产品描述
产品介绍
本产品适合于200μL体液、血清、血浆、浸泡液、组织匀浆液、培养液上清、拭子等低细胞样本中提取病毒总核酸，试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，整个提取过程只需20分钟，可用于含>100U/mL肝素的样品。得到的核酸可直接用于PCR，RT-PCR检测等实验。
存储条件
Proteinase K保存时需置于-20℃，其余可在室温(15~25℃)保存12个月。
需要额外准备的材料
1. 无水乙醇（96%-100%）
2. 1.5mL无酶离心管
3. 小型高速离心机（~13000rpm）
4. 水浴锅
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.可提取样品类型为：200μL 血清/血浆/全血/拭子稀释液样本
2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量下降。
3.若Buffer BB或Buffer IRB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
4.Buffer IRB中提前加入无水乙醇。
5.Buffer WB中提前加入无水乙醇。
6.水浴锅温度设置至72℃。
7.该产品若用作RNA病毒核酸提取，请按照RNA提取操作要求避免RNase污染。Buffer EB已经过除酶处理，吸取时请使用无酶枪头；如若使用时污染，请更换无酶水作为洗脱液。
操作步骤：
1. 在1.5mL无酶离心管中依次加入200μL待提取样品，200μL Buffer BB，20μL蛋白酶K溶液后立即混匀，置于72℃水浴中孵育10分钟。
如果样品量小于200 μL，请添加适当体积的0.9％氯化钠（或PBS）溶液，使样品的总量达到200μL。
2. 将步骤1所得溶液加入100μL Buffer BB并混匀。
3. 把吸附柱套在2mL收集管中。将上个步骤所得溶液加入柱中，8000×g离心1分钟。离心完后倒掉收集管中的废液。
4. 向吸附柱中加入500μL Buffer IRB（使用前请确认按要求加入无水乙醇），8000×g离心1min，离心完后倒掉收集管中的废液。
5. 向吸附柱中加入500μL Buffer WB（使用前请确认按要求加入无水乙醇），8000×g离心1分钟，离心完后倒掉收集管中的废液。
6. 重复步骤5一次。
7. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，13000×g离心2分钟以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5mL无酶离心管管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。
注意：Buffer WB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。
8. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50μL Buffer EB（或无酶水），室温静置2min后，12000×g离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子，盖上EP 管盖子置于-20℃保存。
注意：洗脱体积不应小于30μL，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。为了提高核酸的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2min，13000g离心2min，将核酸溶液收集到离心管中。
常见问题：
核酸产量低或纯度低
1. 试剂保存温度: Proteinase K保存时需置于-20℃，其余可在室温(15~25℃)保存
2. 未添加乙醇：Buffer WB和Buffer IRB使用前添加乙醇
3. 试剂与样未完全混匀: 添加每种试剂后，确保样品与试剂充分混匀。
4. 洗脱效果不佳：如果使用自己的水或缓冲液从滤管中洗脱核酸，请确保其pH>7，建议pH为8.0。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1401、病毒总核酸提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
Proteinase K保存时需置于-20℃，其余可在室温(15~25℃)保存2. 未添加乙醇：Buffer WB和Buffer IRB使用前添加乙醇
