ES-6225 EasyLys-I 昆虫活性蛋白提取试剂

【保存条件】

4℃保存，有效期12个月

【概述】

EasyLys-I专为昆虫细胞及组织设计，采用温和的非变性去垢剂配方，能够在不破坏蛋白空间结构的前提下，快速、高效地抽提总蛋白。

广泛兼容：提取的蛋白可直接用于His/GST/Flag等标签蛋白纯化、WB、IP/Co-IP、ELISA，以及报告基因（Luciferase、β-gal）和蛋白激酶（PKA、PKC）的活性检测。

适用样本：完美适配常用的昆虫细胞系（如 Sf9, Sf21, High Five等）及其感染杆状病毒后的重组蛋白表达体系。

【使用前准备】

1. 预冷：使用前确保 EasyLys-I试剂处于冰浴状态。

2. 添加抑制剂（核心）：临用前，向裂解液中加入适量蛋白酶抑制剂（如ES-8315）；若研究磷酸化蛋白，必须补加磷酸酶抑制剂（如ES-8317）。

【操作方法】

1. 样品前处理（具体用量参考表1）：

贴壁细胞：

①　弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。

②　加入预冷裂解液（如6孔板每孔加入100-200μL），将培养板置于摇床上剧烈摇动，或手动敲击侧壁。通常5-6 min后细胞会逐渐脱落。

悬浮细胞：

①　500-800×g离心5min收集细胞，弃去培养基，用PBS洗涤一遍以去除血清蛋白。

②　按比例加入裂解液（每0.5-2×10⁷个细胞加入1mL裂解液），通过手指弹击或轻微涡旋重悬细胞沉淀。

2. 裂解与离心：

①　孵育：将混合物置于冰上或4℃摇床振荡孵育10-15 min。

②　离心：4℃下，14000×g离心10-15min。

③　收集：立即将含有活性蛋白的上清液转移至预冷的离心管中。

表1. 不同规格的细胞培养器皿中EasyLys-I 昆虫活性蛋白提取试剂的用量表。

【注意事项】

1. 蛋白产量低：若由于裂解不全或样本过载导致产量低，应适当增加裂解液比例或延长匀浆/冰上孵育时间。

2. 蛋白降解或失活：必须确保全程在冰上操作，并确认已足量添加未失效的蛋白酶/磷酸酶抑制剂。

3. 样本保存建议：提取后的蛋白应立即分装并冻存于-80℃，严禁反复冻融以防止蛋白变性或失活。

4. 安全防护与用途：操作时请佩戴实验服及手套；本品仅限科研使用，严禁用于临床诊断、食品或药品。