EK-1328 FastPure 10分钟快速总RNA提取试剂盒

产品介绍

本试剂盒采用优化的离溶盐裂解体系与硅胶柱纯化技术，专为从细胞、组织、全血及细菌等多种样本中快速提取总RNA而设计。独特的Buffer RFL具有极强的RNase抑制能力，确保在10min内获得高质量、高完整性的RNA。所得产品可直接用于RT-PCR、qPCR等实验。

存储条件

室温干燥保存可至少稳定24个月。

需要额外准备的材料

 无水乙醇（96%-100%）

 无RNase酶的1.5mL离心管

 无RNase酶的枪头

 干净的手套

 离心机

开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。。

 Buffer RFL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请37-56℃加热溶解后室温使用。

 Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。

 RNase-free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。

 RNA在Buffer RFL中时不会被RNase降解（短时操作过程中）。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的无酶离心管或玻璃器皿。

操作步骤：

1. 请根据样品种类进行以下步骤

a. 收集动物细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清（200μL/2×10⁶细胞），充分震荡直至没有细胞团块（重要），取200μL放入无酶离心管中备用。若是贴壁细胞则消化收集细胞后用200μL PBS重悬。

注意：收集细胞数量不要超过5×10⁶，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致细胞裂解不完全影响RNA与吸附柱的结合，导致RNA的产量降低。

b. 动物组织：将10mg-30mg动物组织转移入1.5mL无酶离心管中并加入350μL Buffer RFL（动物组织量不超过30mg，可根据组织量增加裂解液用量），使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。最大转速(~13,400×g) 离心3min。收集上清直接进行提取步骤3。

匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。

c. 体液及其它液体样本处理：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10mL，离心2min，留下沉淀及约200μL上清，充分震荡悬浮沉淀；有时也可以直接取样本200μL；

d. 细菌：培养良好的细菌菌液1mL，离心后留下细菌团块及大约100μL上清，充分振荡悬浮细菌，直至没有细胞团块（重要）。

e. 抗凝全血： 1倍体积全血加入5倍体积红细胞裂解液（或Buffer EL），冰上裂解10-15min，4°C下以400×g离心10min，然后完全去除并丢弃上清液，加入200μL PBS充分重悬白细胞至无细胞团后用于提取。

2. 将上述处理好的样品加入500μL Buffer RFL，充分颠倒混匀(或涡旋)1min。

若细胞量过大裂解后有明显沉淀，可最大转速(~13,400×g)离心2min取上清进行下一步操作。

3. 将上述步骤混匀后的溶液转移入RNase-free吸附柱中并套上2mL收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。

吸附柱最大上柱量为700μL，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2mL收集管中。

4. 向吸附柱中加入500μL Buffer RPE，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。

5. 重复上述步骤4一次。

6. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中, 以最大转速(~13,400×g)离心2min干燥柱膜。并将吸附柱取出套入新的无酶1.5mL离心管中，

若吸附柱中残留乙醇，可开盖静置3min挥发去除，以防止对纯化后的RNA的下游实验造成影响。

7. 向吸附柱膜正中央加入30-50μL RNase-free Water，盖上盖子室温静置30-60s。后置于离心机中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 离心1-2min得到RNA溶液。

RNA洗脱体积不应少于30μL，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-80℃储存。若需长时间保存RNA溶液稳定不降解，可适量添加RNA Chill (ES-8520)可更长时间保存RNA。