产品描述
产品介绍
本试剂盒可以快速地从组织、细胞、真菌、细菌、植物、寄生虫等各类样本中提取总RNA，最多可用于50μg RNA的提取。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品级化妆品等用途。
存储条件
试剂盒室温干燥保存可至少稳定12个月。
需要额外准备的材料
无RNase酶的1.5mL离心管
无RNase酶的吸头
干净的手套
低温高速离心机
物理研磨设备
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
Buffer RW1作为浓缩液提供，在第一次使用前加入0.25倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。
Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。
RNase-Free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。
RNA在RNAEx ZOL中时不会被RNase降解(室温短时间2-4h，-80℃长期约3-6个月保存)。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase的无酶离心管或玻璃器皿。
操作步骤：
1. 请根据样品种类进行以下步骤（1a为动物细胞，1b为动物组织，1c为植物组织）
1a. 收集动物细胞：悬浮细胞可直接300×g离心5min并仔细吸除上清留沉淀待使用；单层贴壁细胞可通过直接裂解法（吸尽培养基留下贴壁细胞，进行步骤2裂解）或胰酶处理法（吸尽培养基留下贴壁细胞，用PBS清洗细胞，吸除PBS后使用含0.10%-0.25%胰酶使细胞脱落，加入含有血清的培养基使胰酶失活后转入1.5mL无酶离心管中300×g离心5min，吸除上清留沉淀待使用）
注意：收集细胞数量不要超过1×107，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致步骤2时细胞裂解不完全，影响RNA与吸附柱的结合，导致RNA的产量降低。
1b. 动物组织匀浆裂解处理：将10mg-30mg动物组织转移入1.5mL无酶离心管中并加入700μL RNAEx ZOL（动物组织量不要超过30mg），使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。直接进行步骤3.
匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。RNAEx ZOL有较多有机试剂具一定毒性，匀浆时注意不要溅到皮肤或眼睛等部位，建议使用防护镜操作。
1c. 植物组织：将50-100mg植物组织转移入1.5mL无酶离心管中并加入700μL RNAEx ZOL，使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。直接进行步骤3.
2. 样品裂解：对于1a中使用直接裂解法的细胞应在培养皿或培养瓶中直接加入700μL RNAEx ZOL破碎细胞，涡旋或吹匀混合。将裂解液移入无酶1.5mL离心管中。涡旋或移液器混合并确保没有细胞团块可见。
细胞沉淀不完全松动吹匀可能会导致裂解效率低下和RNA产量降低。一般≤3×106个细胞若细胞量较大，可涡旋后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。若不能及时提取，裂解后溶液可至于-80℃储存3-6个月。
3. 将含裂解物离心管置于室温静置2-5min.
该步骤促进核蛋白复合物的解离。若细胞量较少，可不需静置；若细胞量较大，可适当延长静置裂解时间。
4. 向含裂解物离心管中加入140μL Buffer CH, 用力摇动或涡旋15s。
彻底混合对于随后的相分离很重要。
5. 将离心管置于室温静置2-3min.
6. 在4°C下以 12,000×g离心15min。
离心后，样品分为3相：上层含有RNA的无色水相；白色的中相间和下层红色有机相。上层水相的体积应约为 350μL。此步骤必须在4°C下进行。低温有助于在界面形成紧实的白色中间层，防止吸取上清时触碰到下层蛋白质和 DNA
7. 将上层水相转移到新的无酶1.5mL离心管中，加入等体积（约350 μL）无水乙醇，立即颠倒混匀或通过轻微涡旋混合。不要离心，立即进行下一步骤。
加入乙醇后可能会形成沉淀，为正常现象，不会影响提取过程和结果。
8. 将上一步骤混匀后的溶液约700μL转移入RNA吸附柱中并套上2mL收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)室温下离心30s，弃废液。
吸附柱最大上柱量为700μL，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2mL收集管中。
9. 向吸附柱中加入700μL Buffer RW1（使用前请确认Buffer RW1是否按要求加入0.25倍体积无水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)室温下离心30s，弃废液。
10. 向吸附柱中加入500μL Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE是否按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。
11. 重复步骤10一次。
12. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中, 以最大转速(~13,400×g)离心3min干燥柱膜。
