ES-8342 Tris-EDTA抗原修复液（100×,pH 9.0）

【保存条件】

4ºC保存，有效期12个月

【概述】

本产品是以 Tris-EDTA 为基础的高效抗原修复储备液（100×），专为石蜡切片、冰冻切片在免疫组化（IHC）或免疫荧光（IF）实验前的表位暴露而设计。

双重机制：结合了高pH（碱性环境）的热效应与EDTA的螯合作用。它能有效打破醛类固定引起的蛋白交联，同时螯合屏蔽抗原表位的金属离子，协同增强修复效果。

应用范围：广泛适用于多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定的组织样本。

性能特点：相比于柠檬酸钠（pH 6.0），Tris-EDTA (pH 9.0) 通常能提供更强的染色强度，是解决弱信号抗体、疑难抗原修复的首选方案。

【实验前准备】

1. 工作液配制 (1×) ：使用去离子水或蒸馏水将100×储备液稀释100倍。
示例：取10 mL 100×母液加入990 mL去离子水中，混合均匀即得1×工作液。

2. 预热：建议在使用前将1×工作液预热至95-100°C，以确保修复的一致性。

【操作方法】

1. 样本预处理
石蜡切片：二甲苯3次，每次3-5min→无水乙醇2次，每次3-5min→ 95％乙醇1次，3-5min→ 90%乙醇1次，3-5min→ 75％乙醇1次，3-5min→蒸馏水洗2次，每次3-5min，确保切片彻底水化。
冰冻切片：用免疫染色洗涤液（如PBS）浸洗5 min。

2. 热修复步骤（核心步骤）

①　将预处理后的切片浸入已预热至95–100°C的1×修复液中。

②　加热维持：持续加热10–20 min（标准推荐时长为15min）。
水浴锅：温度最均匀，适合对温度敏感的组织。
微波炉：加热速度快，但必须防止暴沸导致切片干涸或脱落。建议使用中低功率。
压力锅：修复强度最高，适合极难暴露的抗原，但需严格控制时间。

3. 冷却与后处理（防脱片关键）

①　自然冷却：修复结束后，将容器取出，在室温下自然冷却20–30 min至室温。
警告：严禁直接放入冷水中骤冷，否则极易导致组织脱片。

②　洗涤：用免疫染色洗涤液（如PBS）洗涤2–3次，每次3–5 min。

③　后续实验：直接进入封闭或内源性酶阻断步骤。

【注意事项】

1. 最佳参数摸索：抗原修复受固定时长、组织厚度、抗体特性等多种因素影响。若信号过弱，可适当延长修复时间（至20 min）；若出现背景过高，可尝试缩短时间。

2. 结晶说明：高浓度储备液在低温下可能析出白色结晶，使用前请置于37ºC水浴溶解并摇匀，不影响使用效果。

3. EDTA的特殊性：某些金属依赖型酶学实验或特定抗体可能受EDTA影响，请根据抗体说明书选择。

4. 防止脱片：pH 9.0环境下，组织较易从玻片脱落。建议使用高粘附性防脱玻片。

5. 冷却严禁骤冷：修复后的组织处于物理性质脆弱期，突然的温差会导致组织结构受损或掉片。

6. 安全防护：操作时请按实验室规范佩戴实验服与一次性手套。