（>15 min）；②离心力过低（应 ≥450×g）；③弃上清时吸到沉淀。错误 3：流式 FSC/SSC 异常碎片多——原因：①血样冻融过；②裂解过度。错误 4：镜检发现 RBC 影（透明圆环）——正常现象，洗涤一次即除。

Question 4

流式细胞术应用细节？

Accepted Answer

流式应用规范：① 裂解后细胞需做 1× PBS 洗涤 1–2 次——去除残留 NH₄Cl 防止后续渗透损伤；② 染色前重悬于 FACS Buffer（PBS + 1–2% BSA + 0.02% NaN₃）；③ 抗体稀释比例参照 BD/Biolegend 推荐；④ 设门时排除碎片（FSC-A/SSC-A 散点图低值区）；⑤ 死细胞染色（如 7-AAD/PI）建议加——长时间裂解会增加白细胞死亡。淋巴亚群分析（CD3/CD4/CD8/CD19/CD56）建议裂解时间不超过 10 min——更短的暴露保护表面抗原。

Question 5

作用机制详解 — 为什么 ACK 能选择性裂解红细胞？

Accepted Answer

ACK 渗透压裂解原理：① 红细胞缺乏细胞核 + 细胞器，渗透调节能力差；② NH₄Cl 在细胞内被碳酸酐酶（CA）转化为 NH₃ + H⁺——红细胞含高浓度碳酸酐酶（参与气体运输），反应快；③ NH₃ 自由扩散出膜，留下 H⁺ 改变渗透压；④ 同时 K⁺/HCO₃⁻ 维持白细胞渗透稳定。白细胞耐受：① 有核且有细胞器，渗透调节强；② 碳酸酐酶含量低，反应慢；③ 短时（<15 min）暴露不致裂解。临界点：超过 15 min 白细胞也会受损，因此严格控时是关键。

Question 6

注意事项与保存？

Accepted Answer

温度敏感性：裂解过程建议在冰上进行，以最大限度减少裂解液对有核细胞（尤其是淋巴细胞）活性的影响。时间控制：孵育时间不宜超过 15 分钟。长时间暴露在氯化铵环境下会导致白细胞活性下降及非特异性死亡。RNA 提取提醒：若后续用于总 RNA 提取，建议在最后一次离心后立即加入 RNAex ZOL（EK-5301）等裂解液，或确保全程使用 DEPC 水配制的缓冲液。血样要求：必须使用抗凝血（EDTA 或枸橼酸钠）。凝固的血块会导致白细胞被包裹在内，极大降低回收率。

Question 7

组织样本（脾脏/淋巴结）处理流程？

Accepted Answer

方案 B：制备悬液：组织经机械研磨或酶（胰酶/胶原酶）消化分散成单细胞悬液。离心弃液：500×g 离心 5 分钟，弃去上清。裂解：加入 2–5 倍细胞沉淀体积的红细胞裂解液，轻弹管底重悬，冰上孵育 2–5 分钟。洗涤：加入 5 倍体积的 PBS 终止裂解，离心收集细胞。——组织样本孵育时间显著短于全血（2–5 min vs 8–15 min），因为细胞稀薄、暴露面积大。

Question 8

抗凝全血/骨髓样本处理流程？

Accepted Answer

方案 A：比例混合：向 1 倍体积的新鲜抗凝全血中加入 3 倍体积的红细胞裂解液（如 1 mL 血加入 3 mL 裂解液）。轻轻颠倒混匀。冰上孵育：置于冰上静置 8–15 分钟。期间建议轻轻颠倒混匀 2–3 次。注：当混合液由浑浊红色变为清亮、半透明红色时，表示红细胞已充分裂解。离心收集：4℃，450×g 离心 10 分钟。弃液：小心吸除上清液（含血红蛋白及碎片），保留白色或浅红色的白细胞沉淀。二次洗涤（可选）：若红细胞残留较多，可向沉淀中再次加入 2 倍体积的裂解液重复以上步骤。重悬：使用 PBS 或细胞培养基重悬，进行后续实验。

Question 9

本产品的核心特点？

Accepted Answer

ACK 红细胞裂解液（Ammonium-Chloride-Potassium）主要用于从人或动物的抗凝全血、骨髓、脾脏及其他组织单细胞悬液中去除红细胞。本品为无菌溶液。原理：利用红细胞与有核细胞（如淋巴细胞、颗粒细胞等）对渗透压耐受性的差异。氯化铵能使无核红细胞发生选择性渗透压裂解，而对有核白细胞几乎无损伤。应用：适用于流式细胞术、原代细胞培养、细胞融合、核酸或蛋白提取等后续实验。

ES-8231 红细胞裂解液（ACK/RBC）

文献引用