ED-8522 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液（DTT）

【保存条件】

-20℃保存，有效期12个月

【概述】

本产品为5倍浓缩的蛋白电泳专用上样缓冲液，含有高纯度SDS和强还原剂DTT，旨在彻底消除蛋白质间的结构与电荷差异，保护蛋白质免受热降解，并维持电泳过程中的 pH 环境稳定。

变性机制：

1. SDS (十二烷基硫酸钠)：破坏蛋白二级、三级结构，使其带上高密度负电荷，消除电荷差异。
2. DTT (二硫苏糖醇)：有效还原并断开蛋白质分子内及分子间的二硫键，实现亚单位的彻底分离。

双色追踪系统：
1. 蓝色 (溴酚蓝, Bromophenol Blue)：常规电泳指示前沿，用于追踪样品运行位置。 
2. 粉红色 (派洛宁 Y, Pyronin Y)：具有更快的迁移特性，特别适用于监测 Western Blot 转膜过程中蛋白质向膜（NC/PVDF）的转移情况。

【使用方法】

1. 溶解：室温或37°C水浴解冻并充分混匀。

2. 混合：将样品与5×上样缓冲液按4:1 的比例混合（例如：40 μL蛋白样品加入10 μL缓冲液）。若样品浓度过高，可用ddH₂O预稀释。

3. 变性：混合后，95-100°C加热5–10分钟。

4. 离心：冷却至室温，以 10,000–14,000 rpm 离心 2–5 分钟，取上清液即可进行电泳。

【指示剂迁移参考】

注：在经典Tris-Glycine电泳体系（SDS-PAGE）中，两种染料的迁移位置随凝胶浓度的变化规律如上

【注意事项】

1. 溶解预警：-20°C下SDS可能会析出。使用前请务必确认溶液完全清亮。若有沉淀，可通过37°C水浴促溶并摇匀。 

2. 颜色变化：受DTT及温度影响，冻存状态下溶液可能呈现深棕色，复温溶解后会恢复正常，不影响实验结果。 

3. 上样量控制：加样量过多可能导致条带拖尾或跑样不齐；加样不足则可能导致信号微弱。

4. 示踪染料偏差：由于不同厂家生产的预制胶或配制缓冲液的离子强度差异，染料的绝对迁移位置可能存在±5 kDa的波动。

5. 操作规范：必须在通风处操作，穿实验服并戴一次性手套。