EK-5303 NewZOL LS总RNA提取试剂

【保存条件】

室温避光保存，有效期12个月。冷藏可延长时间并维持最佳活性。

【概述】

NewZOL LS采用先进的单相提取技术，无需氯仿相分离。通过加入无酶水使DNA、蛋白质和多糖形成半固体沉淀，而RNA留在上清中。该试剂能高效分离总RNA（包含mRNA、rRNA及microRNA）。

高纯度：分离出的 RNA 纯度高、无降解，无需DNase处理即可直接用于RT-PCR。

无需氯仿：无需进行氯仿诱导的分层即可获得纯净RNA。

应用广泛：适用于RT-PCR、qRT-PCR、微阵列、poly A+ 筛选、Northern Blot和RNase 保护分析等。

【操作方法】

1. 样本前处理 (请选择对应样本类型)
关键：裂解是否完全决定了最终的纯度和产量。

①　贴壁细胞：
比例：每10 cm²面积（如直径为3.5 cm细胞培养皿）加1 mL 试剂。
操作：弃培养基，加药后直接在皿里反复吹吸裂解。

②　悬浮细胞：
比例：1 mL试剂: 10⁷个细胞。
操作：反复吹吸至完全裂解。

③　液体样本 (Liquid Samples)

比例：1 mL试剂: 0.4 mL样本。

补位：样本量不足0.4 mL 时，加无酶水补齐到0.4 mL后加入试剂。

④　组织样本：
比例：1 mL试剂:100 mg 组织（高DNA组织如脾脏/淋巴结/肿瘤组织减半：1 mL : 50 mg）。
操作：立即充分匀浆。匀浆至液体无颗粒、颜色均匀、略带粘稠感（高RNase组织如胰腺/脾脏/肝脏等需冰上匀浆，脑组织用玻璃匀质器）。

⑤　高脂肪样本（如脑组织/脂肪组织/脊髓样本等）

除脂：按组织样本处理匀质后先12,000 g离心5分钟，离心后多余脂质会形成顶层油脂层，使用移液枪或注射器除去大部分油脂层 。取下层液继续后续提取步骤。

2. 杂质沉淀 (关键去除DNA、蛋白质和多糖步骤)

①　加水：按每1mL NewZOL LS加入0.4 mL不含RNA酶的水（如ES-8087无DNA/RNA酶水(无菌)）。

②　反应：剧烈摇晃15秒，室温放置5-15分钟（组织样本需放置满15分钟） 。

③　离心：室温下以12,000×g离心15分钟 。

④　取样：吸取上清液（约占总体积75%，如使用1 mL裂解液对应吸取约1 mL上清）转移至新管。注意：此时DNA、蛋白质和大部分多糖会形成半固体沉淀，RNA留在上清液中。宁可少吸，切勿触碰底层固体。

3. 总RNA沉淀

①　沉淀：加入1倍体积的异丙醇（即1 mL上清液加 1 mL 异丙醇） 。

②　静置：室温放置10分钟

③　离心：室温下以12,000×g离心10分钟 。弃上清，管底可见白色沉淀即为RNA（对于脾脏等样本，RNA可能在管侧形成凝胶状膜）。

4. 洗涤RNA

①　洗涤：加入1mL 75% 乙醇 (v/v)，用移液器轻轻吹打漂洗沉淀 。

②　离心：室温下以7500× g 离心3分钟。重复洗涤一次。

③　干燥：弃去上清，将离心管倒扣在洁净纸巾上，空气干燥5-10分钟。
注：切勿加热干燥或真空离心干燥，否则RNA将极难溶解。

5. 溶解RNA

①　溶解：用20-50 μL不含RNA酶的水（如ES-8087无DNA/RNA酶水(无菌)），反复吹打使沉淀完全溶解。

②　助溶：若溶解困难，可在55-60°C下水浴孵育10分钟。

③　保存：得到的RNA立即进行检测或-80℃长期保存（若需更长时间保存请添加适量RNA Chill（ES-8520））。

【注意事项】

1. 储存：若暂时无法实验，可在加入NewZOL LS后-80°C保存最长1年稳定。

2. 细胞清洗：收集细胞时不要洗涤细胞（防止RNA降解），直接收集沉淀后加入试剂。

3. 组织匀浆状态：匀浆器生热会降解 RNA，长时间务必在冰上操作并采取间歇性匀浆。

4. 防止RNA降解：皮肤接触是RNase的主要来源。操作时必须佩戴双层手套、口罩，且所有枪头、离心管必须标注为RNase-free。

5. 安全性（危险提示）：必须在通风橱内操作。若不慎溅到皮肤，请立即用大量清水冲洗。