产品描述
【保存条件】
4℃保存，有效期12个月
【概述】
本试剂盒在常规 Bradford 法基础上进行了重大改良。通过优化显色体系，成功克服了去垢剂对考马斯亮蓝G-250显色的干扰。
核心优势：与常规Bradford法相比，本品可兼容1% SDS、1% Triton X-100、1% Tween 20/80等常见去垢剂；与BCA法相比，本品能兼容高浓度还原剂（如DTT），且显色立即完成，检测速度极快。
适用场景：尤其适用于同时含有一定浓度去垢剂和还原剂的复杂蛋白样本。
灵敏度高：最小蛋白检测量可达0.5µg，线性检测范围为0.1-1.5mg/mL。
【使用方法】
1. 试剂准备
1×G250工作液配制：取1份5× G250染色液，加入4份去离子水，混匀即可。若发现沉淀，请在使用前过滤或取上清。如取5mL 5× G250染色液，加入20mL去离子水混匀即为1×工作液。
2. 蛋白标准曲线的配制
① 稀释液选择：建议使用与样品相同的缓冲液稀释标准品。若不含干扰物质，也可用0.9% NaCl或PBS。
② 配制方案：按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/mL蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀（推荐在微量离心管中操作）：
编号 | 稀释液体积 | 标准品体积 | 最终浓度 |
A | 70µL | 5mg/mL BSA 30µL | 1.5mg/mL |
B | 30µL | 从A管取60µL | 1mg/mL |
C | 20µL | 从B管取60µL | 0.75mg/mL |
D | 30µL | 从C管取60µL | 0.5mg/mL |
E | 60µL | 从D管取60µL | 0.25mg/mL |
F | 60µL | 从E管取60µL | 0.125mg/mL |
G | 60µL | 0µL | 0mg/mL |
2. 蛋白浓度测定
① 加样：取5µL标准品或待测样品加至96孔板中。
注：若样品不足5µL，请用稀释液补足，并在计算浓度时乘以稀释倍数。
② 显色：每孔加入250µL 1×G250染色液。
③ 测定：轻轻震荡混匀，立即使用酶标仪测定A595吸光度（或560-610 nm间其他波长）
④ 计算：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据曲线方程计算样品浓度。
【注意事项】
1. 显色速度：本试剂显色极快且立即稳定，建议加样后尽快测定，以获得最佳准确度。
2. 去垢剂上限：本品可完美兼容1% SDS、1% Triton X-100、1% Tween 20/80等，若样品去垢剂浓度超过2%，建议进行预稀释后再测定。
3. 清洗风险：G250会染色塑料和石英，若使用比色皿，实验后需用酒精洗涤。使用96孔板可避免清洗麻烦。
4. 安全防护与用途：操作时请穿实验服并佩戴手套，本品仅限科研使用。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 1000T、5000T
应用领域
本产品适用于EK-5004、蛋白定量、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4℃保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
4℃ 保存，有效期 12 个月。
常见问题排查？
① 显色速度：本试剂显色极快且立即稳定，建议加样后尽快测定，以获得最佳准确度；② 去垢剂上限 2%：超量先稀释；③ 清洗风险：G250 会染色塑料和石英，实验后比色皿需用酒精洗涤，使用 96 孔板可避免清洗。
可用于哪些应用场景？
适用：① WB 上样液浓度定量（含 SDS + β-ME）；② 复杂裂解液浓度测定（RIPA + 抑制剂等）；③ 质谱样品前定量；④ FFPE 蛋白定量（EK-5012 提取液）；⑤ GPCR 提取后定量（EK-6020 含胶束样品）；⑥ 细胞分馏组分定量（EK-6005/6010/6100/6105）；⑦ 比色皿读数应用（如 NanoDrop 分光光度计 / 比色皿酶标仪）。
去垢剂上限？
去垢剂上限：本品可完美兼容 1% SDS、1% Triton X-100、1% Tween 20/80 等，若样品去垢剂浓度超过 2%，建议进行预稀释后再测定。——超量样品先稀释 2–10 倍，使去垢剂浓度降至 ≤1% 再测定，按稀释倍数反推浓度。
标准曲线配制？
从 5 mg/mL BSA 母液稀释为 0–1.5 mg/mL 7 个浓度梯度（A–G），每孔 5 µL。
完整测定流程（与 EK-5002 类似）？
① 加样：96 孔板加 5 µL 标准品或样品（不足 5 µL 补足）；② 显色：每孔 + 250 µL 1× G250 染色液；③ 测定：轻轻震荡混匀，立即使用酶标仪测定 A595 吸光度（或 560–610 nm）；④ 计算：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据曲线方程计算样品浓度。
1× 工作液配制？
1×G250 工作液配制：取 1 份 5× G250 染色液 + 4 份去离子水，混匀即可。若发现沉淀，请在使用前过滤或取上清。示例：5 mL 5× G250 + 20 mL 去离子水 = 25 mL 1× 工作液。
核心应用场景？
尤其适用于同时含有一定浓度去垢剂和还原剂的复杂蛋白样本。典型场景：① RIPA/IP裂解液等常见蛋白提取；② EK-5012 FFPE 蛋白提取——含 SDS + β-ME 的极复杂样品；③ 细胞分馏后核蛋白（EK-6105）——可能含 NP-40 + DTT；④ GPCR 提取（EK-6020）——含去垢剂胶束 + 抑制剂；⑤ 质谱前处理——SP3 / FASP 后含 SDS / DTT 的样品。
本试剂盒的核心特点？
本试剂盒在常规 Bradford 法基础上进行了重大改良。通过优化显色体系，成功克服了去垢剂对考马斯亮蓝 G-250 显色的干扰。核心优势：与常规 Bradford 法相比，本品可兼容 1% SDS、1% Triton X-100、1% Tween 20/80 等常见去垢剂；与 BCA 法相比，本品能兼容高浓度还原剂（如 DTT），且显色立即完成，检测速度极快。适用场景：尤其适用于同时含有一定浓度去垢剂和还原剂的复杂蛋白样本。灵敏度高：最小蛋白检测量可达 0.5 µg，线性检测范围为 0.1–1.5 mg/mL。
