【保存条件】
-20℃保存,有效期12个月
【概述】
Proteinase K是一种来源于Engyodontium album的广谱丝氨酸蛋白酶,具有极高的比活性。
切割位点:主要切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。
核心应用:
1. 基因组DNA或RNA抽提。
2. 原位杂交技术中增强细胞通透性。
3. 酶介导的蛋白消化与去除。
【使用建议】
1. pH 耐受性:蛋白酶K在宽pH范围内(pH 4.0–12.5)均有活性,最佳反应pH为 7.5–8.0。
2. 温度控制:最佳反应温度:65°C。 实操建议:虽然 65°C 活性最高,但在此温度下酶也会发生剧烈的自降解。因此在实际核酸抽提流程中,通常选择50–55°C 进行温育。
3. 工作浓度:常用工作浓度为0.05–1mg/mL。具体用量需根据缓冲液组分、pH、温度及消化样本的复杂程度进行调整。
4. 失活方法:通过加热至 95°C 维持 10 分钟,或使用抑制剂(如 PMSF、AEBSF)可使其完全失活。 注:EDTA等常用螯合剂对蛋白酶 K 活性基本无影响。
【注意事项】
1. 分装建议:反复冻融可能影响活性,如果每次使用量较小,推荐分装使用。
2. 安全防护:为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。