EK-1401 FastPure病毒DNA/RNA提取试剂盒

产品介绍

本产品适合于200μL体液、血清、血浆、浸泡液、组织匀浆液、培养液上清、拭子等低细胞样本中提取病毒总核酸，试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，整个提取过程只需20分钟，可用于含>100U/mL肝素的样品。得到的核酸可直接用于PCR，RT-PCR检测等实验。

存储条件

Proteinase K保存时需置于-20℃，其余可在室温(15~25℃)保存12个月。

需要额外准备的材料

1. 无水乙醇（96%-100%）

2. 1.5mL无酶离心管

3. 小型高速离心机（~13000rpm）

4. 水浴锅

开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1.可提取样品类型为：200μL 血清/血浆/全血/拭子稀释液样本

2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量下降。

3.若Buffer BB或Buffer IRB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

4.Buffer IRB中提前加入无水乙醇。

5.Buffer WB中提前加入无水乙醇。

6.水浴锅温度设置至72℃。

7.该产品若用作RNA病毒核酸提取，请按照RNA提取操作要求避免RNase污染。Buffer EB已经过除酶处理，吸取时请使用无酶枪头；如若使用时污染，请更换无酶水作为洗脱液。

操作步骤：

1. 在1.5mL无酶离心管中依次加入200μL待提取样品，200μL Buffer BB，20μL蛋白酶K溶液后立即混匀，置于72℃水浴中孵育10分钟。

如果样品量小于200 μL，请添加适当体积的0.9％氯化钠（或PBS）溶液，使样品的总量达到200μL。

2. 将步骤1所得溶液加入100μL Buffer BB并混匀。

3. 把吸附柱套在2mL收集管中。将上个步骤所得溶液加入柱中，8000×g离心1分钟。离心完后倒掉收集管中的废液。

4. 向吸附柱中加入500μL Buffer IRB（使用前请确认按要求加入无水乙醇），8000×g离心1min，离心完后倒掉收集管中的废液。

5. 向吸附柱中加入500μL Buffer WB（使用前请确认按要求加入无水乙醇），8000×g离心1分钟，离心完后倒掉收集管中的废液。

6. 重复步骤5一次。

7. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，13000×g离心2分钟以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5mL无酶离心管管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。

注意：Buffer WB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。

8. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50μL Buffer EB（或无酶水），室温静置2min后，12000×g离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子，盖上EP 管盖子置于-20℃保存。

注意：洗脱体积不应小于30μL，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。为了提高核酸的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2min，13000g离心2min，将核酸溶液收集到离心管中。

常见问题：

核酸产量低或纯度低

1. 试剂保存温度: Proteinase K保存时需置于-20℃，其余可在室温(15~25℃)保存

2. 未添加乙醇：Buffer WB和Buffer IRB使用前添加乙醇

3. 试剂与样未完全混匀: 添加每种试剂后，确保样品与试剂充分混匀。

4. 洗脱效果不佳：如果使用自己的水或缓冲液从滤管中洗脱核酸，请确保其pH>7，建议pH为8.0。