产品描述
产品介绍
本试剂盒采用可高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收70bp-10kbp大小的DNA片段，也可以用于各种PCR体系中DNA回收，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
存储条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。Buffer QG/PB可能产生沉淀，若有沉淀使用前可在55℃水浴中预热10 min以溶解。
需要额外准备的材料
□ 无水乙醇（96%-100%）
□ 无菌1.5mL离心管
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
□ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
□ 如下一步实验要求较高，核酸电泳时则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
□ 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
□ 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30µL 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7之间。
□ 回收<70bp或>10kbp的DNA片段时，应加大Buffer QG的体积，延长吸附和洗脱时间。
□ 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。
开始前试剂准备
□ 按瓶子标签所示，加入4倍体积的无水乙醇稀释Buffer PW，于室温密封保存。
□ 确认Buffer QG溶液显示为黄色。
DNA浓度及纯度检测
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
操作步骤：
一、琼脂糖回收DNA
1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离DNA片段。当DNA片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的DNA凝胶。
为避免DNA片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。
2. 放入1.5mL离心管中并称取凝胶块的重量，加入3倍体积的Buffer QG（如凝胶称重结果为100mg，则其体积约等于100µL，应加入300µL Buffer QG）。
对于>2%的琼脂糖凝胶，添加6倍体积的Buffer QG。
3. 50℃水浴10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。
注意：若回收<300bp的DNA片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA能力较强。
4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的Buffer QG）。
如果混合物的颜色为橙色或紫色，则逐滴加入10-30µL 3 M 醋酸钠(pH 5.2)并混合，直到混合物颜色变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer QG含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为红色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。
5. 将吸附柱套在2mL收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入500µL Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。
7. 重复操作步骤6一次。
8. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱移入新的1.5mL 离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。
注意：Buffer PW中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
9. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µL Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。
注意：洗脱体积不应小于30µL，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可重复本洗脱步骤一次。
二、从PCR反应液或者酶切反应中回收DNA
1. 将5倍体积的Buffer PB添加到1倍体积的PCR样品中，然后混匀。
例如，将500µL Buffer PB添加到100µL PCR样品（不包括油的体积），无需去除石蜡油或矿物油。
2. Buffer PB与样品充分混匀后，检查颜色是否为黄色。
如果混合物的颜色为橙色或紫色，则逐滴加入10-30µL 3 M 醋酸钠(pH 5.2)并混合，直到混合物颜色变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer PB含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。
3. 将吸附柱套在2mL收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
4. 向吸附柱中加入500µL Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。
5. 重复操作步骤4一次。
6. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱移入新的1.5mL离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。
7. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µL Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。
产品规格
- 货期
- 1-2天
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1104、凝胶核酸回收、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温（15-25℃）干燥条件下，可保存
常见问题 (FAQ)
纯化后产物如何保存？
洗脱体积不应小于 30 µL（建议 30–50 µL），过少会显著降低回收效率。短期 4℃ 1–2 周；长期 -20℃ 分装储存。测序应用必须用 ddH₂O 洗脱并保证 pH 7.0–8.5（pH <7.0 会显著降低洗脱效率）；常规分子生物学实验优先使用 Buffer EB。试剂盒整体在室温（15–25℃）干燥条件下可保存 12 个月，Buffer QG 或 Buffer PB 出现沉淀时 55℃ 水浴 10 min 至溶解后即可使用。
高浓度胶（≥3%）回收率明显下降，如何优化？
高浓度胶融解慢、粘度高，会包裹 DNA。优化方法：① >2% 凝胶按 6 倍胶重加 Buffer QG；② 50℃ 加热延长至 15–20 min，期间多次涡旋至完全溶解；③ 高浓度胶切尽量小；④ 必要时改用 LMP 低熔点胶（37℃ 即可融解，对大片段更友好）。
胶回收 vs PCR 纯化在选择路径时如何决定？
单一目标条带且无明显非特异性扩增 → PCR 纯化路径（用 Buffer PB，5 倍 PCR 体积，流程更快）；多条带或需切除引物二聚体 → 胶回收路径（用 Buffer QG）。两条路径回收的 DNA 在下游应用兼容性上完全等价。
纯化后 DNA 适用于哪些下游应用？
回收 DNA 的 OD260/OD280 通常 1.7–2.0、盐离子与有机残留极低，可直接进入：限制酶酶切、连接（包括 T/A 克隆与 Gibson 装配）、PCR 与 qPCR、Sanger / 二代测序文库构建、in vitro 转录、克隆转化等。
UV 透射观察胶切时如何减少 DNA 损伤？
切胶时紫外照射时间应尽量短，并尽量切去多余凝胶。建议优化：① 使用蓝光透射仪（如 Safe Imager）替代 UV，能完全避免嘧啶二聚体生成；② 必须用 UV 时控制曝光时间 <30 秒；③ 选用低毒染料（GelRed、SYBR Safe、SafeView ES-8426）替代 EB 以缩短观察时间。
胶染剂会被有效去除吗？
EB（溴化乙锭）、SYBR Safe、GelRed、SafeView（ES-8426）等常用染料在硅胶膜结合-洗涤过程中会被冲洗掉，洗脱液中残留 <1% 起始量，不影响下游酶反应或测序。如果用 EB 染色后回收 DNA 用于克隆，建议加 Buffer PW 后静置 2–5 min 再离心（这一步对盐敏感实验如平末端连接、直接测序也有帮助）。
胶切回收时哪些操作影响得率？
关键点（与 EK-1101 流程一致）：① Buffer QG 加入量——≤2% 凝胶按 3 倍胶重加（如 100 mg 胶加 300 µL QG），>2% 凝胶按 6 倍胶重加；② 50℃ 水浴 10 min 完全溶胶（期间多次颠倒混匀加速）；③ 上柱前确认溶液颜色为黄色（pH ≤7.5），呈橙紫色时逐滴加 3 M 醋酸钠 pH 5.2，10–30 µL 调回黄色；④ 回收 <300 bp 片段可在完全溶胶后加 1 倍胶体积异丙醇提升得率；⑤ Buffer PW 漂洗后空管 ~13,400×g 离心 2 min 再开盖室温静置 5–10 min 彻底晾干乙醇；⑥ Buffer EB 加在膜中央，60℃ 预热可提高得率。
适用片段范围与单柱处理量是多少？
本试剂盒适用 70 bp – 10 kb 的双链 DNA，回收率可达 80% 以上，单柱单次最大吸附量 20 µg DNA。回收 <70 bp 或 >10 kb 片段时，应加大 Buffer QG 体积、延长吸附与洗脱时间，回收率会有所下降。单柱单次上样上限 700 µL，超量分批离心即可（无需更换柱子）。
与单功能试剂盒（EK-1101 / EK-1102）相比有什么优势？
通用型试剂盒同时含有 Buffer QG 与 Buffer PB，覆盖了 EK-1101（胶回收）和 EK-1102（PCR 纯化）的功能，优势：① 实验室耗材简化（一套试剂支持两种应用）；② 灵活性高（同一克隆流程中两种路径可混用）；③ 总体成本更低。
本试剂盒既能胶回收又能 PCR 纯化，原理是什么？
本试剂盒采用硅基质材料 + 两套独立缓冲液系统：Buffer QG（胶溶解 + 上柱结合）用于琼脂糖凝胶回收；Buffer PB（PCR/酶切反应液上柱结合）用于直接纯化 PCR 产物；之后两条路径共用 Buffer PW（含乙醇漂洗）和 Buffer EB（弱碱性洗脱）。两路径流程在装柱、洗涤、洗脱步骤完全相同，可在同一克隆/PCR 工作流中混用。
