产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月；-20℃保存，有效期24个月
【概述】
Polybrene（聚凝胺），化学名为海美溴铵（Hexadimethrine Bromide），是一种带正电荷的聚阳离子聚合物。本产品为超纯水配制并经0.22μm滤膜过滤除菌处理，可直接使用。
助感染原理：病毒颗粒与哺乳动物细胞表面通常均带有负电荷，存在静电排斥。Polybrene 通过中和电荷，显著增强慢病毒 (Lentivirus)、逆转录病毒等对细胞的吸附与感染效率。
多用途：除了增强病毒感染，也可用于提高脂质体转染效率或介导DNA直接转染。
【使用建议-病毒助感染】
1. 浓度摸索
Polybrene 对某些细胞（如原代神经元、造血干细胞）具有一定的细胞毒性。
常规用量：多数常用细胞系推荐使用6-8μg/mL。
计算示例：若要在1mL培养基中达到8μg/mL的终浓度，需加入本品0.8μL。
2. 标准操作流程
第一天（细胞铺板）：接种细胞，确保次日感染时细胞密度约为50%。37℃培养过夜。
第二天（病毒感染）：融化病毒，根据预实验的MOI值（感染复数）用新鲜完全培养基稀释病毒。加入适量Polybrene至推荐终浓度（如以8μg/mL终浓度计6孔板每孔2mL体系里加1.6μL即可）。吸除旧液，加入“病毒+培养基+Polybrene”混合液，37℃继续培养。
第三天（观察与维持）：感染后12-24小时观察细胞状态。若细胞毒性明显，可提前更换为新鲜培养基。
第四天（药物筛选）：弃去含病毒培养基，更换为含相应抗生素（如 Puromycin）的筛选培养基。筛选结束后收集细胞进行Western Blot、qPCR或流式检测。
【注意事项】
1. 混合顺序：先将病毒与培养基混匀后加入Polybrene，避免局部浓度过高导致病毒灭活。
2. 安全防护：仅供科研使用。操作时请佩戴实验服与一次性手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 1ml、1ml×5管
应用领域
本产品适用于ES-8425、慢病毒研究、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存，有效期12个月；-20℃保存
常见问题 (FAQ)
可用于哪些应用场景？
慢病毒、逆转录病毒等病毒感染助力。扩展应用：① CAR-T 细胞制备（T 细胞慢病毒感染）；② 稳定细胞系建立（shRNA / sgRNA 慢病毒）；③ 基因敲降文库筛选（高通量慢病毒文库感染）；④ iPSC 重编程（OSKM 因子慢病毒/逆转录病毒导入）；⑤ 干细胞修饰（造血干细胞 CD34+ 转导）；⑥ 脂质体转染助力（增强普通转染试剂效率）。
Spinoculation（离心助感染）的特殊用法？
针对极难感染细胞（如 T 细胞、原代造血干细胞），可在加 Polybrene 后进行离心助感染以显著提升转导效率。具体步骤：① 6 孔板中加入病毒液与 Polybrene；② 800×g、32°C 离心 90 min，离心目的是将病毒颗粒物理压近细胞表面、增加病毒与受体的接触概率，32°C 则有助于促进膜融合并减少细胞应激；③ 离心结束后转至 37°C 培养箱继续培养；④ 4–16 h 后视细胞毒性换液。该方法常用于 CAR-T 制备，与单纯 Polybrene 处理相比可显著提升慢病毒对原代免疫细胞的感染效率。
与 EK-5410 / ES-7011 浓缩病毒的搭配？
完整慢病毒感染链路：① 包装：EK-5403 VirPack ；② 浓缩：EK-5410 UniVir 或 ES-7011 LentiV-X；③ 保存：ES-7008 LentiV-X 保存液；④ 感染：本品 ES-8425 Polybrene 助感染（6–8 µg/mL）；⑤ 筛选：抗生素筛选稳定细胞系（Puromycin/G418/Hygromycin）。关键提示：浓缩后的病毒滴度高，配合 Polybrene 可大幅提升感染效率，特别是难感染细胞（CHO、CAR-T 前体细胞）。
MOI（感染复数）如何计算？
MOI = 病毒颗粒数（TU 或 IFU）/ 细胞数。常用 MOI：① 慢病毒：MOI 5–20（瞬时表达），MOI 30–50（高表达）；② 逆转录病毒：MOI 5–10；③ AAV：MOI 10⁵–10⁶（颗粒数极高）；④ CAR-T 制备：慢病毒 MOI 5–10（避免多重感染）。计算示例：6 孔板每孔 5×10⁵ 细胞，MOI=10，需用 5×10⁶ TU 病毒；若病毒滴度 1×10⁹ TU/mL，则取 5 µL。
混合顺序为何重要？
混合顺序：先将病毒与培养基混匀后加入 Polybrene，避免局部浓度过高导致病毒灭活。——Polybrene 高浓度会与病毒包膜直接作用导致灭活；正确顺序：① 解冻病毒；② 用培养基稀释病毒至 MOI 设计浓度；③ 最后加 Polybrene 至 6–8 µg/mL 终浓度；④ 加到细胞上。
标准感染流程？
4 天流程：① 第一天（细胞铺板）：接种细胞，确保次日感染时细胞密度约为 50%，37℃ 培养过夜；② 第二天（病毒感染）：融化病毒，根据预实验的 MOI 值用新鲜完全培养基稀释病毒；加入适量 Polybrene 至推荐终浓度（如以 8 µg/mL 终浓度计 6 孔板每孔 2 mL 体系里加 1.6 µL 即可）；吸除旧液，加入病毒+培养基+Polybrene混合液，37℃ 培养；③ 第三天（观察与维持）：感染后 12–24 h 观察细胞状态，若细胞毒性明显，可提前更换为新鲜培养基；④ 第四天（药物筛选）：弃含病毒培养基，更换为含相应抗生素（如 Puromycin）的筛选培养基；筛选后收集细胞做 WB / qPCR / 流式检测。
哪些细胞需要降低浓度？
注意：Polybrene 对某些细胞（如原代神经元、造血干细胞）具有一定的细胞毒性。建议浓度调整：① 耐受性好的肿瘤细胞系（HEK293、HeLa、MCF-7 等）：6–8 µg/mL；② 常规原代细胞：4–6 µg/mL；③ 原代神经元：2–4 µg/mL；④ 造血干细胞、CAR-T：2–4 µg/mL（建议联用 RetroNectin）；⑤ iPSC / ESC：避免使用，改用 spinoculation 离心助感染。
常用工作浓度？
常规用量：多数常用细胞系推荐使用 6–8 µg/mL。计算示例：若要在 1 mL 培养基中达到 8 µg/mL 的终浓度，需加入本品 0.8 µL。——储存液 10 mg/mL = 10,000 µg/mL，按 1:1,250 稀释即可达 8 µg/mL 工作浓度。
Polybrene 是什么？作用机制？
Polybrene（聚凝胺），化学名为海美溴铵（Hexadimethrine Bromide），是一种带正电荷的聚阳离子聚合物。本产品为超纯水配制并经 0.22 µm 滤膜过滤除菌处理，可直接使用。助感染原理：病毒颗粒与哺乳动物细胞表面通常均带有负电荷，存在静电排斥。Polybrene 通过中和电荷，显著增强慢病毒（Lentivirus）、逆转录病毒等对细胞的吸附与感染效率。多用途：除了增强病毒感染，也可用于提高脂质体转染效率或介导 DNA 直接转染。
