产品描述
【保存条件】
GPCR蛋白提取及稳定剂保存于2-8℃；蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物-20℃保存一年
【产品概述】
GPCR 属于多次跨膜蛋白，提取后极易因失去磷脂双分子层的支撑而发生构象坍塌或聚集失活。本试剂盒采用尖端的去垢剂胶束（Micelle）封装技术，模拟天然脂质环境，在1-2 小时内高效提取功能性受体。
高稳定性：提取后的受体在4℃可保持功能活性长达1周，-20℃可保存1个月。
应用广泛：特别适用于配体结合实验、激酶活性检测、电生理分析及 Western Blot。
提取量参考：1ml可用于1×106个细胞或50-100 mg组织。
【实验前准备】
配制完全裂解液（现配现用）：根据用量，每1ml GPCR提取液中加入20µL蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物（50×），混匀后置于冰上。
【操作方法】
1. 样本收集与洗涤（关键：彻底去除干扰）
A. 培养细胞（贴壁或悬浮细胞）：
① 收集：贴壁细胞推荐用细胞刮刀刮取；悬浮细胞直接收集（4°C, 500 × g离心5分钟）。
② 洗涤：用预冷PBS洗涤细胞2次（收集细胞方法：4°C, 500 × g 离心5分钟）。最终弃净上清，确保细胞沉淀尽量干燥。
B. 组织样本：
洗涤：取 50-100 mg 组织，PBS 洗涤2次去除血污，剪成碎糜状。
2. 裂解与稳定处理
① 加液：每1×106个细胞或50-100 mg组织加入1 mL含抑制剂裂解液。
② 裂解：
细胞：用移液器吹打10-15 次，短暂漩涡混匀。
组织：转移至 Dounce匀浆器，冰浴匀浆 10-15 次。
注：对于 Expi293等过表达系统，增加Dounce匀浆能显著提升活性受体回收率。
③ 孵育：将样本置于 4°C 旋转摇床上孵育30-60分钟。 注：旋转孵育优于静态放置，能确保胶束对膜蛋白的充分封装。
3. 蛋白收集
① 离心：4°C, 16,000 × g 离心20分钟。
② 收集：小心吸取上清液（即为功能性GPCR蛋白），转移至预冷的全新离心管中。
注：立即进行下游应用或将提取物等分试样储存在4°C下保存长达1周或在-20°C下保存长达 1个月以备将来使用，同时最大程度地减少受体功能的损失。
【注意事项】
1. 蛋白变性严禁高温：GPCR是膜蛋白，高温（95-100°C）会导致膜蛋白疏水域暴露并发生不可逆聚集，WB 结果通常表现为孔底部有沉淀或条带“涂布状”。推荐方案： 50°C 孵育30分钟，或37°C孵育1小时。
2. 严禁超声破碎：超声产生的局部高温和剪切力会破坏胶束结构，导致受体变性失活。若组织裂解物过于粘稠，请增加匀浆次数或延长孵育时间。
3. 安全防护：为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。该产品仅实验室使用，不适合农业/家庭/临床用途使用。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-6020、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
2-8℃；蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物-20℃保存
常见问题
该产品如何保存？
请参照产品说明书中的保存条件。一般生物科研试剂建议在2-8℃或-20℃条件下保存，避免反复冻融。具体保存条件请以产品标签为准。
该产品的货期是多久？
ECOTOP SCIENTIFIC常规库存产品一般1-3个工作日内发货。如遇缺货情况，客服会及时与您沟通预计到货时间。
如何获取产品的技术支持？
您可以通过电话（15622108587）或在线客服联系我们的技术支持团队。我们提供产品使用指导、实验方案优化等专业技术服务。
