产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
潮霉素 B (Hygromycin B) 是一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰80S核糖体易位并诱导翻译错读来抑制蛋白质合成。
应用范围：广泛用于细菌、真菌、植物及哺乳动物细胞的选择培养。
筛选原理：实验室主要利用其筛选和维持表达hph (或称aph4) 基因（源自大肠杆菌）的转化子或转染细胞。
产品特点：本品为100 mg/mL的无菌水溶液，可直接加入培养基使用。
【操作方法】
1. 常用筛选浓度参考
潮霉素 B 的最佳工作浓度随细胞类型、培养基组分及代谢速率而异，建议参考下表：
宿主类型 | 建议浓度范围（μg/mL） |
哺乳动物细胞 | 50-500 μg/mL |
细菌/植物细胞 | 20-200 μg/mL |
真菌 | 300-1000 μg/mL |
2. 杀灭曲线的建立
为确定能够杀死 100% 未转染宿主细胞的最低浓度，必须建立剂量反应曲线：
1）接种：第一天，将未转化的细胞按20%-25%的密度接种于培养板（如 6 孔板），过夜培养使细胞贴壁。
2）设定浓度：准备5-7个浓度梯度。可先用PBS将100 mg/mL母液稀释至5 mg/mL中间液，再按需加入培养基。
3）加药：第二天，更换为含梯度浓度药物的新鲜培养基。每个浓度设置3个平行孔。
4）观察：每3-4天更换含药培养基，持续观察7-14天。
5）确定参数：选择在7-10天内使细胞完全死亡的最低药物浓度作为后续筛选浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1）转染后处理：转染24-48小时后，按比例传代细胞（丰度不宜超过25%，活跃分裂的细胞对抗生素最敏感）。
2）维持筛选：使用确定的工作浓度进行筛选，每3天更换一次含药培养基。
3）克隆评估：筛选7-14天后，观察抗性克隆（集落）的形成。
4）扩增：继续用含药培养液维持培养一周，待细胞长满后进行后续检测。对于需单克隆挑选要求的则挑取5-10个（或更多）克隆转移至新的培养孔板中扩增培养进行后续检测，
【注意事项】
1. 稳定性：潮霉素B对pH敏感。在酸性或强碱性环境下易失活。请确保培养基 pH 稳定在7.2-7.4。
2. 细胞密度：筛选时细胞密度过高（> 80%）会显著降低筛选效率，建议保持细胞处于低密度、高分裂状态。
3. 安全防护：潮霉素B会引起过敏或呼吸道刺激。操作时请严格穿戴实验服、一次性手套和口罩。若不慎接触，请立即用大量清水冲洗。
4. 科研用途：仅限科研使用，严禁用于临床医疗、食品或动物用药。
产品规格
- 货期
- 1-2天
- 规格
- 5ml、10ml
应用领域
本产品适用于ED-8319、其它缓冲液、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题
该产品如何保存？
请参照产品说明书中的保存条件。一般生物科研试剂建议在2-8℃或-20℃条件下保存，避免反复冻融。具体保存条件请以产品标签为准。
该产品的货期是多久？
ECOTOP SCIENTIFIC常规库存产品一般1-3个工作日内发货。如遇缺货情况，客服会及时与您沟通预计到货时间。
如何获取产品的技术支持？
您可以通过电话（15622108587）或在线客服联系我们的技术支持团队。我们提供产品使用指导、实验方案优化等专业技术服务。
