产品描述
产品介绍
本试剂盒可以快速地从从液体样本中回收RNA，回收的RNA可用于RT-PCR、qPCR、cDNA合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品级化妆品等用途。
存储条件
室温干燥保存可至少稳定12个月。
需要额外准备的材料
无水乙醇（96%-100%）
无RNase酶的1.5ml离心管
无RNase酶的枪头
干净的手套
高速离心机
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
Buffer RLT在储存时可能会形成沉淀， 如果有沉淀出现，请37℃加热溶解后室温使用。
Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。
RNase-free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。
RNA在Buffer RLT中时不会被RNase降解（提取过程中）。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的无酶离心管或玻璃器皿。
操作步骤：
1. 取100μL样品（不足部分用RNase-free Water补足），加入350 μL Buffer RLT充分混匀。
样品体积较大时，按1:3.5比例加入Buffer RLT。若含细胞，需室温静置1-2分钟以充分裂解；若有明显杂质，需12000×g离心取上清使用。
2. 往混匀的样品加入250μL无水乙醇（96-100%）混匀，并通过反复吹打混匀。不要离心，并立即进行下一步。
若样品体积较大，则等比例加入无水乙醇。
3. 将步骤2混匀后的溶液转移入RNase-free吸附柱中并套上2ml收集管，≥8000×g离心30s，弃废液。
吸附柱最大上柱量为700μL，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2ml收集管中。
4. 向吸附柱中加入500μL Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE是否按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g离心30s，弃废液。
5. 重复步骤4一次。
6. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中, 以最大转速(~13,400×g)离心3min干燥柱膜。
7. 将吸附柱套入新的无酶1.5ml 离心管管中，并置于无酶的环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。
若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。
8. 向吸附柱膜正中央加入50-100μL RNase-free Water，盖上盖子室温静置3-5 min。后置于离心机中 ≥12,000×g离心3min得到RNA溶液。
RNA洗脱体积不应少于30μL，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-80℃储存。
RNA纯度及浓度检测
纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10 mM Tris pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free ddH2O稀释n 倍，用RNase-free ddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：
终浓度（ng/μL）= (OD260)×(稀释倍数n)×40
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50T、100T
应用领域
本产品适用于EK-1103、RNA提取、生物科研试剂、ECOTOP SCIENTIFIC等研究领域。ECOTOP SCIENTIFIC（广州亿涛生物科技有限公司）提供高品质生物科研试剂，服务科研院所与生物医药企业。
存储条件
室温干燥保存
常见问题 (FAQ)
纯化后的 RNA 应如何储存？
短期使用：-20℃ 储存（1–2 周内）；长期：-80℃ 储存。建议在 RNase-free Water 中分装保存（每管单次用量），避免反复冻融。储存样品再用前需短时离心收集到管底，并于冰上融化。
使用本试剂盒时有哪些容易踩的坑？
说明书强调的关键点：① Buffer RLT 储存时可能形成沉淀，出现沉淀请 37℃ 加热溶解后室温使用；② Buffer RPE 是浓缩液，第一次使用前必须加入 4 倍体积无水乙醇（96–100%） 稀释成工作液；③ RNase-free Water 不含抑菌因子，开瓶后建议分装保存以减少污染；④ 干燥柱膜步骤需 ~13,400×g 离心 3 min，再开盖在无酶环境中静置 5–10 min 彻底晾干乙醇，否则会影响下游实验；⑤ 全程戴干净手套，使用无 RNase 离心管与吸头。
纯化后的 RNA 可以用于哪些下游应用？
适用于所有标准 RNA 下游分析：cDNA 合成与 qRT-PCR、Northern blot、表达谱芯片、RNA-seq 文库构建、Poly-A 筛选、in vitro 翻译、引物延伸、RNase 保护分析、Ribosome profiling、分子克隆等。处理后的 RNA 已去除盐与小分子，可直接进入酶反应而无需额外脱盐。
可以处理 RNAex ZOL/Trizol 抽提的 RNA 吗？
可以。RNAex ZOL/Trizol 抽提的水相含有大量盐与少量苯酚残留，OD260/OD230 通常偏低（<1.5）。本试剂盒能有效去除这些残留，提升 OD260/OD230 比值，使 RNA 适合下游 qPCR、芯片、二代测序等高灵敏度应用。处理时按 Q4 流程：先调整样品体积到 100 µL，再加 350 µL Buffer RLT 与 250 µL 无水乙醇上柱。
OD260/OD280 比值偏低（<1.8）说明什么？
RNA 的理想 OD260/OD280 应 1.8–2.1（比值为 2.0 是高质量 RNA 的标志）。比值低于 1.8 通常提示：① 蛋白质或苯酚污染（前次 Trizol 抽提相界面带过来）；② 测量缓冲液 pH 影响——同一 RNA 在 10 mM Tris pH 7.5 中测得 1.8–2.1，在水中测可能仅 1.5–1.9，但这并不代表 RNA 不纯；③ RNA 浓度过低（<5 ng/µL）。RNA 浓度计算公式：终浓度（ng/µL）= OD260 × 稀释倍数 × 40。
洗脱液最小体积是多少？得率如何？
说明书推荐用 50–100 µL RNase-free Water 洗脱，最低不少于 30 µL（低于 30 µL 会显著降低洗脱效率）。洗脱步骤：将水加在膜正中央，盖盖室温静置 3–5 min，再 ≥12,000×g（≥13,000 rpm）离心 3 min 收集 RNA。如需高浓度 RNA，可减小洗脱体积至 30–50 µL；如需更高总得率，可重复洗脱一次后合并。洗脱后的 RNA 应立即置于 -80℃ 储存。
起始样品体积应该是多少？
说明书推荐用无酶水将样品调整到 100 µL 体积，加入 350 µL Buffer RLT 充分混匀，再加 250 µL 无水乙醇（96–100%）反复吹打混匀（不要离心，立即上柱）。若样品体积更大，按比例同步加大 Buffer RLT 与乙醇用量，再分批上柱（吸附柱单次上柱上限 700 µL）。可疑细胞残留时可涡旋后静置 1 min 裂解；样品有杂质时先离心收集上清。
纯化能否同时去除基因组 DNA 污染？
本试剂盒在结合条件下硅胶膜会同时结合 DNA 与 RNA，不能单独去除 DNA。若需去除基因组 DNA，建议在结合前用 RNase-free DNase I 在管内酶切（37℃，15–30 min），再上柱纯化；柱上 DNase 处理也可（部分协议支持）。本试剂盒未包含 DNase I，需用户自备。
纯化后的 RNA 完整性能否保证？
本试剂盒的硅胶膜柱对 RNA 选择性强、操作时间短，可有效保护 RNA 不被降解。说明书明确：RNA 在 Buffer RLT 中不会被 RNase 降解（提取过程中），但提取后的处理过程必须使用无 RNase 的离心管或玻璃器皿。关键操作：全程戴干净手套、使用 RNase-free 吸头与 1.5 mL 离心管、洗脱液加在膜正中央、室温静置 3–5 min 再离心。
本试剂盒的核心用途是什么？
本试剂盒采用 RNase-free 吸附柱 + Buffer RLT 裂解结合系统，用于从液体样本中快速回收 RNA，回收的 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly-A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析及分子克隆等下游实验。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
