产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
本产品采用优化的非离子去污剂配方，无需超声破碎或高压匀质，即可温和、快速地从革兰氏阴性（如 E. coli）和革兰氏阳性（如 B. subtilis）细菌中提取活性蛋白质。抽提过程能够最大限度地保留蛋白的天然空间结构与生物学活性，直接兼容下游的亲和层析（GST/His-tag）、BCA蛋白定量及Western Blot等实验。
【产品特点】
即用型—在 Tris 或磷酸盐缓冲液配方中使用温和的非离子去污剂（专有）对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的一步法细胞裂解
快速且简便—只需将 EasyLys-B试剂加入细菌沉淀中，通过混合10-15min进行孵育并在粒化细胞碎片后回收各种可溶蛋白
可兼容—完全可与添加蛋白酶抑制剂兼容，所获得的蛋白提取物可被用于蛋白测定、各种常见的亲和纯化方法（如 GST、6xHis）和其他应用
【操作步骤】
1. 蛋白酶抑制剂（必选）：临用前加入（如 ES-8315），防止蛋白降解。
2. EDTA（推荐用于阴性菌）：终浓度1mM。可螯合金属离子，破坏革兰氏阴性菌外膜。
3. 溶菌酶（推荐）：终浓度0.2mg/mL。用于降解细胞壁肽聚糖。
【操作步骤】
1. 离心收集细菌细胞：以5000×g的速度离心10min，收集细菌细胞沉淀。称量菌体重量，并继续进行下一步，或将菌体冻存在-20°C到-80°C之间。
2. 准备裂解液：将所需量的EasyLys-B试剂（每克菌体沉淀加入5 mL试剂）恢复至室温。添加相应蛋白酶抑制剂，现配现用。
注意：对新鲜制备的革兰氏阴性细胞（如E. coli BL21菌株）裂解时，向试剂中加入最终浓度为1 mM的EDTA（即每mLEasyLys-B试剂加入2µL的0.5M EDTA）。可选择添加溶菌酶至终浓度0.2mg/mL，可增强裂解。选择添加Benzonase全能核酸核至终浓度50U/mL，可降解裂解后液体粘秱度。
3. 加入裂解液：按每克细胞沉淀加入5 mL裂解液（含蛋白酶抑制剂/EDTA等）。用移液器上下吸打悬液(或涡旋)，直至完全均匀。
4. 室温孵育：在室温下轻轻摇动孵育15min。
5. 离心分离：以16,000×g的速度离心20min，以分离可溶性蛋白和不溶性蛋白。
6. 小心地从细胞碎片中吸取上清可溶性蛋白部分至另一新管中。使用SDS-PAGE和/或Western blot分析上清液和不溶性部分，以确定哪一部分含有目标蛋白。
【故障排除】
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
蛋白质产量低 | 细菌裂解不充分 | 将裂解孵育时间延长至1小时 |
将裂解缓冲液与细胞沉淀物的比例提高至每克菌体沉淀加10mL裂解液 | ||
为了提高裂解率，请将细菌沉淀进行至少经过一次冻融循环 | ||
蛋白发生降解 | 内源蛋白酶活性强 | 1. 必须补加蛋白酶抑制剂；2. 裂解及离心步骤尝试在4°C进行。 |
【注意事项】
1. 结晶析出：本试剂在室温（25°C）下可稳定存放2周。如出现少量沉淀，请置于37°C水浴溶解并摇匀后使用，不影响效果。
2. 兼容性：本试剂完全兼容 BCA 蛋白定量（如EK-5001）。
3. 科研用途：该产品仅实验室使用，不适合农业/家庭/临床用途使用。
4. 安全防护：为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml、500ml
应用领域
本产品适用于ES-6215、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
提取的蛋白：短期 4℃（1 天内做层析或酶活）；长期 -80℃ 分装保存，避免反复冻融——活性蛋白尤其敏感。
结晶析出怎么办？
如出现少量沉淀，请置于 37℃ 水浴溶解并摇匀后使用，不影响效果。
兼容 BCA 蛋白定量？
兼容性：本试剂完全兼容 BCA 蛋白定量（如 EK-5001）或EK-5004 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）。非离子去垢剂配方对 BCA 显色干扰小。注意：普通Bradford 法部分受去垢剂干扰。
可用于哪些下游应用？
亲和层析（GST/His-tag）、BCA 蛋白定量及 Western Blot。扩展应用：① 重组蛋白纯化（IMAC 镍柱、GST 亲和柱、Strep 亲和柱）；② 酶活检测；③ 抗体表位筛选；④ 细菌组学；⑤ 蛋白复合物拉网（pull-down）。
与超声破碎相比的优势？
传统超声破碎缺点：① 局部高温变性蛋白；② 噪音大、需专用设备；③ 探头交叉污染风险；④ 高压匀质需要 French Press 等贵重设备。本试剂无需超声：① 室温摇动 15 min 即可；② 蛋白活性保留好；③ 无设备依赖；④ 适合大批量样品并行处理。
典型故障排查表（说明书原文）？
常见问题一：蛋白质产量低：通常是细菌裂解不充分① 将裂解孵育时间延长至 1 小时 ② 将裂解缓冲液与细胞沉淀物的比例提高至每克菌体沉淀加 10 mL 裂解液③请将细菌沉淀进行至少经过一次冻融循环。常见问题二：蛋白发生降解：通常是内源蛋白酶活性强①必须补加蛋白酶抑制剂；② 裂解及离心步骤尝试在 4℃ 进行。
Benzonase 何时加？
可选择添加 Benzonase 全能核酸酶至终浓度 50 U/mL，可降解裂解后液体粘稠度。细菌大量裂解时基因组 DNA 释放使裂解液极度粘稠，影响离心分离与下游层析；Benzonase 处理可显著改善流动性与上柱效率。自备试剂：BenzonaseR Nuclease（Sigma E1014）或同等产品。
抑制剂、EDTA、溶菌酶如何选择？
① 蛋白酶抑制剂（必选）：临用前加入（如 ES-8135），防止蛋白降解；② EDTA（推荐用于阴性菌）：终浓度 1 mM——可螯合金属离子，破坏革兰氏阴性菌外膜（每 mL EasyLys-B 试剂加入 2 µL 的 0.5 M EDTA）；③ 溶菌酶（推荐）：终浓度 0.2 mg/mL——用于降解细胞壁肽聚糖。对新鲜制备的革兰氏阴性细胞（如 E. coli BL21 菌株）裂解时，向试剂中加入最终浓度为 1 mM 的 EDTA。
起始量与典型流程？
① 离心收集细菌细胞：5,000×g 离心 10 min 收集细菌沉淀，称量菌体重量；② 准备裂解液：所需量的 EasyLys-B 试剂（每克菌体沉淀加入 5 mL 试剂）恢复至室温，添加蛋白酶抑制剂现配现用；③ 加入裂解液：每克细胞沉淀加 5 mL 含抑制剂裂解液，移液器吹打或涡旋至完全均匀；④ 室温孵育：轻轻摇动孵育 15 min；⑤ 离心分离：16,000×g 离心 20 min 分离可溶性蛋白和不溶性蛋白；⑥ 小心吸取上清=可溶性蛋白部分。
本试剂的核心特点？
本产品采用优化的非离子去污剂配方，无需超声破碎或高压匀质，即可温和、快速地从革兰氏阴性（如 E. coli）和革兰氏阳性（如 B. subtilis）细菌中提取活性蛋白质。抽提过程能够最大限度地保留蛋白的天然空间结构与生物学活性，直接兼容下游的亲和层析（GST/His-tag）、BCA 蛋白定量及 Western Blot 等实验。
