产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
EasyLys-I专为昆虫细胞及组织设计，采用温和的非变性去垢剂配方，能够在不破坏蛋白空间结构的前提下，快速、高效地抽提总蛋白。
广泛兼容：提取的蛋白可直接用于His/GST/Flag等标签蛋白纯化、WB、IP/Co-IP、ELISA，以及报告基因（Luciferase、β-gal）和蛋白激酶（PKA、PKC）的活性检测。
适用样本：完美适配常用的昆虫细胞系（如 Sf9, Sf21, High Five等）及其感染杆状病毒后的重组蛋白表达体系。
【使用前准备】
1. 预冷：使用前确保 EasyLys-I试剂处于冰浴状态。
2. 添加抑制剂（核心）：临用前，向裂解液中加入适量蛋白酶抑制剂（如ES-8315）；若研究磷酸化蛋白，必须补加磷酸酶抑制剂（如ES-8317）。
【操作方法】
1. 样品前处理（具体用量参考表1）：
贴壁细胞：
① 弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。
② 加入预冷裂解液（如6孔板每孔加入100-200μL），将培养板置于摇床上剧烈摇动，或手动敲击侧壁。通常5-6 min后细胞会逐渐脱落。
悬浮细胞：
① 500-800×g离心5min收集细胞，弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。
② 按比例加入裂解液（每0.5-2×107个细胞加入1mL裂解液），通过手指弹击或轻微涡旋重悬细胞沉淀。
2. 裂解与离心：
① 孵育：将混合物置于冰上或4℃摇床振荡孵育10-15 min。
② 离心：4℃下，14000×g离心10-15min。
③ 收集：立即将含有活性蛋白的上清液转移至预冷的离心管中。
表1. 不同规格的细胞培养器皿中EasyLys-I 昆虫活性蛋白提取试剂的用量表。
细胞孔板或培养皿 | 面积（cm2） | 提取试剂用量 |
100mm | 55 | 500-1000μL |
60mm | 21 | 200-400μL |
6-well plate | 9.5 | 100-200μL/孔 |
24-well plate | 1.9 | 25-50μL/孔 |
96-well plate | 0.32 | 5-10μL/孔 |
【注意事项】
1. 蛋白产量低：若由于裂解不全或样本过载导致产量低，应适当增加裂解液比例或延长匀浆/冰上孵育时间。
2. 蛋白降解或失活：必须确保全程在冰上操作，并确认已足量添加未失效的蛋白酶/磷酸酶抑制剂。
3. 样本保存建议：提取后的蛋白应立即分装并冻存于-80℃，严禁反复冻融以防止蛋白变性或失活。
4. 安全防护与用途：操作时请佩戴实验服及手套；本品仅限科研使用，严禁用于临床诊断、食品或药品。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml
应用领域
本产品适用于ES-6225、蛋白提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
提取得到蛋白如何保存？
提取的活性蛋白：① 当天做完酶活/报告基因检测最佳；② 短期 4℃（1 天内）；③ 长期 -80℃ 分装保存（每管单次用量），避免反复冻融（活性蛋白对冻融特别敏感）。
与 BCA / Bradford 的兼容性？
本试剂为非变性温和去垢剂，应与 BCA（EK-5001）兼容；如需用 Bradford 法测定，建议用去垢剂兼容版（EK-5004）以确保准确性。普通 Bradford 法可能受去垢剂干扰。
常见失败原因排查？
