Q: OD260/OD280 比值偏低（<1.8）说明什么？

RNA 的理想 OD260/OD280 应 1.8–2.1（比值为 2.0 是高质量 RNA 的标志）。比值低于 1.8 通常提示：① 蛋白质或苯酚污染（前次 Trizol 抽提相界面带过来）；② 测量缓冲液 pH 影响——同一 RNA 在 10 mM Tris pH 7.5 中测得 1.8–2.1，在水中测可能仅 1.5–1.9，但这并不代表 RNA 不纯；③ RNA 浓度过低（<5 ng/µL）。RNA 浓度计算公式：终浓度（ng/µL）= OD260 × 稀释倍数 × 40。

Q: 洗脱液最小体积是多少？得率如何？

说明书推荐用 50–100 µL RNase-free Water 洗脱，最低不少于 30 µL（低于 30 µL 会显著降低洗脱效率）。洗脱步骤：将水加在膜正中央，盖盖室温静置 3–5 min，再 ≥12,000×g（≥13,000 rpm）离心 3 min 收集 RNA。如需高浓度 RNA，可减小洗脱体积至 30–50 µL；如需更高总得率，可重复洗脱一次后合并。洗脱后的 RNA 应立即置于 -80℃ 储存。

Q: 起始样品体积应该是多少？

说明书推荐用无酶水将样品调整到 100 µL 体积，加入 350 µL Buffer RLT 充分混匀，再加 250 µL 无水乙醇（96–100%）反复吹打混匀（不要离心，立即上柱）。若样品体积更大，按比例同步加大 Buffer RLT 与乙醇用量，再分批上柱（吸附柱单次上柱上限 700 µL）。可疑细胞残留时可涡旋后静置 1 min 裂解；样品有杂质时先离心收集上清。

Q: 纯化能否同时去除基因组 DNA 污染？

本试剂盒在结合条件下硅胶膜会同时结合 DNA 与 RNA，不能单独去除 DNA。若需去除基因组 DNA，建议在结合前用 RNase-free DNase I 在管内酶切（37℃，15–30 min），再上柱纯化；柱上 DNase 处理也可（部分协议支持）。本试剂盒未包含 DNase I，需用户自备。

Q: 纯化后的 RNA 完整性能否保证？

本试剂盒的硅胶膜柱对 RNA 选择性强、操作时间短，可有效保护 RNA 不被降解。说明书明确：RNA 在 Buffer RLT 中不会被 RNase 降解（提取过程中），但提取后的处理过程必须使用无 RNase 的离心管或玻璃器皿。关键操作：全程戴干净手套、使用 RNase-free 吸头与 1.5 mL 离心管、洗脱液加在膜正中央、室温静置 3–5 min 再离心。

Q: 本试剂盒的核心用途是什么？

本试剂盒采用 RNase-free 吸附柱 + Buffer RLT 裂解结合系统，用于从液体样本中快速回收 RNA，回收的 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly-A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析及分子克隆等下游实验。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

Question 1

纯化后的 RNA 应如何储存？

Accepted Answer

短期使用：-20℃ 储存（1–2 周内）；长期：-80℃ 储存。建议在 RNase-free Water 中分装保存（每管单次用量），避免反复冻融。储存样品再用前需短时离心收集到管底，并于冰上融化。

Question 2

使用本试剂盒时有哪些容易踩的坑？

Accepted Answer

说明书强调的关键点：① Buffer RLT 储存时可能形成沉淀，出现沉淀请 37℃ 加热溶解后室温使用；② Buffer RPE 是浓缩液，第一次使用前必须加入 4 倍体积无水乙醇（96–100%） 稀释成工作液；③ RNase-free Water 不含抑菌因子，开瓶后建议分装保存以减少污染；④ 干燥柱膜步骤需 ~13,400×g 离心 3 min，再开盖在无酶环境中静置 5–10 min 彻底晾干乙醇，否则会影响下游实验；⑤ 全程戴干净手套，使用无 RNase 离心管与吸头。

