【保存条件及效期】
UniVir 病毒沉淀试剂 4ºC保存,其余-20ºC保存,有效期12个月
【用途】
本试剂盒适用于从细胞培养液等样品中高效富集慢病毒 (LV)、逆转录病毒 (RV)、腺相关病毒 (AAV)、腺病毒 (Adv) 及杆状病毒。试剂盒内所有产品均经0.22μm滤膜过滤处理,为无菌产品,操作时注意防止污染。
高效率:病毒回收率最高可达90%,支持10-100倍浓缩。
零门槛:无需超速离心机,普通冷冻离心机即可操作。
高活性:专配的保存液能显著延缓冻融过程中的滴度下降。
【使用方法】
1. 样本澄清:收集含病毒的上清液,4ºC,3500×g离心10分钟,以彻底去除细胞碎片。小心吸取澄清上清。
2. 混合与孵育:
① 按1:3的比例加入预冷的UniVir沉淀试剂 (4×)(如30mL上清加10mL沉淀剂)。
② 在混匀仪或侧摆摇床上以60rpm左右低速4°C混匀4-6小时或过夜。注:孵育时间越长得率越高,但通常不超过24小时。若样本量较大(>100mL),建议孵育12-18小时。
3. 离心收集:4ºC,3500×g离心30-60分钟。吸除上清,保留管底沉淀(沉淀通常呈米白色或半透明状)。
4. 重悬液配制(可选步骤,根据用途选择)
方案 A(细胞/组织感染):配制 1× 保存液工作液。每9mL病毒重悬液中加入1mL病毒保存液 (10×)。
方案 B(体内动物实验):严禁添加保存液,直接使用病毒重悬液。
方案 C(核酸提取):是否添加保存液均可。
5. 沉淀重悬
加入原上清体积1%-10%的重悬液(或配好的工作液),静置10分钟。使用移液器轻轻吹打20-30次使沉淀完全重悬,分装后立即置于-80°C保存备用。
注:严禁高速剧烈震荡,严禁产生气泡。
【注意事项】
1. 温度控制:整个沉淀过程必须在4°C下进行。温度偏高会导致沉淀不充分,严重影响回收率。
2. 粘稠度:沉淀试剂 (4×) 较为粘稠属正常现象,确保与上清液充分混匀是成功的关键。低温长时间保存可能会有晶体析出,若有使用前请将试剂瓶置于37℃水浴中温育10-20分钟,期间轻轻摇晃以促进溶解。
3. 安全操作:病毒实验属于BSL-2级别,请在生物安全柜内操作并佩戴防护用具。