产品描述
产品介绍
本试剂盒可以快速地从动物脂肪组织和细胞总RNA，最多可用于50μg RNA的提取。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品级化妆品等用途。
存储条件
RNAEx ZOL可短期（3-6个月）室温（15℃-25℃）或长期4℃储存，低温有助于延长其效期；其他试剂室温干燥保存可至少稳定12个月。
需要额外准备的材料
1. 无RNase酶的1.5ml离心管
2. 无RNase酶的吸头
3. 干净的手套
4. 低温高速离心机
5. 物理研磨设备
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。
2.RNase-Free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。
3. RNA在RNAEx ZOL中时不会被RNase降解(室温短时间2-4h，-80℃长期约3-6个月保存)。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的无酶离心管或玻璃器皿。
操作步骤：
1. 请根据样品种类进行以下步骤（1a为脂肪细胞，1b为脂肪组织）
1a. 收集脂肪细胞：悬浮细胞可直接300×g离心5min并仔细吸除上清留沉淀待使用；单层贴壁细胞可通过直接裂解法（吸尽培养基留下贴壁细胞，进行步骤2裂解）或胰酶处理法（吸尽培养基留下贴壁细胞，用PBS清洗细胞，吸除PBS后使用含0.10%-0.25%胰酶使细胞脱落，加入含有血清的培养基使胰酶失活后转入1.5ml无酶离心管中300×g离心5min，吸除上清留沉淀待使用）
注意：收集细胞数量不要超过1×107，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致步骤2时细胞裂解不完全，影响RNA与吸附柱的结合，导致RNA的产量降低。
1b. 脂肪组织匀浆裂解处理：将100mg-150mg脂肪组织转移入1.5ml无酶离心管中并加入1mll RNAEx ZOL，使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。直接进行步骤3.
匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。RNAEx ZOL有较多有机试剂具一定毒性，匀浆时注意不要溅到皮肤或眼睛等部位，建议使用防护镜操作。
2. 样品裂解：对于1a中使用直接裂解法的细胞应在培养皿或培养瓶中直接加入1 ml RNAEx ZOL破碎细胞，涡旋或吹匀混合。将裂解液移入无酶1.5ml离心管中。涡旋或移液器混合并确保没有细胞团块可见。
细胞沉淀不完全松动吹匀可能会导致裂解效率低下和RNA产量降低。一般≤3×106个细胞若细胞量较大，可涡旋后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。若不能及时提取，裂解后溶液可至于-80℃储存3-6个月。
3. 将含裂解物离心管置于室温静置2-5min.
该步骤促进核蛋白复合物的解离。若细胞量较少，可不需静置；若细胞量较大，可适当延长静置裂解时间。
4. 向含裂解物离心管中加入200μl Buffer CH, 用力摇动或涡旋15s。
彻底混合对于随后的相分离很重要。
5. 将离心管置于室温静置2-3min.
6. 在4°C下以12,000×g离心15min。
离心后，样品分为3相：上层含有RNA的无色水相；白色的中相间和下层红色有机相。对于脂肪含量特别⾼的组织，红⾊有机相下⽅可能还可⻅⼀层额外的透明相为脂质。⽔相体积约为600 µl。
7. 将上层水相转移到新的无酶1.5ml离心管中，加入约1倍体积无水乙醇，移液器吹打彻底混匀。不要离心，立即进行下一步骤。
加入乙醇后可能会形成沉淀，为正常现象，不会影响提取过程和结果。
8. 将上一步骤混匀后的溶液约700µl转移入RNA吸附柱中并套上2ml收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)室温下离心30s，弃废液。
吸附柱最大上柱量为700μl，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2ml收集管中。
9. 向吸附柱中加入500μl Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE是否按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。
10. 重复步骤9一次。
11. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中, 以最大转速(~13,400×g)离心3min干燥柱膜。
