产品描述
产品介绍
本试剂盒适用于哺乳动物血液核酸提取，不含苯酚等有毒化学试剂组分，采用独特的缓冲液配方Buffer IRB最大限度去除血液抑制剂的影响，同时应用先进的硅胶膜吸附技术，操作简单、快速。得到的DNA 比传统试剂盒纯度更高，可直接用于酶切、转化、测序及PCR 等分子生物学实验。
存储条件
本产品除Proteinase K溶液和RNase溶液外，其余试剂可在室温(15-25℃)保存12个月。低温下Buffer BL或Buffer IRB可能会有沉淀形成，使用时需55℃水浴让沉淀完全溶解。Proteinase K溶液和RNase A溶液冰袋运输，收到产品后请分装保存于-20℃。
需要额外准备的材料
□ 无水乙醇（96%-100%）
□ 无菌1.5/2mL离心管
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
● Buffer BL和Buffer IRB是如有混浊现象，可在55℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
● 基因组提取所有步骤都在室温（15-25°C）下进行。
● 样本要求：本试剂盒首选EDTA抗凝血（通常为紫色盖真空管）。亦可使用柠檬酸钠（ACD/枸橼酸钠）抗凝血。严禁或不建议使用肝素抗凝血（通常为绿色盖真空管），因为残留的肝素会严重抑制下游PCR扩增及酶促反应。
开始前试剂准备
□ 按瓶子标签所示，Buffer IRB及Buffer BW中加入指定体积的无水乙醇稀释，于室温密封保存。
DNA浓度及纯度检测
l 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测纯度与浓度。
l DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。
l OD260/OD280比值应为1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会略低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
应用领域
适合于从约10μL-1mL抗凝血液、血清、血浆、尿液、或其它体液样品中直接提取总DNA。获得的DNA包括了基因组 DNA(如淋巴细胞、线粒体DNA、游离的DNA(>100bp)、以及病毒DNA(如乙肝)等；
操作步骤：
1. 转移250μL抗凝的血液，血清，血浆或其它体液样品至蛋白酶的离心管中。轻轻振荡混匀。若血液小于250μL，用PBS或Buffer ATE调整总体积至250μL。
注意：首选EDTA抗凝血。亦可使用柠檬酸钠抗凝。不建议使用肝素抗凝，残留的肝素会严重抑制下游PCR反应。
2. 加入15 μL Proteinase K溶液，最高速度涡旋混匀5秒。
注意：Proteinase K溶液不能与Buffer BL先混合。
3. 加入250μL Buffer BL至样品中。立即颠倒3-5次混匀，最高速度涡旋混匀15-20秒。后56℃水浴15分钟，其间涡旋混匀2-3次。
注意：涡旋时须让裂解液与血液充分混匀才能保证裂解效果。水浴结束后，简短离心以收集管盖及管壁的水滴。
4. （可选步骤）若需去除RNA，加入10μL RNase A Solution至裂解液中，室温静置 10分钟。
5. 加入250μL无水乙醇至裂解样品中，盖上盖子，快速颠倒3-5次，涡旋混匀30秒。
6. 把DNA结合柱装在2mL收集管中。转移混合液至柱子中，并以10,000×g离心1分钟。
7. 倒弃流出液，把柱子重新装回收集管中。加入500μL Buffer IRB（请先检查是否已加入无水乙醇）至柱子上并以10,000×g离心1分钟。
8. 倒弃流出液，把柱子重新装回收集管中。加入500μL Buffer BW（请先检查是否已加入无水乙醇）至柱子中，10,000×g离心1分钟。
9. 重复操作步骤8一次。
10. 倒弃流出液，把柱子重新装回收集管中。12,000×g离心空柱2分钟，以甩干柱子的乙醇残留。将吸附柱移入新的1.5 mL离心管，室温开盖晾干5-10 min。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验，务必执行晾干步骤，并确保吸附柱中无肉眼可见的残留液体。
11. 向膜中央悬空滴加30-100μL Buffer ATE，室温静置2分钟后以12,000×g离心2分钟收集离心下的基因组DNA。
Buffer ATE在55-60℃预热后加入膜中央洗脱可提高核酸获得率。静置时间有利于大分子基因组DNA释放
12. 弃去柱子，将基因组DNA溶液于-20℃保存（短期可保存2-8℃）或进行下游实验。
【附加方案】处理 0.25-1mL 的血液DNA抽提 (注:该方案需要另外订购 Buffer RBC)
① 转移0.25-1mL抗凝血液样品至2-15mL 离心管中。
② 加入2.5倍体积 Buffer RBC至样品中，颠倒混匀5-10次并静置3分钟。
③ 2,000×g离心5分钟。小心倒弃上清液，并反扣于吸水纸上吸尽残液。（注：倒弃上清液时，小心不要倒弃细胞核沉淀。）
④ 加入250μL灭菌水和25μL蛋白酶 K溶液到样品中。涡旋30秒打散沉淀团。
⑤ 按前述第3步加入Buffer BL开始进行操作。
常见问题
1. 柱子堵塞
