产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
EasyLys-M 是一款高效、温和的哺乳动物细胞及组织全蛋白抽提试剂。本品采用优化的非变性去垢剂配方，旨在快速获取具有生物学活性的胞浆、胞核及膜蛋白。
对标性能：本品在裂解效率与活性保留方面与M-PER® (Thermo) 及CelLytic™ M (Sigma) 具有高度一致性，可直接替代。
应用广泛：提取的蛋白处于天然构象，直接兼容报告基因检测（荧光素酶、β-半乳糖苷酶）、蛋白激酶分析（PKA、PKC）、免疫检测（WB、ELISA）及免疫共沉淀（Co-IP）。
【产品特点】
兼容性强：抽提的可溶性蛋白处于非变性状态，可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程
作用温和：温和的除垢剂裂解，产生的抽提物直接与考马斯(Bradford)和BCA蛋白定量分析试剂或SDS-PAGE兼容
非变性：维持荧光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他报告基因的活性，与其他供应商的产品和冷冻/解冻方法一样好或更出色
操作简单：贴壁细胞直接在板上裂解或者在剥离和洗涤后悬浮于溶液中
【使用前准备】
1. 预冷：使用前确保 EasyLys-M试剂处于冰浴状态。
2. 添加抑制剂（核心）：临用前，向裂解液中加入适量蛋白酶抑制剂（如ES-8315）；若研究磷酸化蛋白，必须补加磷酸酶抑制剂（如ES-8317）。
【使用建议】
1. 样品前处理（具体用量参考表1）：
贴壁细胞：
① 弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。
② 加入预冷裂解液（如6孔板每孔加入100-200μL）。
悬浮细胞：
① 500×g离心5分钟收集细胞，弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。
② 按比例加入裂解液，通过手指弹击或轻微涡旋重悬细胞沉淀。
组织样本：
① 将组织剪成约2mm3的细碎块。
② 按每20mg组织（组织应去除各类结缔组织、血管等，无血液洁净状态）加入200-400μL裂解液的比例混合。
③ 使用玻璃匀浆器或电动匀浆设备彻底匀浆，直至无肉眼可见组织块。
2. 裂解与离心：
① 孵育：将混合物置于冰上或4℃摇床振荡孵育5-10 min（组织样本可延长至 20 min）。
② 离心：4℃下，14000×g离心10 min。
③ 收集：立即将含有活性蛋白的上清液转移至预冷的离心管中。
表1. 不同规格的细胞培养器皿中EasyLys-M 哺乳动物活性蛋白提取试剂的用量表。
细胞孔板或培养皿 | 面积（cm2） | 提取试剂用量 |
100mm | 55 | 500-1000μL |
60mm | 21 | 200-400μL |
6-well plate | 9.5 | 100-200μL/孔 |
24-well plate | 1.9 | 25-50μL/孔 |
96-well plate | 0.32 | 5-10μL/孔 |
【注意事项】
1. 蛋白产量低：若由于裂解不全或样本过载导致产量低，应适当增加裂解液比例或延长匀浆/冰上孵育时间。
2. 蛋白降解或失活：必须确保全程在冰上操作，并确认已足量添加未失效的蛋白酶/磷酸酶抑制剂。
3. 样本保存建议：提取后的蛋白应立即分装并冻存于-80℃，严禁反复冻融以防止蛋白变性或失活。
4. 安全防护与用途：操作时请佩戴实验服及手套；本品仅限科研使用，严禁用于临床诊断、食品或药品。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml
应用领域
本产品适用于ES-6220、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
试剂保存：4℃ 保存，有效期 12 个月。提取的活性蛋白：① 当天做完酶活/报告基因检测最佳；② 短期 4℃（1 天内）；③ 长期 -80℃ 分装保存（每管单次用量），避免反复冻融（活性蛋白对冻融特别敏感，每次损失 10–20% 活性）。安全防护与用途：操作时穿实验服及手套；本品仅限科研使用，严禁用于临床诊断、食品或药品。
常见失败原因排查？
① 蛋白产量低：若由于裂解不全或样本过载导致产量低，应适当增加裂解液比例或延长匀浆/冰上孵育时间（组织可延长至 20 min）；② 蛋白降解或失活：必须确保全程在冰上操作，并确认已足量添加未失效的蛋白酶/磷酸酶抑制剂；③ 样本保存建议：提取后的蛋白应立即分装并冻存于 -80℃，严禁反复冻融以防止蛋白变性或失活。
