产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
Bradford法（考马斯亮蓝法）基于染料与蛋白质结合后的显色反应。在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白结合，其最大吸收峰为595 nm。在一定范围内，A595吸光度值与蛋白质浓度呈正比。
去垢剂影响：需确保样品中SDS < 0.1%，Triton X-100 < 0.1%，Tween 系列 < 0.06%。若去垢剂超标，建议改用EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。
【使用方法】
1. 蛋白标准液的准备
① 稀释液选择：建议使用与样品相同的缓冲液稀释标准品。若不含干扰物质，也可用0.9% NaCl或PBS。
② 配制方案：按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/mL蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀（推荐在微量离心管中操作）：
编号 | 稀释液体积 | 标准品体积 | 最终浓度 |
A | 70µL | 5mg/mL BSA 30µL | 1.5mg/mL |
B | 30µL | 从A管取60µL | 1mg/mL |
C | 20µL | 从B管取60µL | 0.75mg/mL |
D | 30µL | 从C管取60µL | 0.5mg/mL |
E | 60µL | 从D管取60µL | 0.25mg/mL |
F | 60µL | 从E管取60µL | 0.125mg/mL |
G | 60µL | 0µL | 0mg/mL |
2. 蛋白浓度测定
① 加样：取5µL标准品或待测样品加至96孔板中。
注：若样品不足5µL，请用稀释液补足，并在计算浓度时乘以稀释倍数。
② 显色：每孔加入250µL G250染色液。
③ 测定：轻轻震荡混匀，立即使用酶标仪测定A595吸光度（或560-610 nm间其他波长）
④ 计算：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据曲线方程计算样品浓度。
【注意事项】
1. 反应速度：Bradford法显色极快，加样后建议立即检测。虽然2小时内信号相对稳定，但随时间增加可能产生蛋白-染料沉淀。
2. 清洗风险：G250会染色塑料和石英，若使用比色皿，实验后需用酒精洗涤。使用 96 孔板可避免清洗麻烦。
3. 干扰排除：若样品中含有高浓度表面活性剂（去垢剂），吸光度会异常升高。此时可通过稀释样品使去垢剂浓度降至限值以下，亦可选择EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。
4. 安全防护：染色液含有酸性成分，具有一定腐蚀性，请佩戴手套操作。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 1000T、5000T
应用领域
本产品适用于EK-5002、蛋白定量、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
可用于哪些应用场景？
适用：① WB 上样前快速蛋白定量（极快，1 min 完成）；② 蛋白纯化中浓度监测（柱后流分快速测）；③ 酶学实验前蛋白量；④ 干净样品（如纯化重组蛋白、抗体）；⑤ 配合温和裂解液（如 EasyLys-M ES-6220 等不含强去垢剂）。
清洗与设备保护？
清洗风险：G250 会染色塑料和石英，若使用比色皿，实验后需用酒精洗涤。使用 96 孔板可避免清洗麻烦。——本品颜色重，沾到塑料/石英后冷水难洗，建议：① 用 96 孔板（一次性）；② 比色皿用酒精洗；③ 移液器吸头染上后立即冷酒精洗。
反应速度的关键？
反应速度：Bradford 法显色极快，加样后建议立即检测。虽然 2 h 内信号相对稳定，但随时间增加可能产生蛋白-染料沉淀。——这是与 BCA 的核心差异：BCA 需要 37℃ 30 min 显色，Bradford 即时即可读数；但 Bradford 信号会随时间加深所以必须立即读。
完整测定流程？
① 加样：96 孔板加 5 µL 标准品或样品（不足 5 µL 补足）；② 显色：每孔 + 250 µL 1× G250 染色液；③ 测定：轻轻震荡混匀，立即使用酶标仪测定 A595 吸光度（或 560–610 nm）；④ 计算：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据曲线方程计算样品浓度。
标准曲线配制？
说明书规范同 EK-5001（标准曲线配制方案完全一致）：从 5 mg/mL BSA 母液稀释为 0–1.5 mg/mL 7 个浓度梯度（A–G）。
1× 工作液配制？
1×G250 工作液配制：取 1 份 5× G250 染色液，加入 4 份去离子水，混匀即可。若发现沉淀，请在使用前过滤或取上清。示例：5 mL 5× G250 + 20 mL 去离子水 = 25 mL 1× 工作液。
去垢剂的耐受限制？
说明书强调：去垢剂影响：需确保样品中 SDS < 0.1%，Triton X-100 < 0.1%，Tween-20/80 < 0.06%。若去垢剂超标，建议改用 EK-5004 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）或 EK-5001 BCA 蛋白定量试剂盒。
本试剂盒的核心特点？
说明书原文：Bradford 法（考马斯亮蓝法）基于染料与蛋白质结合后的显色反应。在酸性溶液中，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白结合，其最大吸收峰为 595 nm。在一定范围内，A595 吸光度值与蛋白质浓度呈正比。
