产品描述
产品介绍
本试剂盒采用可高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，适用于从PCR产物、限制性内切酶体系、或其他酶促反应液中回收100bp-10kb的DNA片段，回收率可达90%以上，每个吸附柱每次可吸附的DNA量为20µg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
存储条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，Buffer PB可能产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热10 min至沉淀溶解。
需要额外准备的材料
□ 无水乙醇（96%-100%）
□ 无菌1.5mL离心管
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
□ 本试剂盒为无选择性的回收溶液内所有DNA片段，如需回收特定片段，同时去除其他不同大小的片段，请选择琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。
□ 回收<100bp或>10kb的DNA片段时，应加大Buffer PB的体积，延长吸附和洗脱时间。
□ 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。
开始前试剂准备
□ 按瓶子标签所示，加入4倍体积的无水乙醇稀释Buffer PW，于室温密封保存。
□ 确认Buffer PB溶液显示为黄色。
DNA浓度及纯度检测：
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
操作步骤：
1. 将5倍体积的Buffer PB添加到1倍体积的PCR样品中，然后混匀。
例如，将500µL Buffer PB添加到100µL PCR样品（不包括油的体积），无需去除石蜡油或矿物油。
2. Buffer PB与样品充分混匀后，检查颜色是否为黄色。
如果混合物的颜色为橙色或紫色，则逐滴加入10-30µL 3 M 醋酸钠(pH 5.2)并混合，直到混合物颜色变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer PB含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。
3. 将吸附柱套在2mL收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
吸附柱最大容量为700µL，若样品体积大于700µL，可分批加入。
4. 向吸附柱中加入500µL Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。
5. 重复操作步骤4一次。
6. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5mL离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。
注意：Buffer PW中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
7. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µL Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。
注意：洗脱体积不应小于30µL，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，若追求更高产量，可用新的 Buffer EB 重复洗脱一次；若追求更高浓度，可将第一次的洗脱液重新加回膜中央再次洗脱。
常见问题：
1. 回收效率低
l Buffer PB加入量不够：正确测量PCR反应液体积，加入足量Buffer PB。
l 洗脱液体积太小：建议用Buffer EB洗脱两次，以获得最高的回收率。洗脱液必须加入柱子的膜中央。洗脱效率取决于洗脱体积和次数。
l 试剂准备有误：Buffer PW没有加入乙醇稀释或体积不准确(乙醇浓度需控制在80%)。
2. 下游应用不理想
盐污染：在加入Buffer PW的步骤中，将Buffer PW加入吸附柱盖上盖子后静置5min再离心。
纯化的DNA还含有引物二聚体：若引物二聚体污染严重，建议改用EK-1101琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行切胶纯化。
乙醇污染：洗脱DNA前，打开柱子的盖子，室温晾干5-10min以彻底去除乙醇。若肉眼可见膜上有残留液体，可适当延长干燥时间。
3. A260/230比值低
这是高盐缓冲液残留的现象。可通过增加一次Buffer PW洗涤并在离心前静置2 min来改善。
产品规格
- 货期
- 1-2天
