ED-8077 台盼蓝染色液(0.2%)

【保存条件】

室温避光储存，有效期12个月

【概述】

台盼蓝（Trypan Blue）是细胞培养中鉴定细胞活性最常用的染料之一，主要用于检测细胞膜的完整性。

原理：活细胞的细胞膜结构完整，具有选择通透性，能够排斥（Exclude）台盼蓝，故不着色；而死细胞或细胞膜受损的细胞，其通透性增加，染料可进入细胞内与细胞质结合，使细胞呈现明显的蓝色。

活体染色：本品亦可被巨噬细胞吞噬，用于巨噬细胞的活体染色鉴别。

【使用方法】

1. 单细胞悬液制备：
a. 用胰酶或EDTA消化贴壁细胞，悬浮细胞可直接收集，建议使用PBS或HBSS洗涤细胞1-2次，以去除培养基中残留的血清蛋白（血清会显著干扰背景颜色）。
b. 收集细胞时用300×g (约1200 rpm)离心5 min，弃上清。
c. 用PBS或合适缓冲液重悬，制备成单细胞悬液，并进行适当稀释（建议细胞密度在1×10⁶ cells/mL左右）。

2. 染色程序：
a. 将细胞悬液与0.2%台盼蓝溶液按4:1比例充分混匀（例如：80 μL细胞悬液加入20 μL台盼蓝）。此时台盼蓝的终浓度为0.04%。
b. 室温下染色 3–5 min。注：染色时间严禁超过 10 min，否则会导致活细胞产生假阳性着色。

3. 细胞计数
a. 取约10 μL混匀液滴入血细胞计数板或自动细胞计数仪载片。
b. 特征辨别：
死细胞：明显蓝色，体积通常略有膨大，轮廓模糊。
活细胞：无色透明，保持原有形态，有光泽。
c. 计算公式：
细胞存活率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%

【注意事项】

1. 蛋白质干扰：染液会与血清蛋白结合产生深蓝背景。若背景过深影响观察，请先离心弃上清并用无蛋白缓冲液重悬细胞。

2. 操作速度：为保证准确性，建议在染色后 10 min 内完成计数。

3. 聚团处理：若细胞出现严重团聚，计数前应使用200目筛网过滤或通过枪头反复吹吸吹散，否则会严重影响计算精度。

4. 安全防护：台盼蓝被列为潜在致癌物质。操作时请严格执行生物实验室标准防护（实验服、手套、口罩）。