产品描述
产品介绍
本试剂盒采用优化的离溶盐裂解体系与硅胶柱纯化技术，专为从细胞、组织、全血及细菌等多种样本中快速提取总RNA而设计。独特的Buffer RFL具有极强的RNase抑制能力，确保在10min内获得高质量、高完整性的RNA。所得产品可直接用于RT-PCR、qPCR等实验。
存储条件
室温干燥保存可至少稳定24个月。
需要额外准备的材料
无水乙醇（96%-100%）
无RNase酶的1.5mL离心管
无RNase酶的枪头
干净的手套
离心机
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。。
Buffer RFL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请37-56℃加热溶解后室温使用。
Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。
RNase-free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。
RNA在Buffer RFL中时不会被RNase降解（短时操作过程中）。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的无酶离心管或玻璃器皿。
操作步骤：
1. 请根据样品种类进行以下步骤
a. 收集动物细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清（200μL/2×106细胞），充分震荡直至没有细胞团块（重要），取200μL放入无酶离心管中备用。若是贴壁细胞则消化收集细胞后用200μL PBS重悬。
注意：收集细胞数量不要超过5×106，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致细胞裂解不完全影响RNA与吸附柱的结合，导致RNA的产量降低。
b. 动物组织：将10mg-30mg动物组织转移入1.5mL无酶离心管中并加入350μL Buffer RFL（动物组织量不超过30mg，可根据组织量增加裂解液用量），使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。最大转速(~13,400×g) 离心3min。收集上清直接进行提取步骤3。
匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。
c. 体液及其它液体样本处理：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10mL，离心2min，留下沉淀及约200μL上清，充分震荡悬浮沉淀；有时也可以直接取样本200μL；
d. 细菌：培养良好的细菌菌液1mL，离心后留下细菌团块及大约100μL上清，充分振荡悬浮细菌，直至没有细胞团块（重要）。
e. 抗凝全血： 1倍体积全血加入5倍体积红细胞裂解液（或Buffer EL），冰上裂解10-15min，4°C下以400×g离心10min，然后完全去除并丢弃上清液，加入200μL PBS充分重悬白细胞至无细胞团后用于提取。
2. 将上述处理好的样品加入500μL Buffer RFL，充分颠倒混匀(或涡旋)1min。
若细胞量过大裂解后有明显沉淀，可最大转速(~13,400×g)离心2min取上清进行下一步操作。
3. 将上述步骤混匀后的溶液转移入RNase-free吸附柱中并套上2mL收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。
吸附柱最大上柱量为700μL，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2mL收集管中。
4. 向吸附柱中加入500μL Buffer RPE，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。
5. 重复上述步骤4一次。
6. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中, 以最大转速(~13,400×g)离心2min干燥柱膜。并将吸附柱取出套入新的无酶1.5mL离心管中，
若吸附柱中残留乙醇，可开盖静置3min挥发去除，以防止对纯化后的RNA的下游实验造成影响。
7. 向吸附柱膜正中央加入30-50μL RNase-free Water，盖上盖子室温静置30-60s。后置于离心机中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 离心1-2min得到RNA溶液。
RNA洗脱体积不应少于30μL，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-80℃储存。若需长时间保存RNA溶液稳定不降解，可适量添加RNA Chill (ES-8520)可更长时间保存RNA。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1328、RNA提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温干燥保存
常见问题 (FAQ)
提取的 RNA 应如何保存？
短期 -20℃（1 周内）；长期 -80℃ 分装储存。若需长时间保存 RNA 溶液稳定不降解，可适量添加 RNA Chill (ES-8520) 可更长时间保存 RNA。
批量样品高通量处理？
本试剂盒特别适合 96 孔板或微孔板格式批量处理：① 1 名实验员 10 min 可完成24 个样品并行；② 临床实验室单日可处理数百样品；③ 注意：批量操作时严格 RNase-free 实验环境保护。
与 RNAex ZOL/Trizol 类相比有何优势？
RNAex ZOL/Trizol 类：苯酚操作有毒、需通风柜、耗时 1 h；本试剂盒：无苯酚、安全便捷、10 min 完成。但纯度与得率略低于优化的RNAex ZOL/ Trizol 法。适用人群：偏好快速操作的研究者、临床实验室、教学实验。
可以用于哪些下游应用？
所得产品可直接用于 RT-PCR、qPCR 等实验。不推荐：NGS 文库构建、miRNA 研究、严苛科研定量。
OD260/OD280 偏低（<1.8）怎么办？
快速法因洗涤次数减少，蛋白残留可能略多。优化：① 重复 Buffer RPE 漂洗一次；② 必要时上 EK-1103 二次纯化（增加 5 min 即可显著改善纯度）。
典型得率与 RIN？
培养细胞 1×10⁶ 通常 5–10 µg；组织 30 mg 约 20–80 µg；RIN 一般 6–8（视样品状态）；OD260/OD280 约 1.9–2.0。注意：快速法对 mRNA 完整性的影响相对小，但小 RNA 回收率偏低，不推荐用于 miRNA 研究。
适用样品类型与起始量？
① 动物细胞（≤5×10⁶，悬浮细胞离心后留团块和适量上清，200 µL/2×10⁶ 细胞，充分震荡至无团块）；② 动物组织（10–30 mg，加 350 µL Buffer RFL 研磨匀浆 → 最大转速离心 3 min 取上清）；③ 体液样本（尿液/腹水/胸水/脑积液 1–10 mL，离心留沉淀及约 200 µL 上清）；④ 细菌（培养良好菌液 1 mL，离心后留团块及 ~100 µL 上清）；⑤ 抗凝全血（1 体积全血 + 5 体积红细胞裂解液或 Buffer EL，冰上裂解 10–15 min → 4℃ 400×g 离心 10 min → 200 µL PBS 重悬白细胞）。
与常规柱法（EK-1303）的区别？
EK-1328（快速法）：流程极简（10 min）、单一裂解液 Buffer RFL、Buffer RPE 漂洗 ×2 后短时洗脱（30–60 s 静置）；EK-1303（常规柱法）：流程 25–35 min、Buffer RLT + 70% 乙醇 + Buffer RW1/RPE 完整漂洗。选择：① 高通量 qPCR、临床快速筛查 → EK-1328；② RNA-seq、严谨研究 → EK-1303（或 EK-1300 含 ZOL）。
本试剂盒为什么能 10 分钟完成？
本试剂盒采用「Buffer RFL 单管裂解（极强 RNase 抑制能力）+ 直接上柱 + Buffer RPE 漂洗 ×2 + 短时洗脱」简化流程，省去常规柱法的多次结合-洗涤步骤。说明书原文：本试剂盒采用优化的离溶盐裂解体系与硅胶柱纯化技术，专为从细胞、组织、全血及细菌等多种样本中快速提取总 RNA 而设计。独特的 Buffer RFL 具有极强的 RNase 抑制能力，确保在 10 min 内获得高质量、高完整性的 RNA。
