EK-5002 Bradford蛋白浓度测定试剂盒

【保存条件】

4℃保存，有效期12个月

【概述】

Bradford法（考马斯亮蓝法）基于染料与蛋白质结合后的显色反应。在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白结合，其最大吸收峰为595 nm。在一定范围内，A595吸光度值与蛋白质浓度呈正比。

去垢剂影响：需确保样品中SDS < 0.1%，Triton X-100 < 0.1%，Tween 系列 < 0.06%。若去垢剂超标，建议改用EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。

【使用方法】

1. 蛋白标准液的准备

①　稀释液选择：建议使用与样品相同的缓冲液稀释标准品。若不含干扰物质，也可用0.9% NaCl或PBS。

②　配制方案：按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/mL蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀（推荐在微量离心管中操作）：

2. 蛋白浓度测定

①　加样：取5µL标准品或待测样品加至96孔板中。

注：若样品不足5µL，请用稀释液补足，并在计算浓度时乘以稀释倍数。

②　显色：每孔加入250µL G250染色液。

③　测定：轻轻震荡混匀，立即使用酶标仪测定A595吸光度（或560-610 nm间其他波长）

④　计算：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据曲线方程计算样品浓度。

【注意事项】

1. 反应速度：Bradford法显色极快，加样后建议立即检测。虽然2小时内信号相对稳定，但随时间增加可能产生蛋白-染料沉淀。

2. 清洗风险：G250会染色塑料和石英，若使用比色皿，实验后需用酒精洗涤。使用 96 孔板可避免清洗麻烦。

3. 干扰排除：若样品中含有高浓度表面活性剂（去垢剂），吸光度会异常升高。此时可通过稀释样品使去垢剂浓度降至限值以下，亦可选择EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。

4. 安全防护：染色液含有酸性成分，具有一定腐蚀性，请佩戴手套操作。