ED-8452 SDT细胞裂解液

【保存条件】

4℃保存，有效期6个月。-20℃保存，有效期1年。

【概述】

SDT 裂解液是一种强效的蛋白质提取缓冲液，专为提取动物、植物及微生物样本的全蛋白而设计。其含有高浓度的离子型去垢剂SDS和强还原剂DTT，能够迅速破坏细胞膜结构，使蛋白质二级结构及疏水键断裂，彻底变性并溶解。

推荐应用： Western Blot、蛋白质组学（LC-MS/MS）质谱前处理。

实验限制：本品含有高浓度SDS和DTT会导致蛋白完全变性，不适用于免疫共沉淀（IP/Co-IP）、酶活性检测等需要保留蛋白天然构象的后续实验。

【使用建议】

1. 准备工作

高浓度SDS在低温下易析出。使用前请检查，若有白色结晶，请置于37℃水浴加热并轻晃，待完全溶解后再使用。本品含有DTT，建议分装冷冻保存，避免反复冻融。

2. 组织/细胞裂解

l 组织样本：称取约100 mg组织（提前剪碎），按照1:10 (W/V) 的比例加入1 mL SDT细胞裂解液（如增加或减少组织量则相应调整SDT细胞裂解液用量）。

初步匀浆（组织样本）：使用机械匀浆器（推荐60 Hz, 45-60s）直至样本充分破碎（若无设备则尽可能剪碎组织样本，不过匀浆是更优选择）。

l 细胞样本：收集细胞沉淀，按每1×10⁷细胞加入500μL–1mL裂解液（可不做初步匀浆）。

3. 热变性与降粘

(1) 首次加热：将裂解液置于100℃（沸水浴或金属浴）加热3-5分钟。此步骤可迅速使蛋白变性并灭活蛋白酶。

(2) 探头超声：为剪切基因组DNA并降低样本粘度，建议进行超声破碎（参考功率40-50W，超声5s，间隔5s，循环6-10次）。

(3) 二次加热：再次置于100℃加热2分钟。

4. 离心收集

(1) 室温（约25℃）下，13,000×g（或有条件使用更高转速16,000×g）离心10-15分钟。

(2) 小心吸取上清，即为提取的蛋白，可立即实验或-80℃保存。

【注意事项】

1. 本品提取蛋白不适用常规BCA法（DTT会还原铜离子导致变色）和Bradford 法（SDS干扰），可选择EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。

2. 如若后续用于质谱分析，样本在进行酶解前必须通过 FASP（滤膜辅助制备）或丙酮沉淀法彻底去除其中的SDS。

3. 本品含有还原剂（臭味）及刺激性化学品，请在通风橱中操作，并佩戴实验服、手套及护目镜。

4. 该试剂仅用于科研领域，不得用于临床诊断或其他用途。