产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
本产品采用优化的非离子去污剂配方，无需超声破碎或高压匀质，即可温和、快速地从革兰氏阴性（如 E. coli）和革兰氏阳性（如 B. subtilis）细菌中提取活性蛋白质。抽提过程能够最大限度地保留蛋白的天然空间结构与生物学活性，直接兼容下游的亲和层析（GST/His-tag）、BCA蛋白定量及Western Blot等实验。
【产品特点】
即用型—在 Tris 或磷酸盐缓冲液配方中使用温和的非离子去污剂（专有）对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的一步法细胞裂解
快速且简便—只需将 EasyLys-B试剂加入细菌沉淀中，通过混合10-15min进行孵育并在粒化细胞碎片后回收各种可溶蛋白
可兼容—完全可与添加蛋白酶抑制剂兼容，所获得的蛋白提取物可被用于蛋白测定、各种常见的亲和纯化方法（如 GST、6xHis）和其他应用
【操作步骤】
1. 蛋白酶抑制剂（必选）：临用前加入（如 ES-8315），防止蛋白降解。
2. EDTA（推荐用于阴性菌）：终浓度1mM。可螯合金属离子，破坏革兰氏阴性菌外膜。
3. 溶菌酶（推荐）：终浓度0.2mg/mL。用于降解细胞壁肽聚糖。
【操作步骤】
1. 离心收集细菌细胞：以5000×g的速度离心10min，收集细菌细胞沉淀。称量菌体重量，并继续进行下一步，或将菌体冻存在-20°C到-80°C之间。
2. 准备裂解液：将所需量的EasyLys-B试剂（每克菌体沉淀加入5 mL试剂）恢复至室温。添加相应蛋白酶抑制剂，现配现用。
注意：对新鲜制备的革兰氏阴性细胞（如E. coli BL21菌株）裂解时，向试剂中加入最终浓度为1 mM的EDTA（即每mLEasyLys-B试剂加入2µL的0.5M EDTA）。可选择添加溶菌酶至终浓度0.2mg/mL，可增强裂解。选择添加Benzonase全能核酸核至终浓度50U/mL，可降解裂解后液体粘秱度。
3. 加入裂解液：按每克细胞沉淀加入5 mL裂解液（含蛋白酶抑制剂/EDTA等）。用移液器上下吸打悬液(或涡旋)，直至完全均匀。
4. 室温孵育：在室温下轻轻摇动孵育15min。
5. 离心分离：以16,000×g的速度离心20min，以分离可溶性蛋白和不溶性蛋白。
6. 小心地从细胞碎片中吸取上清可溶性蛋白部分至另一新管中。使用SDS-PAGE和/或Western blot分析上清液和不溶性部分，以确定哪一部分含有目标蛋白。
【故障排除】
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
蛋白质产量低 | 细菌裂解不充分 | 将裂解孵育时间延长至1小时 |
将裂解缓冲液与细胞沉淀物的比例提高至每克菌体沉淀加10mL裂解液 | ||
为了提高裂解率，请将细菌沉淀进行至少经过一次冻融循环 | ||
蛋白发生降解 | 内源蛋白酶活性强 | 1. 必须补加蛋白酶抑制剂；2. 裂解及离心步骤尝试在4°C进行。 |
【注意事项】
1. 结晶析出：本试剂在室温（25°C）下可稳定存放2周。如出现少量沉淀，请置于37°C水浴溶解并摇匀后使用，不影响效果。
2. 兼容性：本试剂完全兼容 BCA 蛋白定量（如EK-5001）。
3. 科研用途：该产品仅实验室使用，不适合农业/家庭/临床用途使用。
4. 安全防护：为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml、500ml
应用领域
本产品适用于ES-6215、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题
该产品如何保存？
请参照产品说明书中的保存条件。一般生物科研试剂建议在2-8℃或-20℃条件下保存，避免反复冻融。具体保存条件请以产品标签为准。
该产品的货期是多久？
ECOTOP SCIENTIFIC常规库存产品一般1-3个工作日内发货。如遇缺货情况，客服会及时与您沟通预计到货时间。
如何获取产品的技术支持？
您可以通过电话（15622108587）或在线客服联系我们的技术支持团队。我们提供产品使用指导、实验方案优化等专业技术服务。