兼容 Bradford 与 BCA 双重定量？
直接与考马斯（Bradford）和 BCA 蛋白定量分析试剂兼容。——这是本试剂相比 RIPA / SDS 类裂解液的优势（后者通常仅兼容 BCA）。可灵活选择 EK-5001 BCA 或 EK-5002 / EK-5004 Bradford 测量蛋白浓度。
可用于哪些下游应用？
报告基因检测（荧光素酶、β-半乳糖苷酶）、蛋白激酶分析（PKA、PKC）、免疫检测（WB、ELISA）及免疫共沉淀（Co-IP）。产品特点①兼容性强：抽提的可溶性蛋白处于非变性状态，可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程；② 作用温和：温和的除垢剂裂解，产生的抽提物直接与考马斯（Bradford）和 BCA 蛋白定量分析试剂或 SDS-PAGE 兼容；③ 非变性：维持荧光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT 和其他报告基因的活性；④ 操作简单：贴壁细胞直接在板上裂解或者在剥离和洗涤后悬浮于溶液中。
与商品化温和裂解液的对标？
M-PER®（Thermo Pierce）和 CelLytic™ M（Sigma）。两者都是基于温和非变性去垢剂的哺乳动物活性蛋白提取试剂。本试剂在裂解效率、活性保留、下游兼容性方面达到同等水平，性价比优势明显。
贴壁细胞收集要点？
】弃培养基，用 PBS 洗涤一遍以去除血清蛋白。加入预冷裂解液（如 6 孔板每孔 100–200 µL）。避免：① 胰酶消化（会降解胞外区蛋白）；② 直接刮取后再重悬（细胞团块裂解不全）。如必须刮取，建议直接在皿内加裂解液 + 室温裂解几分钟后再刮取。
完整流程参数？
① 预冷：使用前确保 EasyLys-M 试剂处于冰浴状态；② 添加抑制剂（核心）：临用前向裂解液中加入蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）；研究磷酸化蛋白必须补加磷酸酶抑制剂（如 ES-8136 或 ES-8137 一站式）；③ 贴壁细胞 PBS 洗 1 次 + 加预冷裂解液 6 孔板每孔 100–200 µL；悬浮细胞 500×g 离心 5 min + PBS 洗 + 弹击/涡旋重悬；组织剪 2 mm³ + 加裂解液 + 玻璃匀浆器或电动匀浆设备彻底匀浆至无肉眼可见组织块；④ 裂解与离心：冰上或 4℃ 摇床振荡孵育 5–10 min（组织样本可延长至 20 min）→ 4℃ 14,000×g 离心 10 min；⑤ 立即将含活性蛋白的上清液转移至预冷的离心管中。
起始量与裂解液用量？
整培养器皿对照表：① 100 mm 培养皿（55 cm²）：500–1000 µL；② 60 mm 培养皿（21 cm²）：200–400 µL；③ 6 孔板（9.5 cm²/孔）：100–200 µL/孔；④ 24 孔板（1.9 cm²/孔）：25–50 µL/孔；⑤ 96 孔板（0.32 cm²/孔）：5–10 µL/孔；⑥ 组织：每 20 mg 组织 + 200–400 µL 裂解液（组织应去除各类结缔组织、血管等，无血液洁净状态）。
与 RIPA / EK-6200 的区别？
EasyLys-M与RIPA/EK-6200的关键差异在于去垢剂非强度及其对蛋白质的影响。EasyLys-M采用温和的变性配方，去垢剂强度低，能够很好地保留蛋白质间的抗原与蛋白活性，因此在Co-IP、Pull-down等蛋白互作实验以及报告基因检测、酶活检测等对蛋白活性要求较高的应用中表现优异；但由于其强度相对温和，总蛋白得率在一定水平。RIPA/EK-6200则含有SDS等强离子型去垢剂，缺口能力强，总蛋白得率高，在WB/SDS-PAGE等变性偏差应用中表现最佳；但强去垢剂会破坏蛋白间的配合，并可能导致蛋白活性失效，因此不适合Co-IP、Pull-down或酶活检测等对蛋白天然结构象有要求的实验。总体而言，适用场景各有近似，应根据实验需求选择合适的试剂。选择：保留蛋白互作 / 活性 → 本试剂；做总蛋白 SDS-PAGE / WB → RIPA / EK-6200。
本试剂的核心特点？
EasyLys-M 是一款高效、温和的哺乳动物细胞及组织全蛋白抽提试剂。本品采用优化的非变性去垢剂配方，旨在快速获取具有生物学活性的胞浆、胞核及膜蛋白。对标性能：本品在裂解效率与活性保留方面与 M-PER®（Thermo）及 CelLytic™ M（Sigma）具有高度一致性，可直接替代。应用广泛：提取的蛋白处于天然构象，直接兼容报告基因检测（荧光素酶、β-半乳糖苷酶）、蛋白激酶分析（PKA、PKC）、免疫检测（WB、ELISA）及免疫共沉淀（Co-IP）。
