EK-5004 Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）

【保存条件】

4℃保存，有效期12个月

【概述】

本试剂盒在常规 Bradford 法基础上进行了重大改良。通过优化显色体系，成功克服了去垢剂对考马斯亮蓝G-250显色的干扰。

核心优势：与常规Bradford法相比，本品可兼容1% SDS、1% Triton X-100、1% Tween 20/80等常见去垢剂；与BCA法相比，本品能兼容高浓度还原剂（如DTT），且显色立即完成，检测速度极快。

适用场景：尤其适用于同时含有一定浓度去垢剂和还原剂的复杂蛋白样本。

灵敏度高：最小蛋白检测量可达0.5µg，线性检测范围为0.1-1.5mg/mL。

【使用方法】

1. 试剂准备

1×G250工作液配制：取1份5× G250染色液，加入4份去离子水，混匀即可。若发现沉淀，请在使用前过滤或取上清。如取5mL 5× G250染色液，加入20mL去离子水混匀即为1×工作液。

2. 蛋白标准曲线的配制

①　稀释液选择：建议使用与样品相同的缓冲液稀释标准品。若不含干扰物质，也可用0.9% NaCl或PBS。

②　配制方案：按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/mL蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀（推荐在微量离心管中操作）：

2. 蛋白浓度测定

①　加样：取5µL标准品或待测样品加至96孔板中。

注：若样品不足5µL，请用稀释液补足，并在计算浓度时乘以稀释倍数。

②　显色：每孔加入250µL 1×G250染色液。

③　测定：轻轻震荡混匀，立即使用酶标仪测定A595吸光度（或560-610 nm间其他波长）

④　计算：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据曲线方程计算样品浓度。

【注意事项】

1. 显色速度：本试剂显色极快且立即稳定，建议加样后尽快测定，以获得最佳准确度。

2. 去垢剂上限：本品可完美兼容1% SDS、1% Triton X-100、1% Tween 20/80等，若样品去垢剂浓度超过2%，建议进行预稀释后再测定。

3. 清洗风险：G250会染色塑料和石英，若使用比色皿，实验后需用酒精洗涤。使用96孔板可避免清洗麻烦。

4. 安全防护与用途：操作时请穿实验服并佩戴手套，本品仅限科研使用。