EK-5301 RNAEx ZOL总RNA提取试剂

【保存条件】

室温避光保存，有效期12个月。冷藏可延长时间并维持最佳活性。

【概述】

RNAEx ZOL Reagent 是一种即用型全能提取试剂，采用一步法苯酚/异硫氰酸胍体系，能够迅速裂解细胞及组织。

分级原理：加入氯仿离心后，样本分为上层水相、中间相和下层有机相。

组分分布：水相 (RNA)、中间相 (DNA)、有机相 (Protein)。

应用优势：保持RNA完整性，最大限度去除蛋白及DNA污染，适用于人、动物、植物、酵母菌或细菌的细胞和组织样本。

【使用方法】

1. 样品处理：根据起始材料的类型，选择相应的裂解方式

①　组织：每50-100 mg组织加入1 mL RNAEx ZOL试剂，并用匀浆器充分匀浆。

②　贴壁细胞：移除生长培养基，每1×10⁶-10⁷个细胞直接加入约0.5mL-1mL RNAEx ZOL试剂培养皿中裂解细胞，反复吹打数次以匀浆化样本。
示例：如细胞长满的3.5cm直径的培养皿中加入约1mL RNAEx ZOL试剂。

③　悬浮细胞：通过离心收集细胞并弃去上清液，向（来自动物、植物或酵母来源的5-10×10⁶个细胞或1×10⁷个细菌来源细胞）样本添加1 mL的RNAEx ZOL试剂，反复吹打数次以匀浆化样本。

注：加入RNAEx ZOL试剂前请勿洗涤细胞以避免mRNA降解

2. 相分离

①　静置：将加完RNAEx ZOL试剂后的样品在室温（15-30°C）静置5分钟，以利于样品核蛋白复合物完全分离。

②　加氯仿：按每1mL RNAEx ZOL Reagent加入0.2mL 氯仿（或ES-8522 氯仿替代物），小心盖好样品管后，剧烈震荡15秒，后置于室温（15-30°C）静置2-3分钟。

③　离心：在4°C下12,000×g离心15分钟。此时混合物分层，RNA存在于上层无色水相中。

④　转管：小心吸取水相转移至新管（建议试管倾斜45°操作，避免触及中间相）。

3. 沉淀RNA

①　沉淀：每1 mL用于裂解的RNAEx ZOL试剂，添加0.5 mL异丙醇到转移到新管的水相中。

②　静置：4°C或室温（15-30°C）静置10分钟

③　收集：在4°C下12,000×g离心10分钟。管底及管侧会出现白色凝胶状沉淀，即为 RNA。小心弃去上清液。

4. 洗涤RNA

①　洗涤：按每1 mL RNAEx ZOL试剂裂解处理所得到的沉淀重悬于1 mL 75%乙醇中。

②　离心：短暂涡旋样本，然后在4°C下7500×g离心5分钟。

③　干燥：弃去上清，将离心管倒扣在洁净纸巾上，空气干燥5-10分钟。
注：切勿加热干燥或真空离心干燥，否则RNA将极难溶解。

5. 溶解RNA

①　溶解：用20-50 μL不含RNA酶的水（如ES-8087无DNA/RNA酶水(无菌)），反复吹打使沉淀完全溶解。得到的RNA进行检测或-80℃长期保存（若需更长时间保存请添加适量RNA Chill（ES-8520））。

②　助溶：若溶解困难，可在55-60°C下水浴孵育10分钟。

【注意事项】

1. 防止RNA降解：皮肤接触是RNase的主要来源。操作时必须佩戴双层手套、口罩，且所有枪头、离心管必须标注为RNase-free。

2. 相界污染：吸取水相时，宁可少吸，切勿触碰中间相，否则会导致严重的DNA污染。

3. 安全性（危险提示）：必须在通风橱内操作。若不慎溅到皮肤，请立即用大量清水冲洗，并咨询医生。