产品描述
产品介绍
本试剂盒可以快速地从植物中提取总RNA，不含酚氯仿等有毒试剂。其提取的总RNA纯度高，无蛋白质及其它杂质污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、mRNA差异显示、引物延伸分析、芯片分析、 Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品级化妆品等用途。
存储条件
RNase-free DNase I和Buffer RDD置于2-8℃保存；Buffer RLT可室温（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入β-巯基乙醇的Buffer RLT可室温放置一个月；其他试剂室温干燥保存可至少稳定12个月。
需要额外准备的材料
1. 14.3 M β-巯基乙醇(β-ME) (常规购买商业化商品即为14.3 M)
2. 70%乙醇：RNase-free水配制
3. 无水乙醇（96%-100%）
4. 无RNase酶的1.5ml离心管
5. 无RNase酶的吸头
6. 干净的手套
7. 高速离心机
8. 物理研磨设备
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 操作前在Buffer RLT中加入β-巯基乙醇（β-ME）至终浓度为1%（建议现配现用），如1 ml Buffer RLT中加入10 μl β-巯基乙醇。配好的Buffer RLT可在4℃维持稳定一个月。
2. Buffer RLT在储存时可能会形成沉淀， 如果有沉淀出现，请37℃加热溶解后室温使用。
3. Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。
4. 如果执行可选的柱上DNA酶消化步骤，请制备DNase I储备液：将DNase I干粉（1500 U）溶解在550μl RNase-free ddH2O中，轻柔混匀（禁止涡旋），分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
5. RNase-free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。
6. RNA在Buffer RLT中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的离心管或玻璃器皿。
7. RNA提取操作及离心过程常温进行即可。
操作步骤：
1. 根据情况使用进行以下步骤研磨最多100 mg的植物材料
1a. 立即将组织置于液氮中用研钵和研杵彻底研磨。将组织粉末倒入用液氮提前冷却的无酶2 ml离心管中。让液氮蒸发，但不要使组织解冻。立即继续执行步骤2。
1b. 组织匀浆处理：根据相应研磨设备步骤进行，研磨完成后立即执行步骤2。
2. 加入450 µl Buffer RLT（使用前请检查Buffer RLT是否加入β-巯基乙醇或DTT）最多100 mg组织粉末中，大力充分涡旋。
3. 将离心管放入高速离心机中以最大转速(~13,400×g)离心3分钟。
4. 收集上清并加入新的无酶1.5ml离心管中，同时加入0.5倍体积的无水乙醇混匀。不要离心，混匀后再执行步骤5。
加入乙醇后可能会形成沉淀为正常现象，这不会影响后续的操作步骤。如裂解液吸出400μl则加入200μl无水乙醇混匀。
5. 将步骤4混匀后的溶液转移入RNase-free吸附柱中并套上2ml收集管，≥8000x g（≥10,000rpm）离心1min，弃废液，直至将溶液全部转移完成吸附。
吸附柱最大上柱量为700μl，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2ml收集管中。
6. （可选步骤） 向吸附柱中央加入80μl DNase Ⅰ工作液，室温（15℃-25℃）静置15min。配制DNase Ⅰ工作液：取10μl DNase Ⅰ储备液入新的RNase-free 离心管中，并加入70μl Buffer RDD，轻柔混匀。
注意：DNase Ⅰ 对物理变性特别敏感，所以混匀时请上下倒置轻柔混匀，切勿涡旋。请确认DNase Ⅰ 工作液加入到正中央的柱膜上，否则DNase消化效果会不理想。
7. 向吸附柱中加入700μl Buffer RW1，≥8000×g(≥10,000 rpm) 离心30s，弃废液。
8. 将吸附柱重收套回收集管中，向吸附柱中加入500μl Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm) 离心30s，弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中, 以最大转速(~13,400×g)离心3分钟干燥柱子。