样品裂解不充分: 样品与Buffer BL混匀不充分。重新提取，加入Buffer BL后先颠倒混匀3-5次，然后以最高速度涡旋让样品与Buffer BL充分混匀。
Proteinase K活性下降: 重新制备Proteinase K。使用后Proteinase K必须保存于-20℃。Proteinase K与Buffer BL不能预先混合。
样品含凝血块: 处理陈旧的血液样品时，加大蛋白酶的用量，或用附加方案进行提取。
样品含固体颗粒：在第5步加入乙醇前，10,000×g离心3分钟去除未消化的杂质，转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
样品用量太多: 白膜层、浓缩血液、细胞悬液中含在大量的细胞，减少样品量。
2. DNA纯度不达标
血液样品中存在凝血块: 加大蛋白酶K的用量，消化过程中用移液枪吸打几次打散凝块。或通过离心去除。处理凝血较多的样品时，需用匀浆器充分匀浆凝块。
样品裂解不充分: 样品与Buffer BL混匀不充分。重新提取加入Buffer BL后延长混匀及涡旋时间
3. DNA产量低
血浆或血清等无细胞体液样品，其DNA含量低，通常只有ng级。
第5步加入乙醇后混匀不充分或乙醇加入的体积不够。
洗脱不充分: 洗脱液需加到膜中央，可增加洗脱体积或次数。
产品规格
- 货期
- 1-2天
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1201、基因组DNA提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温(15-25℃)保存
常见问题 (FAQ)
提取的 DNA 应如何保存？
短期：4℃ 储存（1–2 周）。长期：-20℃ 分装储存（每管单次用量 + 备份），避免反复冻融。在试剂盒提供的洗脱缓冲液中保存稳定性最佳；用纯水洗脱时建议立即冻存。储存 >5 年的样品建议重新电泳验证完整性。洗脱体积建议 50–100 μL，不应小于 30 μL。
从冻存血液中提取效果会变差吗？
冻存血液（-20℃ / -80℃）若储存得当（避免反复冻融），DNA 完整性与得率与新鲜血样相当。建议：① 缓慢冰上解冻；② 轻轻颠倒混匀，避免剧烈涡旋导致 DNA 断裂；③ 解冻后尽快提取，不要再次冻存原样品。
白细胞少（如老年患者、化疗后患者）样品如何提高得率？
方法：① 增大起始体积（≤柱上限）；② 先用红细胞裂解液(RBC lysis)富集白细胞，弃红细胞与血浆，仅用白细胞 pellet 上柱；③ 56℃ 蛋白酶 K 消化延长至 2 小时；④ 选择更小洗脱体积（30–50 μL）以提高 DNA 浓度。
提取后可见洗脱液浑浊，原因是什么？
洗脱液浑浊通常是颗粒物（变性蛋白、白细胞碎片）残留。原因可能：① 蛋白酶 K 消化不完全（延长消化）；② 上柱前样品未完全裂解（裂解后应清亮）；③ 离心力或时间不足。处理方法：13,000 × g 离心 1 分钟取上清继续使用，或重新上柱过滤。
可以用于 NGS 文库构建吗？
可以。本试剂盒提取的 DNA 满足主流 NGS 文库构建（Illumina、华大、MGI）的要求。建议文库构建前用 Qubit 而非 NanoDrop 测定浓度（更准确），并通过琼脂糖凝胶或 TapeStation 检查完整性。
提取的 DNA 适合哪些下游应用？
本试剂盒提取的基因组 DNA（典型片段长度 30–50 kb）适用于：PCR / qPCR、Sanger 测序、二代测序文库构建（短读长 + 长读长）、SNP 分型、限制性片段长度多态性(RFLP)、Southern blot、CRISPR 基因组分型、HLA 配型、法医学应用等。如需 >100 kb 高分子量 DNA（如 Oxford Nanopore 或 PacBio HiFi），建议使用专用 HMW DNA 提取试剂盒。
OD260/OD280 比值偏低（<1.7）怎么办？
本试剂盒提取的 gDNA OD260/OD280 理想值为 1.7–2.0。比值低于 1.7 通常提示蛋白污染。常见原因：① 蛋白酶 K 消化时间不足（建议 56℃ ≥30 分钟，复杂样品延长至 1–2 小时）；② 红细胞溶解不完全，血红素干扰；③ 洗涤步骤乙醇浓度或体积不足。建议：延长 56℃ 消化、加大裂解液体积、增加一次含乙醇漂洗液洗涤。
抗凝剂选择对提取有什么影响？
EDTA 与柠檬酸钠抗凝血是最常用且对提取无明显干扰的样品；肝素抗凝血含肝素会抑制下游 PCR，建议加肝素酶 I 在 37℃ 处理 15 分钟后再上柱，或更换抗凝管。冷冻血液应在冰上缓慢解冻并轻轻颠倒混匀，避免红细胞过度溶血干扰柱结合。
从 200 μL 全血典型可以获得多少 DNA？
正常成人外周血白细胞数约 4–11 × 10⁹/L，对应 200 μL 全血通常含 6–10 μg 基因组 DNA；本试剂盒回收率约 50–70%，因此典型得率为 3–7 μg DNA。儿童或淋巴减少症患者得率会偏低。如需更高得率，建议增加起始量或先富集白细胞层。
本试剂盒可以处理哪些类型的血液样品？
本试剂盒兼容新鲜全血、抗凝全血（EDTA / 柠檬酸 ，肝素抗凝血需先用肝素酶处理或更换抗凝管）、冷冻全血、白细胞悬液与去红细胞后的白细胞层（buffy coat）。推荐起始量 200 μL 全血，过载会降低得率。Wright 染色血膜或干血斑(DBS)需要专用试剂盒。