13. 将吸附柱套入新的无酶1.5mL离心管中，并置于无酶的环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。
若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。
14. 向吸附柱膜正中央加入50-100μL RNase-Free Water，盖上盖子室温静置1-2 min。后置于离心机中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 离心2min得到RNA溶液。
RNA洗脱体积不应少于30μL，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-80℃储存。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1300、RNA提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温干燥保存
常见问题 (FAQ)
提取的 RNA 应如何保存？
洗脱：50–100 μL RNase-Free Water 加在膜正中央，盖盖室温静置 1–2 min 后 ≥12,000×g（≥13,000 rpm）离心 2 min；洗脱体积不应少于 30 μL，否则影响洗脱效率。短期使用 -20℃（1 周内）；长期 -80℃ 分装储存（每管单次用量），避免反复冻融。储存超过 6 个月使用前重新跑变性凝胶或 TapeStation 检查 RIN。
本试剂盒与单纯柱法（如 EK-1303）相比有什么优势？
EK-1303（纯柱法）：操作快（25–35 min）、无苯酚、安全；缺点：高纤维、高脂肪、富 RNase 样品得率低或降解严重。本试剂盒（RNAEx ZOL + 柱）：苯酚瞬时灭活 RNase，对顽固样品（脂肪组织、肿瘤、肝、脑）得率与完整性都更好；操作时间约 45–60 min，需通风柜操作 RNAEx ZOL 步骤。建议根据样品特性选择。
可以同时获得 DNA、RNA、蛋白吗？
本试剂盒针对总 RNA 优化。RNAEx ZOL 分相后：① 水相 → RNA（本试剂盒）；② 中间界面 → DNA（可用柱法清理）；③ 有机相 → 蛋白（异丙醇沉淀后清理）。如严格需要三组分共抽提，建议使用专用 DNA/RNA/Protein 共抽提试剂以保证三组分质量。
如何防止 RNase 污染破坏 RNA？
RNase 是 RNA 实验最大威胁。RNA 在 RNAEx ZOL 中时不会被 RNase 降解（室温短时间 2–4 h，-80℃ 长期约 3–6 个月保存）。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的无酶离心管或玻璃器皿。防护要点：① 全程 RNase-free 耗材（吸头、离心管、水）；② 戴一次性手套并频繁更换；③ 操作台用 EX-0411 核酸酶清除剂或 0.1% DEPC 处理；④ Buffer RW1 第一次使用前加入 0.25 倍体积乙醇，Buffer RPE 第一次使用前加入 4 倍体积乙醇；⑤ RNase-Free Water 开瓶后分装保存。
OD260/OD280 比值低于 1.8 怎么办？
本试剂盒提取的 RNA 理想 OD260/OD280 应 ≥1.8。要点：① 严格按比例 RNAEx ZOL + Buffer CH 混匀后离心彻底分相；② 取水相时不要触碰相界面（界面含变性蛋白和 DNA）；③ 增加 Buffer RPE 洗涤次数（重复一次）。
氯仿萃取后水相浑浊或体积异常怎么办？
分相后样品分为 3 相——上层无色水相（约 350 µL）、白色中相、下层红色有机相；水相体积应约 350 µL，此步骤建议在 4℃ 进行——低温有助于在界面形成紧实的白色中间层，防止吸取上清时触碰到下层蛋白质和 DNA。水相浑浊原因：① 蛋白裂解不完全（增加涡旋时间或室温裂解 2–5 min）；② 起始样品量过大（动物组织不要超过 30 mg，培养细胞 ≤1×10⁷）；③ 富脂样品请改用 EK-1305。
典型得率与 RIN 值？
中等表达组织 30 mg（说明书上限）：30–150 µg；培养细胞 1×10⁶：5–15 µg；植物 50 mg：10–60 µg；细菌 10⁹ 细胞：20–100 µg。RIN（RNA Integrity Number）一般 ≥8（新鲜样品按说明书规范操作），冻存或反复冻融样品 RIN 6–8。下游 NGS 要求 RIN ≥7，qPCR 要求 RIN ≥6。
适用哪些样品类型？
① 动物细胞（贴壁/悬浮，≤1×10⁷ 细胞）；② 动物组织（10–30 mg，加 700 µL RNAEx ZOL 研磨匀浆）；③ 植物组织（50–100 mg，加 700 µL RNAEx ZOL 研磨匀浆）；④ 真菌、细菌、寄生虫（按各自破壁要求处理后加 RNAEx ZOL）；⑤ 体外转录产物 / RNA 反应清理。RNAEx ZOL 有较多有机试剂具一定毒性，匀浆时注意不要溅到皮肤或眼睛等部位，建议使用防护镜操作。
本试剂盒的核心工艺是什么？
本试剂盒结合「RNAEx ZOL（异硫氰酸胍 + 苯酚）裂解 + Buffer CH 助分相 + 硅胶膜柱纯化」两阶段工艺。第一阶段：RNAEx ZOL 变性 RNase 与蛋白，加 140 µL Buffer CH 涡旋 15 s + 室温静置 2–3 min + 4℃ 12,000×g 离心 15 min 分相得到上层无色水相（约 350 µL）；第二阶段：水相加等体积无水乙醇后转入硅胶膜柱，通过 Buffer RW1 / Buffer RPE 洗涤、RNase-Free Water 洗脱获得高纯度 RNA。最多可用于 40 µg RNA 的提取。
