ES-8318 Tris抗原修复液（10×,pH 10.0）

【保存条件】

4ºC保存,有效期12个月

【概述】

本产品是以Tris为基础的高碱性抗原修复储备液，专为解决醛类固定导致的蛋白交联问题而设计。

机制：通过高pH环境（1.0×工作液pH约为10.0）和热效应，彻底打破甲醛形成的“亚甲基桥”交联，充分暴露由于固定而被遮蔽的抗原表位。

应用：适用于石蜡切片、冰冻切片等样品在IHC、IF等实验前的抗原修复。

强效特性：尤其适用于某些在常规 pH 6.0（柠檬酸盐）或pH 9.0（Tris-EDTA）下修复信号微弱的特殊抗体。

【实验前准备】

1. 工作液配制 (1×) ：使用去离子水或蒸馏水将10×储备液稀释10倍。
示例：取10 mL 10×母液加入90 mL去离子水中，混合均匀即得1×工作液。

2. 预热：建议在使用前将1×工作液预热至95-100°C，以确保修复的一致性。

【操作方法】

1. 样本预处理
石蜡切片：二甲苯3次，每次3-5min→无水乙醇2次，每次3-5min→ 95％乙醇1次，3-5min→ 90%乙醇1次，3-5min→ 75％乙醇1次，3-5min→蒸馏水洗2次，每次3-5min，确保切片彻底水化。
冰冻切片：用免疫染色洗涤液（如PBS）浸洗5 min。

2. 热修复步骤（核心步骤）

①　将预处理后的切片浸入已预热至95–100°C的1×修复液中。

②　加热维持：持续加热10–20 min（标准推荐时长为15min）。
水浴锅：温度最均匀，适合对温度敏感的组织。
微波炉：加热速度快，但必须防止暴沸导致切片干涸或脱落。建议使用中低功率。
压力锅：修复强度最高，适合极难暴露的抗原，但需严格控制时间。

3. 冷却与后处理（防脱片关键）

①　自然冷却：修复结束后，将容器取出，在室温下自然冷却20–30 min至室温。
警告：严禁直接放入冷水中骤冷，否则极易导致组织脱片。

②　洗涤：用免疫染色洗涤液（如PBS）洗涤2–3次，每次3–5 min。

③　后续实验：直接进入封闭或内源性酶阻断步骤。

【注意事项】

1. 参数摸索：最佳修复时间与组织类型、固定时长、目标蛋白丰度密切相关。建议初次实验设置10/15/20 min三个梯度。

2. 液体量充足：加热过程中确保修复液完全覆盖组织。微波加热过程中若水分蒸发过多，应及时补充预热的蒸馏水。

3. 防止脱片：pH 10.0 属于强碱性环境，对切片黏附力要求较高。建议使用防脱玻片（如多聚赖氨酸处理或带正电荷玻片）。

4. 安全防护：本品pH值较高，具有一定的刺激性。操作时请佩戴实验服、乳胶手套。