产品描述
产品介绍
本试剂盒采用可高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收70bp-10kbp大小的DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
存储条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。Buffer QG可能产生沉淀，若有沉淀使用前可在55℃水浴中预热10 min以溶解。
需要额外准备的材料
□ 无水乙醇（96%-100%）
□ 无菌1.5mL离心管
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
□ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
□ 如下一步实验要求较高，核酸电泳时则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
□ 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
□ 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30µL 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7之间。
□ 回收<70bp或>10kbp的DNA片段时，应加大Buffer QG的体积，延长吸附和洗脱时间。
□ 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。
开始前试剂准备
□ 按瓶子标签所示，加入4倍体积的无水乙醇稀释Buffer PW，于室温密封保存。
□ 确认Buffer QG溶液显示为黄色。
DNA浓度及纯度检测
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
操作步骤：
1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离DNA片段。当DNA片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的DNA凝胶。
为避免DNA片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。
2. 放入1.5mL离心管中并称取凝胶块的重量，加入3倍体积的Buffer QG（如凝胶称重结果为100mg，则其体积约等于100µL，应加入300µL Buffer QG）。
对于>2%的琼脂糖凝胶，添加6倍体积的Buffer QG。
3. 50℃水浴10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。
注意：胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA能力较强。若回收<300bp的DNA片段可在完全溶胶后加入1倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率，加入异丙醇后需充分颠倒混匀，且无需再次水浴，直接进行后续上柱操作。
4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的Buffer QG）。
如果混合物的颜色为橙色或紫色，则逐滴加入10-30µL 3 M 醋酸钠(pH 5.2)并混合，直到混合物颜色变成黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer QG含有一种pH指示剂，在pH ≤7.5时为黄色，在较高pH时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。
5. （可选步骤）向上述溶胶液中加入1倍凝胶体积的异丙醇并混合。
例如，如果琼脂糖凝胶切片为100mg，则添加100µL异丙醇。此步骤增加了≤500bp和≥4 kb的DNA 片段的产量。对于500bp-4kb之间的DNA片段，添加异丙醇对产量没有影响。
6. 将吸附柱套在2mL收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
吸附柱最大容量为700µL，若样品体积大于700µL，可分批加入；为提高回收率，可短暂离心用于溶胶的1.5mL 离心管后再将溶液转移如吸附柱。
7. 向吸附柱中加入500µL Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。
8. 重复操作步骤7一次。
9. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5mL离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。
注意：Buffer PW中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µL Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。
注意：洗脱体积不应小于30µL，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可重复操作本洗脱步骤一次。
常见问题：
1. 回收率低：确保溶胶完全（55°C 水浴并多次颠倒混匀）；Buffer EB 必须加在膜中央（建议 60°C 预热）。