11. 将吸附柱套入新的无酶1.5ml 离心管管中，并置于无酶环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。
若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。
12. 向吸附柱膜正中央加入50-100μl RNase-free Water，盖上盖子室温静置2-3 min。后置于离心机中最大转速(~13,400×g)离心3min得到RNA溶液。
RNA洗脱体积不应少于30μl，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应立即进行下游实验或置于-80℃储存。
常见问题：
1. 柱子堵塞
样品用量太多:减少样品用量，参照说明书中提供用量建议。
样品消化不充分:用液氮或研磨仪充分研磨，延长研磨时间。
2. RNA产量低
试剂准备有误：Buffer RPE没有加入乙醇稀释或体积不准确(乙醇浓度需控制在80%)。
洗脱不充分：洗脱液需加到膜中央，增加洗脱体积或次数。
3. RNA降解严重
样品保存有误：非新鲜现取样品应尽量保存RNA Holder等保存液中。
提取过程耗材及环境污染：提取中使用的吸头、离心管等需经无酶处理，环境应尽量选择无酶环境或洁净环境以减少RNase的影响。
产品规格
- 规格
- 50T、100T
- 货期
- 1-2天
存储条件
2-8℃保存
常见问题 (FAQ)
提取的 RNA 应如何保存？
短期 -20℃（1 周内）；长期 -80℃ 分装储存（每管单次用量 + 备份），避免反复冻融。
木本植物 / 高难度作物如何优化？
木本植物（葡萄、苹果、茶）建议：① 选取嫩叶（新生 1–2 周）而非老叶；② 取材前 24 小时在低光下放置（减少多酚合成）；③ 液氮预处理后球磨破壁（避免氧化）；④ 加 PVP-40（2%）+ β-ME（终浓度 1–2%）；⑤ 必要时改用专用 CTAB-PVPP 法预处理后再上柱；⑥ 处理量减半以避免多糖过载。
可以用于哪些下游应用？
可用于 RT-PCR、Real Time RT-PCR、mRNA 差异显示、引物延伸分析、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。。
典型得率？
易处理植物（拟南芥、烟草嫩叶）100 mg：50–200 µg；中等难度（水稻幼苗、玉米叶）100 mg：30–100 µg；难处理（葡萄、茶、棉花叶）100 mg：10–50 µg；种子样品 50 mg：5–30 µg。RIN 值在严格冷链 + β-ME 操作下可达 ≥7。
常见问题排查（说明书故障排查表）
① 柱子堵塞——样品用量太多（减少样品用量，参照说明书提供用量建议）/样品消化不充分（用液氮或研磨仪充分研磨，延长研磨时间）；② RNA 产量低——试剂准备有误（Buffer RPE 没有加入乙醇稀释或体积不准确，乙醇浓度需控制在 80%）/洗脱不充分（洗脱液需加到膜中央，增加洗脱体积或次数）；③ RNA 降解严重——样品保存有误（非新鲜现取样品应尽量保存 RNA Holder 等保存液中）/提取过程耗材及环境污染（提取中使用的吸头、离心管等需经无酶处理，环境应尽量选择无酶环境或洁净环境以减少 RNase 的影响）。
洗脱液发黄或棕色说明什么？
颜色异常提示多酚污染。处理：① 在 Buffer RLT 中预加 1–2% PVP-40 / PVPP（吸附多酚）；② 加 β-ME 阻断多酚氧化（说明书已要求）；③ 上柱前 12,000×g 离心 3 min 去除任何粘稠残留；④ 重复 Buffer RPE 洗涤一次（说明书规范）；⑤ 顽固样品改用专用 RNeasy PowerPlant 类去抑制剂工艺。注意：发黄 RNA 即使 OD260/OD280 看似正常，也可能 PCR 抑制。
植物组织匀浆步骤有哪些关键？
关键 = 液氮研磨成细粉：① 液氮预冷研钵中将 ≤100 mg 组织研磨至白色细粉（无可见碎片）；② 立即将粉末转入预冷的无酶 2 mL 离心管（不要让组织解冻）；③ 加 450 µL Buffer RLT（已加 β-ME），大力涡旋；④ 以最大转速（~13,400×g）离心 3 min；⑤ 收集上清入新管，加 0.5 倍体积无水乙醇混匀（注意：如吸出 400 µL 上清，则加 200 µL 无水乙醇）。说明书允许使用研磨设备替代液氮研磨。
植物 RNA 提取盒的核心特点是什么？
本试剂盒采用「Buffer RLT 高盐裂解 + 离心去碎渣 + 0.5 倍乙醇调节 + 硅胶膜柱纯化 + 内含 DNase I 柱上消化」组合工艺，不含酚氯仿等有毒试剂。20.2 Q：适用哪些植物样品类型？ 最多 100 mg 植物组织。涵盖：① 双子叶植物嫩叶、根、花、果实；② 单子叶植物（水稻、玉米、小麦等禾本科作物）；③ 种子（吸胀种子比干种子得率高）；④ 苔藓、蕨类、藻类。不适合处理样品：高水平多酚的茶、咖啡、葡萄、苹果；高粘多糖的香蕉、马铃薯块茎；高油脂的花生、芝麻种子。