① 蛋白产量低：若由于裂解不全或样本过载导致产量低，应适当增加裂解液比例或延长匀浆/冰上孵育时间；② 蛋白降解或失活：必须确保全程在冰上操作，并确认已足量添加未失效的蛋白酶/磷酸酶抑制剂；③ 样本保存建议：提取后的蛋白应立即分装并冻存于 -80℃，严禁反复冻融以防止蛋白变性或失活。
与 EasyLys-B（细菌）/ EasyLys-M（哺乳）的选择？
EasyLys 系列三个版本针对不同样品优化：① EasyLys-B（ES-6215）：细菌专属（含针对 G+ / G- 的优化配方）；② EasyLys-M（ES-6220）：哺乳动物细胞/组织专属（对标 M-PER®/CelLytic™ M）；③ EasyLys-I（ES-6225）：昆虫细胞专属（对应 Sf9/Sf21/High Five 杆状病毒系统）。选择：按样品类型对应即可，不要交叉使用（去垢剂配方不同会影响裂解效率）。
可用于哪些下游应用？
His/GST/Flag 等标签蛋白纯化、WB、IP/Co-IP、ELISA、报告基因（Luciferase、β-gal）、蛋白激酶（PKA、PKC）活性检测。扩展应用：① 病毒颗粒感染后蛋白动力学研究；② 昆虫细胞抗体筛选平台；③ 病毒包装质量评估；④ 重组蛋白功能验证；⑤ 抗病毒药物筛选。
杆状病毒重组表达体系的应用？
适配常用的昆虫细胞系（Sf9、Sf21、High Five）及其感染杆状病毒后的重组蛋白表达体系。杆状病毒-昆虫细胞系统是真核重组蛋白生产的主流平台之一（特别是带翻译后修饰的复杂蛋白）。本试剂能高效裂解感染细胞并保留重组蛋白活性，直接兼容下游 His/GST/Flag 标签亲和纯化。
贴壁 Sf9 等昆虫细胞的特点？
昆虫细胞贴壁能力比哺乳动物细胞弱，剧烈摇动或手动敲击侧壁，通常 5–6 min 后细胞会逐渐脱落——这是利用昆虫细胞贴壁较松的特点，无需胰酶或刮刀即可在原皿内裂解。可避免胰酶降解蛋白且节省操作时间。
完整流程参数？
① 预冷：使用前确保 EasyLys-I 试剂处于冰浴状态；② 添加抑制剂（核心）：临用前向裂解液中加入适量蛋白酶抑制剂（如 ES-8135）；若研究磷酸化蛋白，必须补加磷酸酶抑制剂（如 ES-8136 或 ES-8137 一站式）；③ 贴壁细胞：弃培养基 + PBS 洗一遍去除血清蛋白 + 加预冷裂解液 + 培养板置于摇床上剧烈摇动或手动敲击侧壁，通常 5–6 min 后细胞会逐渐脱落；④ 悬浮细胞：500–800×g 离心 5 min 收集 + PBS 洗一遍 + 加裂解液 + 通过手指弹击或轻微涡旋重悬细胞沉淀；⑤ 裂解与离心：冰上或 4℃ 摇床振荡孵育 10–15 min → 4℃ 14,000×g 离心 10–15 min；⑥ 立即将含活性蛋白的上清液转移至预冷的离心管中。
起始量与裂解液用量？
完整培养器皿对照表：① 100 mm 培养皿（55 cm²）：500–1000 µL；② 60 mm 培养皿（21 cm²）：200–400 µL；③ 6 孔板（9.5 cm²/孔）：100–200 µL/孔；④ 24 孔板（1.9 cm²/孔）：25–50 µL/孔；⑤ 96 孔板（0.32 cm²/孔）：5–10 µL/孔；⑥ 悬浮细胞：每 0.5–2×10⁷ 个细胞 + 1 mL 裂解液。
本试剂的核心特点？
EasyLys-I 专为昆虫细胞及组织设计，采用温和的非变性去垢剂配方，能够在不破坏蛋白空间结构的前提下，快速、高效地抽提总蛋白。广泛兼容：提取的蛋白可直接用于 His/GST/Flag 等标签蛋白纯化、WB、IP/Co-IP、ELISA，以及报告基因（Luciferase、β-gal）和蛋白激酶（PKA、PKC）的活性检测。适用样本：完美适配常用的昆虫细胞系（如 Sf9、Sf21、High Five 等）及其感染杆状病毒后的重组蛋白表达体系。