2. 条带变性/杂带：某些片段对热敏感，可降低溶胶温度至37-45°C，并相应延长溶胶时间。
3. A 260/230比值低：如果在0.5-1.0之间，且下游是做常规 PCR 或测序，通常可以直接使用，不需要过度担心，这是Buffer QG 中盐离子残留引起的正常现象，通常不影响测序、PCR或酶切。可通过增加一次Buffer PW的洗涤步骤改善。
4. 下游连接/转化失败：离心甩干后务必换新管并开盖晾干5-10 min，彻底去除残留乙醇。
产品规格
- 货期
- 1-2天
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1101、凝胶核酸回收、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温（15-25℃）干燥条件下，可保存
常见问题 (FAQ)
一次实验回收的 DNA 应如何储存？
短期使用：4℃ 保存 1–2 周；长期：-20℃ 分装储存，避免反复冻融。建议在试剂盒提供的 Buffer EB 中保存以提高稳定性；用 ddH₂O 洗脱的样品应立即冻存。储存超过 6 个月的样品建议重新检测电泳条带完整性。
胶回收试剂盒可以用于回收 RNA 或 PCR 产物吗？
本试剂盒针对琼脂糖胶中 DNA 回收设计；如需直接纯化 PCR 产物（不上胶），请使用 EK-1102 PCR 产物纯化试剂盒，流程更快、回收率 ≥90%。直接回收 RNA 不在本产品验证范围，RNA 提取纯化建议改用 EK-1103（RNA 纯化回收）或 EK-1300/EK-1303 等专用 RNA 提取试剂盒。
回收的 DNA 浓度偏低怎么办？
排查与提升思路：① 胶块完全溶解后检查 Buffer QG 颜色为黄色（pH ≤7.5 时 DNA 才能高效结合膜）；若呈橙色或紫色说明 pH 偏碱，逐滴加入 10–30 µL 3 M 醋酸钠 pH 5.2 调至黄色；② Buffer EB 加在膜中央并 60℃ 预热，洗脱前室温静置 2 min；③ 减少洗脱体积至 30 µL（最低限）以提升浓度；④ 同一柱可重复洗脱一次以提高总得率（牺牲浓度）；⑤ Buffer PW 必须按瓶身指示加 4 倍体积无水乙醇稀释。
胶切时如何避免 UV 损伤 DNA？
紫外照射会造成嘧啶二聚体形成，影响后续连接和 PCR 效率。本试剂盒说明书明确要求：切胶时紫外照射时间应尽量短，并尽量切去多余凝胶。建议优化：① 使用蓝光透射仪（如 Safe Imager）替代 UV；② 必须用 UV 时控制曝光时间 <30 秒；③ 使用低毒染料（如 SYBR Safe、GelRed、ES-8426 SafeView）替代 EB 以缩短观察时间。
回收的 DNA 可以直接用于哪些下游应用？
本试剂盒回收的 DNA 适用于常见下游分子生物学实验，包括：限制性内切酶酶切、连接反应、PCR 扩增、Sanger 测序、二代测序文库构建、克隆转化、文库筛选、in vitro 转录等。回收 DNA 的 OD260/OD280 通常 1.7–2.0（理想范围），满足大多数下游酶反应要求。
洗脱步骤可以用水代替 Buffer EB 吗？
可以使用 ddH₂O 洗脱，但 DNA 在水中长期储存会发生水解。测序应用必须用 ddH₂O 且 pH 严格控制在 7.0–8.5，pH <7.0 会显著降低洗脱效率；常规分子生物学实验建议优先使用试剂盒提供的 Buffer EB（弱碱性，含微量 EDTA），稳定性更好。洗脱体积不应少于 30 µL，过少会显著降低回收效率。
回收的 DNA 装载到下一道凝胶时为什么会漂出加样孔？
通常是洗脱后样品中残留乙醇（来自 Buffer PW）所致。乙醇密度低于 TE/水，会使 DNA 样品在加样时浮出加样孔。解决方法：Buffer PW 漂洗后空管最大转速 ~13,400×g 离心 2 min 彻底排空，并将吸附柱套入新的 1.5 mL 离心管开盖室温静置 5–10 min 彻底晾干，再加洗脱液。
为什么我的胶块在融胶步骤后还有残留固体？
融胶不彻底会显著降低回收率。本试剂盒推荐：① 称取胶块重量后按 3 倍体积（≤2% 凝胶）或 6 倍体积（>2% 凝胶）加入 Buffer QG（如胶块 100 mg ≈100 µL，则加 300 µL Buffer QG）；② 50℃ 水浴 10 min（或直至凝胶完全溶解），期间多次颠倒混匀加速溶胶；③ 胶完全溶解后将温度降至室温再上柱，吸附柱在室温时结合 DNA 能力最强；④ 回收 <300 bp 片段可在完全溶胶后加入 1 倍凝胶体积异丙醇以提高回收率。
胶回收的典型 DNA 回收率是多少？
本试剂盒标准操作下回收率可达 80% 以上，回收率受初始 DNA 量、洗脱体积、片段大小三个因素综合影响——初始量越少、洗脱体积越小、回收率越低。提升要点：① 切胶时尽量切去多余凝胶；② 50℃ 水浴 10 min 至胶完全溶解，期间多次颠倒混匀；③ 洗脱时用 Buffer EB（建议 60℃ 预热）加在膜中央；④ 必要时同一柱重复洗脱一次以提高得率。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒适用于多大范围的 DNA 片段回收？
本试剂盒采用硅基质材料 + 独特的 Buffer QG 缓冲液系统，适用回收 70 bp – 10 kb 的 DNA 片段，回收率可达 80% 以上，单柱单次最大吸附量 20 µg DNA。回收 <70 bp 或 >10 kb 片段时，应加大 Buffer QG 体积、延长吸附与洗脱时间。同时兼容 TAE 与 TBE 琼脂糖凝胶（如下游对杂质要求高，建议优先选 TAE）。