12. 将吸附柱套入新的无酶1.5ml离心管中，并置于无酶的环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。
若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。
13. 向吸附柱膜正中央加入50-100μl RNase-Free Water，盖上盖子室温静置3-5 min。后置于离心机中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 离心3min得到RNA溶液。
RNA洗脱体积不应少于30μl，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-80℃储存。
产品规格
- 规格
- 50T、100T
- 货期
- 现货
存储条件
室温（15℃-25℃）或长期4℃储存，低温有助于延长其效期；其他试剂室温干燥保存
常见问题 (FAQ)
提取的 RNA 应如何保存？
短期 -20℃（1 周内）；长期 -80℃ 分装储存（每管单次用量），避免反复冻融（每次冻融损失 5–10% 完整性）。
从老年或肥胖患者样品提取效果差，如何优化？
老年/肥胖样品脂肪含量更高、细胞数量相对更少。优化：① 加大起始量到 150 mg；② 多次离心彻底去脂层；③ 适当延长匀浆时间（说明书允许匀浆后静置 3–5 min 延长裂解时间，期间颠倒吹匀 2–3 次）；④ 选择内脏脂肪或棕色脂肪（细胞密度高于皮下脂肪）；⑤ 必要时富集间质血管细胞（SVF）后单独提取。
脂滴中富含 RNase 怎么办？
脂滴破裂后 RNase 释放是脂肪 RNA 降解的主要威胁。要点：① 严格冷链：组织取样后 5 min 内液氮速冻；② 全程在 4℃ 或冰上操作；③ 匀浆与 RNAEx ZOL 加入要快（<30 秒），让异硫氰酸胍瞬时灭活 RNase；④ 不要将匀浆液在常温放置 >5 min；⑤ 必要时加 RNase 抑制剂（如 RNase Inhibitor 100 U）于裂解液。RNA 在 RNAEx ZOL 中时不会被 RNase 降解（室温短时间 2–4 h，-80℃ 长期约 3–6 个月保存）。
可以用于哪些下游应用？
适用：① 脂肪代谢相关基因 qRT-PCR（脂联素、瘦素、UCP1 等）；② 脂肪组织 RNA-seq（白色 vs. 棕色脂肪转录组比较）；③ miRNA 表达分析（脂肪相关 miR-103/107、miR-378 等）；④ 单细胞转录组学（处理后的成熟脂肪细胞或 SVF）；⑤ 脂肪干细胞分化研究的基因表达分析。
OD260/OD280 偏低（<1.8）怎么办？
脂肪样品 OD260/OD280 偏低通常源于残留脂质或蛋白。优化：① 上柱前再次离心去除任何残留浮油层；② 重复 Buffer RPE 洗涤一次（说明书规范）；③ 必要时加 500 µL 70% 乙醇额外洗涤；④ 二次柱纯化（用 EK-1103 清理）；⑤ 起始量减少（避免柱过载放大蛋白干扰）。
典型得率与质量？
小鼠白色脂肪组织 100 mg：1–10 µg RNA；棕色脂肪 100 mg（细胞密度更高）：5–25 µg；3T3-L1 成熟脂肪细胞 1×10⁶：3–10 µg。RIN 值在严格按流程操作下可达 ≥7；如果 RIN <6 通常因匀浆温度过高或脂肪去除不彻底。
脂肪组织匀浆有哪些注意事项？
取 100–150 mg 脂肪 + 1 mL RNAEx ZOL研磨匀浆 → 静置 2–5 min（细胞量大可延长）→ 加 200 µL Buffer CH 涡旋 15 s → 室温静置 2–3 min → 4℃ 12,000×g 离心 15 min。关键观察：分相后样品分为 3 相——上层无色水相（约 600 µL）、白色中相、下层红色有机相；对于脂肪含量特别高的组织，红色有机相下方可能还可见一层额外的透明相为脂质，吸取水相时需仔细识别避免污染。水相加约 1 倍体积无水乙醇（移液器吹打彻底混匀，不要离心，立即上柱）。
适用哪些脂肪样品类型？
① 脂肪组织（100–150 mg，加 1 mL RNAEx ZOL 研磨匀浆）；② 脂肪细胞（≤1×10⁷，加 1 mL RNAEx ZOL 裂解）。涵盖：白色脂肪（皮下、内脏、附睾）、棕色脂肪（小鼠肩胛间、人锁骨上）、米色脂肪、3T3-L1 / SVF 类成熟脂肪细胞、脂肪干细胞 ADSC。RNAEx ZOL 有较多有机试剂具一定毒性，匀浆时注意不要溅到皮肤或眼睛等部位，建议使用防护镜操作。
脂肪组织 RNA 提取为什么困难？
脂肪组织面临三大难题：① 高脂含量（>80%），分相后红色有机相下方还会形成额外脂质透明相，需识别并避开；② 低细胞密度，单位重量得率低；③ 储能脂滴中富含 RNase。本试剂盒采用「RNAEx ZOL 大体积裂解 + Buffer CH 助分相 + 硅胶膜柱纯化」工艺，专门为脂肪样品优化，最多可用于 40 µg RNA 的提取。
