ES-6220 EasyLys-M 哺乳动物组织/细胞活性蛋白提取试剂

【保存条件】

4℃保存，有效期12个月

【概述】

EasyLys-M 是一款高效、温和的哺乳动物细胞及组织全蛋白抽提试剂。本品采用优化的非变性去垢剂配方，旨在快速获取具有生物学活性的胞浆、胞核及膜蛋白。

对标性能：本品在裂解效率与活性保留方面与M-PER® (Thermo) 及CelLytic™ M (Sigma) 具有高度一致性，可直接替代。

应用广泛：提取的蛋白处于天然构象，直接兼容报告基因检测（荧光素酶、β-半乳糖苷酶）、蛋白激酶分析（PKA、PKC）、免疫检测（WB、ELISA）及免疫共沉淀（Co-IP）。

【产品特点】

兼容性强：抽提的可溶性蛋白处于非变性状态，可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程

作用温和：温和的除垢剂裂解，产生的抽提物直接与考马斯(Bradford)和BCA蛋白定量分析试剂或SDS-PAGE兼容

非变性：维持荧光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他报告基因的活性，与其他供应商的产品和冷冻/解冻方法一样好或更出色

操作简单：贴壁细胞直接在板上裂解或者在剥离和洗涤后悬浮于溶液中

【使用前准备】

1. 预冷：使用前确保 EasyLys-M试剂处于冰浴状态。

2. 添加抑制剂（核心）：临用前，向裂解液中加入适量蛋白酶抑制剂（如ES-8315）；若研究磷酸化蛋白，必须补加磷酸酶抑制剂（如ES-8317）。

【使用建议】

1. 样品前处理（具体用量参考表1）：

贴壁细胞：

①　弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。

②　加入预冷裂解液（如6孔板每孔加入100-200μL）。

悬浮细胞：

①　500×g离心5分钟收集细胞，弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。

②　按比例加入裂解液，通过手指弹击或轻微涡旋重悬细胞沉淀。

组织样本：

①　将组织剪成约2mm³的细碎块。

②　按每20mg组织（组织应去除各类结缔组织、血管等，无血液洁净状态）加入200-400μL裂解液的比例混合。

③　使用玻璃匀浆器或电动匀浆设备彻底匀浆，直至无肉眼可见组织块。

2. 裂解与离心：

①　孵育：将混合物置于冰上或4℃摇床振荡孵育5-10 min（组织样本可延长至 20 min）。

②　离心：4℃下，14000×g离心10 min。

③　收集：立即将含有活性蛋白的上清液转移至预冷的离心管中。

表1. 不同规格的细胞培养器皿中EasyLys-M 哺乳动物活性蛋白提取试剂的用量表。

【注意事项】

1. 蛋白产量低：若由于裂解不全或样本过载导致产量低，应适当增加裂解液比例或延长匀浆/冰上孵育时间。

2. 蛋白降解或失活：必须确保全程在冰上操作，并确认已足量添加未失效的蛋白酶/磷酸酶抑制剂。

3. 样本保存建议：提取后的蛋白应立即分装并冻存于-80℃，严禁反复冻融以防止蛋白变性或失活。

4. 安全防护与用途：操作时请佩戴实验服及手套；本品仅限科研使用，严禁用于临床诊断、食品或药品。