产品描述
【保存条件】
4ºC保存,有效期12个月
【概述】
本产品是以Tris为基础的高碱性抗原修复储备液，专为解决醛类固定导致的蛋白交联问题而设计。
机制：通过高pH环境（1.0×工作液pH约为10.0）和热效应，彻底打破甲醛形成的“亚甲基桥”交联，充分暴露由于固定而被遮蔽的抗原表位。
应用：适用于石蜡切片、冰冻切片等样品在IHC、IF等实验前的抗原修复。
强效特性：尤其适用于某些在常规 pH 6.0（柠檬酸盐）或pH 9.0（Tris-EDTA）下修复信号微弱的特殊抗体。
【实验前准备】
1. 工作液配制 (1×) ：使用去离子水或蒸馏水将10×储备液稀释10倍。
示例：取10 mL 10×母液加入90 mL去离子水中，混合均匀即得1×工作液。
2. 预热：建议在使用前将1×工作液预热至95-100°C，以确保修复的一致性。
【操作方法】
1. 样本预处理
石蜡切片：二甲苯3次，每次3-5min→无水乙醇2次，每次3-5min→ 95％乙醇1次，3-5min→ 90%乙醇1次，3-5min→ 75％乙醇1次，3-5min→蒸馏水洗2次，每次3-5min，确保切片彻底水化。
冰冻切片：用免疫染色洗涤液（如PBS）浸洗5 min。
2. 热修复步骤（核心步骤）
① 将预处理后的切片浸入已预热至95–100°C的1×修复液中。
② 加热维持：持续加热10–20 min（标准推荐时长为15min）。
水浴锅：温度最均匀，适合对温度敏感的组织。
微波炉：加热速度快，但必须防止暴沸导致切片干涸或脱落。建议使用中低功率。
压力锅：修复强度最高，适合极难暴露的抗原，但需严格控制时间。
3. 冷却与后处理（防脱片关键）
① 自然冷却：修复结束后，将容器取出，在室温下自然冷却20–30 min至室温。
警告：严禁直接放入冷水中骤冷，否则极易导致组织脱片。
② 洗涤：用免疫染色洗涤液（如PBS）洗涤2–3次，每次3–5 min。
③ 后续实验：直接进入封闭或内源性酶阻断步骤。
【注意事项】
1. 参数摸索：最佳修复时间与组织类型、固定时长、目标蛋白丰度密切相关。建议初次实验设置10/15/20 min三个梯度。
2. 液体量充足：加热过程中确保修复液完全覆盖组织。微波加热过程中若水分蒸发过多，应及时补充预热的蒸馏水。
3. 防止脱片：pH 10.0 属于强碱性环境，对切片黏附力要求较高。建议使用防脱玻片（如多聚赖氨酸处理或带正电荷玻片）。
4. 安全防护：本品pH值较高，具有一定的刺激性。操作时请佩戴实验服、乳胶手套。
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 100ml、500ml
应用领域
本产品适用于ES-8318、抗原修复、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
4ºC保存
常见问题 (FAQ)
试剂如何保存？
储液：4℃12个月；工作液：稀释后 4℃ 1–3 个月。避免长期高温（pH 漂移）、阳光直射、反复振荡。
可以用于哪些下游应用？
应用：① IHC 抗原修复（最主要）；② IF 切片抗原修复；③ 多重 IHC（mIHC）；④ 数字病理 AI 训练样品；⑤ 部分 ISH（原位杂交）前处理。
常见失败原因？
① 修复不彻底 — 温度 / 时间不足、pH 选错（依抗体）；② 切片脱片 — 修复时间过长、温度过高（>120℃）、玻片处理不当；③ 背景高 — 修复液污染 / pH 漂移；④ IHC 信号弱 — 修复后未充分洗涤；切片在冷却前移动。
本品如何稀释（如为 10×）？
如果是 1× 即用工作液 — 直接使用。如果是浓缩储液（10×）— 用蒸馏水按 1:10 稀释为 1× 工作液后使用。
低 pH（如 pH 6.0）vs. 高 pH（如 pH 9.0）选择？
低 pH 柠檬酸缓冲液（pH 6.0）— 温和，适合大多数胞质抗原，组织形态保留好；高 pH Tris-EDTA（pH 9.0）— 强力，适合核蛋白、磷酸化蛋白等难修复抗原，但可能略影响形态。新抗体推荐两种 pH 都试。
抗原修复时间过长 / 过短？
时间过长 — 切片脱片，组织形态破坏；时间过短 — 抗原暴露不完全，IHC 信号弱。新抗体首次实验建议做时间梯度（10、20、30 分钟）确定最佳条件。
加热方式选择？
微波 — 快速便捷（10–15 分钟），但温度控制差，多张切片可能不均；高压锅 — 温度均匀（121℃ 10 分钟），适合批量切片；水浴锅 — 温度可控（95℃ 30 分钟）但耗时较长；电饭锅 — 简易替代（95–100℃ 30 分钟）。
本品（Tris pH 10.0）的特点？
Tris pH 10.0 适用于：难修复抗原（如核内蛋白、磷酸化蛋白），强碱性条件解开严重交联，更广泛适用
标准操作流程？
典型流程：① 切片脱蜡水化；② 加入抗原修复液浸没切片；③ 微波 / 高压锅加热到 95–100℃ 持续 10–30 分钟；④ 自然冷却到室温（关键 — 让抗原构象稳定）；⑤ PBS 洗涤；⑥ 后续 IHC 步骤。
抗原修复液的工作原理？
抗原修复（Antigen Retrieval）用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）切片的 IHC 抗原暴露。机制 — 福尔马林固定时与赖氨酸 ε-氨基与精氨酸胍基形成共价亚甲基桥（methylene bridge），导致蛋白-蛋白与蛋白-核酸交联，masked 抗原；高温 + 缓冲液逆转交联，恢复抗原的 IHC 可识别构象。本品为 Tris pH 10.0 抗原修复液。