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
Proteinase K 保存时需置于 -20℃，其余可在室温（15–25℃）保存 12 个月。提取的核酸：短期 4℃；长期 -20℃ 保存（丢弃柱子，盖上 EP 管盖子置于 -20℃ 保存）。洗脱体积不应小于 30 µL——为提高得率，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置 2 min，13,000 g 离心 2 min。Buffer BB 或 Buffer IRB 出现沉淀时 37℃ 水浴重新溶解。
DNA / RNA 病毒提取后能区分吗？
本试剂盒提取的是病毒总核酸（DNA + RNA）——硅胶膜柱不区分 DNA 和 RNA。检测时通过下游引物特异性区分：① 检测 DNA 病毒（HBV、腺病毒）→ 直接 PCR；② 检测 RNA 病毒（HCV、SARS-CoV-2）→ 先 RT 反转成 cDNA 再 PCR；③ 同一样品同时检测两类 → 一份样本两次反应（PCR + RT-PCR）。如需单独提取 DNA 或 RNA，请用专用试剂盒（EK-5312 DNA / EK-1300 RNA）。
可用于哪些应用场景？
适用：① 临床病毒检测 RT-PCR / qPCR（HBV、HCV、HIV、SARS-CoV-2、流感等）；② 病毒载量定量（HBV/HCV 治疗监测）；③ mNGS 病毒检测（病原宏基因组）；④ 疫苗研发（病毒滴度评估）；⑤ 食品安全病原检测；⑥ 野外病毒监测（鼠类、蝙蝠等病毒载体筛查）。
常见故障排查？
核酸产量低或纯度低：① 试剂保存温度：Proteinase K 保存时需置于 -20℃，其余可在室温（15–25℃）保存；② 未添加乙醇：Buffer WB 和 Buffer IRB 使用前添加乙醇；③ 试剂与样未完全混匀：添加每种试剂后，确保样品与试剂充分混匀；④ 洗脱效果不佳：如果使用自己的水或缓冲液从滤管中洗脱核酸，请确保其 pH > 7，建议 pH 为 8.0。
72℃ 水浴的作用？
72℃ 水浴 10 min（注意：此温度高于一般组织 DNA 提取的 56℃）。作用：① 彻底变性病毒包膜与衣壳蛋白（许多病毒衣壳热稳定性高需较高温度）；② 激活 Proteinase K 高效消化（最适温度 50–65℃，72℃ 也仍有活性且加快裂解）；③ 灭活 RNase（RNA 病毒应用必需）。注意：温度不可低于 60℃，否则病毒裂解不彻底。
DNA 与 RNA 病毒同时适用的关键？
该产品若用作 RNA 病毒核酸提取，请按照 RNA 提取操作要求避免 RNase 污染。Buffer EB 已经过除酶处理，吸取时请使用无酶枪头；如若使用时污染，请更换无酶水作为洗脱液。——本试剂盒在化学层面同时适合 DNA 和 RNA 病毒（如 SARS-CoV-2、HCV、HIV、HBV 等），但 RNA 病毒应用时需严格 RNase-free 操作以防降解。
完整流程参数？
① 1.5 mL 无酶离心管中依次加入 200 µL 待提取样品 + 200 µL Buffer BB + 20 µL Proteinase K 溶液，立即混匀；② 72℃ 水浴孵育 10 min；③ 加 100 µL Buffer BB 混匀；④ 上吸附柱 8000×g 离心 1 min；⑤ 500 µL Buffer IRB（已加无水乙醇）8000×g 离心 1 min；⑥ 500 µL Buffer WB（已加无水乙醇）8000×g 离心 1 min，重复一次；⑦ 13,000×g 离心 2 min 干燥膜，开盖室温 5–10 min 彻底晾干乙醇；⑧ 50 µL Buffer EB（或无酶水）室温静置 2 min 后 12,000×g 离心 2 min 收集核酸。
起始量与样品类型？
可提取样品类型：200 µL 血清/血浆/全血/拭子稀释液样本。扩展样品：体液、浸泡液、组织匀浆液、培养液上清、咽鼻拭子稀释液等低细胞样本（病毒颗粒主要在液相）。如果样品量小于 200 µL，请添加适当体积的 0.9% 氯化钠（或 PBS）溶液，使样品的总量达到 200 µL。
本试剂盒的核心特点？
本产品适合于 200 µL 体液、血清、血浆、浸泡液、组织匀浆液、培养液上清、拭子等低细胞样本中提取病毒总核酸，试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，整个提取过程只需 20 分钟。得到的核酸可直接用于 PCR、RT-PCR 检测等实验。——这是病毒核酸提取的快速通用版本，DNA 与 RNA 病毒同时适用。