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1102、凝胶核酸回收、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存
常见问题 (FAQ)
纯化产物如何保存？
短期：4℃ 1–2 周。长期：-20℃ 分装储存，避免反复冻融。试剂盒整体在室温（15–25℃）干燥条件下可保存 12 个月，更长时间保存可置 2–8℃；2–8℃ 保存条件下 Buffer PB 可能产生沉淀，使用前 37℃ 水浴 10 min 至沉淀溶解后即可使用。储存超过 6 个月的纯化产物建议重新检测条带完整性。
本试剂盒与胶回收试剂盒（EK-1101）的选择？
若 PCR 反应中只有单一目标条带、无明显非特异性扩增和引物二聚体污染，优先选择 EK-1102（直接纯化、流程更快、回收率 ≥90%、无 UV 损伤风险）；若 PCR 出现多条带、需切除非目标产物或要求严格去除引物二聚体，则选择 EK-1101 切胶回收（70 bp – 10 kb，回收率 ≥80%）。两者纯化产物兼容相同的下游应用。
洗脱液中可见乙醇气味或下游酶反应失败怎么办？
说明书明确指出：Buffer PW 中乙醇残留会影响后续酶反应（酶切、PCR 等）。规范操作：① Buffer PW 漂洗后空管最大转速 ~13,400×g 离心 2 min；② 将吸附柱套入新的 1.5 mL 离心管，开盖室温静置 5–10 min 彻底晾干，肉眼可见膜上有残留液体时延长干燥时间；③ 若回收 DNA 用于盐敏感实验（平末端连接、直接测序），可在加 Buffer PW 后静置 2–5 min 再离心；④ A260/A230 偏低通常因高盐残留，可在 PW 漂洗时静置 2 min 再离心改善。
纯化后 PCR 产物可直接用于 Sanger 测序吗？
可以。本试剂盒纯化的 PCR 产物已去除引物、dNTP 与盐离子，可直接送测。测序时建议使用 ddH₂O 洗脱并保证 pH 7.0–8.5（pH <7.0 会显著降低洗脱效率）。测序前再用 NanoDrop 检测 OD260/OD280（≥1.7）以确保无残留蛋白污染。
洗脱后产物量很低，如何排查？
按说明书故障排查表：① Buffer PB 加入量不足——必须严格按 5 倍 PCR 体积加入；② Buffer PW 准备失误——首次使用前必须按瓶身指示加 4 倍体积无水乙醇稀释（最终乙醇浓度 ~80%）；③ 洗脱液必须加在膜中央且 ≥30 µL（建议 30–50 µL，预热 60℃，室温静置 2 min 再离心）；④ 上样前 PCR 反应中本身无产物（先用电泳确认）；⑤ Buffer PB 颜色呈橙紫色——pH 不达标，加 3 M 醋酸钠调整。追求最高回收率可重复洗脱一次。
纯化后的 DNA 可用于哪些下游应用？
纯化产物兼容大多数下游酶反应：限制性内切酶酶切、连接、Sanger 测序、二代测序文库构建、qPCR 模板、in vitro 转录、克隆转化、文库筛选等。纯化 DNA 的 OD260/OD280 通常 1.7–2.0，盐离子残留极低，不会抑制聚合酶或连接酶活性。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
加入 Buffer PB 后样品颜色发紫或发橙怎么办？
Buffer PB 含 pH 指示剂，pH ≤7.5 时呈黄色（DNA 可高效结合硅胶膜），pH >7.5 时呈橙色或紫色。出现橙紫色通常因 PCR 反应体系中存在高浓度碱性 buffer。解决方法：逐滴加入 10–30 µL 3 M 醋酸钠（pH 5.2）并混匀，直到混合物颜色变回黄色再上柱。
可以处理多大体积的 PCR 反应？
Buffer PB 加入量为 PCR 反应体积的 5 倍（如 100 µL PCR 反应 + 500 µL Buffer PB）。单柱最大上样体积 700 µL，超过 700 µL 时分批多次离心上柱即可（无需更换柱子）。50 µL 标准 PCR 反应直接加 250 µL Buffer PB 后上柱即可。处理含矿物油或石蜡油的 PCR 反应时无需先去除油层。
纯化的典型回收率与适用片段范围是多少？
本试剂盒适用回收 70 bp – 10 kb 的双链 DNA，回收率可达 90% 以上，单柱单次最大吸附量 20 µg DNA。回收 <100 bp 或 >10 kb 片段时，应加大 Buffer PB 体积、延长吸附与洗脱时间，回收率会有所下降；如需保留 <100 bp 片段或专门去除引物二聚体，建议改用 EK-1101 进行胶回收。
PCR 产物纯化试剂盒的工作原理是什么？
本试剂盒采用硅基质材料 + 独特的 Buffer PB 缓冲液系统：加入 Buffer PB（含 pH 指示剂、高离液盐）后 DNA 选择性吸附到硅胶膜上；通过含乙醇的 Buffer PW 漂洗去除引物、dNTP、酶、盐离子等 PCR 反应残留；最后用 Buffer EB（弱碱性低盐）或 ddH₂O 洗脱获得纯化的 DNA。注意：本试剂盒为无选择性回收，溶液中所有 DNA 片段都会被结合，如需选择性回收特定大小片段请改用 EK-1101 凝胶 DNA 回收试剂盒。