Question 3

纯化后的 RNA 可以用于哪些下游应用？

Accepted Answer

适用于所有标准 RNA 下游分析：cDNA 合成与 qRT-PCR、Northern blot、表达谱芯片、RNA-seq 文库构建、Poly-A 筛选、in vitro 翻译、引物延伸、RNase 保护分析、Ribosome profiling、分子克隆等。处理后的 RNA 已去除盐与小分子，可直接进入酶反应而无需额外脱盐。

Question 4

可以处理 RNAex ZOL/Trizol 抽提的 RNA 吗？

Accepted Answer

可以。RNAex ZOL/Trizol 抽提的水相含有大量盐与少量苯酚残留，OD260/OD230 通常偏低（<1.5）。本试剂盒能有效去除这些残留，提升 OD260/OD230 比值，使 RNA 适合下游 qPCR、芯片、二代测序等高灵敏度应用。处理时按 Q4 流程：先调整样品体积到 100 µL，再加 350 µL Buffer RLT 与 250 µL 无水乙醇上柱。

Question 5

OD260/OD280 比值偏低（<1.8）说明什么？

Accepted Answer

RNA 的理想 OD260/OD280 应 1.8–2.1（比值为 2.0 是高质量 RNA 的标志）。比值低于 1.8 通常提示：① 蛋白质或苯酚污染（前次 Trizol 抽提相界面带过来）；② 测量缓冲液 pH 影响——同一 RNA 在 10 mM Tris pH 7.5 中测得 1.8–2.1，在水中测可能仅 1.5–1.9，但这并不代表 RNA 不纯；③ RNA 浓度过低（<5 ng/µL）。RNA 浓度计算公式：终浓度（ng/µL）= OD260 × 稀释倍数 × 40。

Question 6

洗脱液最小体积是多少？得率如何？

Accepted Answer

说明书推荐用 50–100 µL RNase-free Water 洗脱，最低不少于 30 µL（低于 30 µL 会显著降低洗脱效率）。洗脱步骤：将水加在膜正中央，盖盖室温静置 3–5 min，再 ≥12,000×g（≥13,000 rpm）离心 3 min 收集 RNA。如需高浓度 RNA，可减小洗脱体积至 30–50 µL；如需更高总得率，可重复洗脱一次后合并。洗脱后的 RNA 应立即置于 -80℃ 储存。

Question 7

起始样品体积应该是多少？

Accepted Answer

说明书推荐用无酶水将样品调整到 100 µL 体积，加入 350 µL Buffer RLT 充分混匀，再加 250 µL 无水乙醇（96–100%）反复吹打混匀（不要离心，立即上柱）。若样品体积更大，按比例同步加大 Buffer RLT 与乙醇用量，再分批上柱（吸附柱单次上柱上限 700 µL）。可疑细胞残留时可涡旋后静置 1 min 裂解；样品有杂质时先离心收集上清。

Question 8

纯化能否同时去除基因组 DNA 污染？

Accepted Answer

本试剂盒在结合条件下硅胶膜会同时结合 DNA 与 RNA，不能单独去除 DNA。若需去除基因组 DNA，建议在结合前用 RNase-free DNase I 在管内酶切（37℃，15–30 min），再上柱纯化；柱上 DNase 处理也可（部分协议支持）。本试剂盒未包含 DNase I，需用户自备。

Question 9

纯化后的 RNA 完整性能否保证？

Accepted Answer

本试剂盒的硅胶膜柱对 RNA 选择性强、操作时间短，可有效保护 RNA 不被降解。说明书明确：RNA 在 Buffer RLT 中不会被 RNase 降解（提取过程中），但提取后的处理过程必须使用无 RNase 的离心管或玻璃器皿。关键操作：全程戴干净手套、使用 RNase-free 吸头与 1.5 mL 离心管、洗脱液加在膜正中央、室温静置 3–5 min 再离心。

Question 10

本试剂盒的核心用途是什么？

Accepted Answer

本试剂盒采用 RNase-free 吸附柱 + Buffer RLT 裂解结合系统，用于从液体样本中快速回收 RNA，回收的 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly-A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析及分子克隆等下游实验。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

EK-1103 FastPure RNA纯化回收试剂盒